Regulatorische RNAs in Prokaryoten Teil I Flashcards

1
Q

Regulatorische RNAs helfen der Zelle sich an wechselnde Lebensräume anzupassen. Was könnten Beispiele von wechselenden Lebensräume sein?

A

z.B. Temperatur, pH, Druck, Osmolarität, Nährstoffe, Pathogene, Sauerstoff

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2
Q

Wie sind Sekundärstrukturen von RNAs gebildet?

A

Einzelsträngige RNA kann intramolekular wechselwirken und Strukturmotive ausbilden

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3
Q

Was sind Beispiele von Sekundärstrukturen von RNAs?

A

single strand, double strand, single nucleotide bulge, three nucleotide bulge (bulge loop), hairpin (stem loop), symmetric internal loop, asymmetric internal loop, two stem junction, three stem junction, four stem junction

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4
Q

Wie sind Tertiärstrukturen von RNAs gebildet?

A
  • Wasserstoffbrückenbindungen zwischen Basenpaaren sowie Basenstapelung benachbarter Basenpaare tragen überwiegend zur RNA Stabilität bei
  • RNA Moleküle können räumliche Strukturen einnehmen
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5
Q

Was sind Beispiele von Tertiärstrukturen von RNAs?

A

Koaxiale Basenstapelung (Kollinearisierung zweier stems), kissing hairpin, Pseudoknoten – 3 Typen: 1. H-Typ: hairpin loop; I-Typ: internal loop; B-Typ: bulge loop

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6
Q

Was sind die 3 Abschnitte einer bakteriellen Riboswitch kontrollierten mRNA?

A
  1. 5‘ untranslatierte Region (5‘ UTR)
  2. der Protein kodierende Bereich beginnt mit dem Startkodon (AUG) und endet mit einem Stoppkodon (hier UAA, andere UAG, UGA)
  3. 3‘ UTR
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7
Q

Wo genau liegen Riboswitches im bakteriellen mRNAs?

A

im 5‘ UTR bakterieller mRNAs

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8
Q

Sind Riboswitches in bakteriellen mRNAs cis oder trans agierende RNA Elemente?

A

cis agierende RNA Elemente

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9
Q

Sind Riboswitches in bakteriellen mRNAs konserviert?

A

Bilden komplexe RNA Strukturelemente, die häufig evolutionär konserviert sind

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10
Q

Sind die durch Riboswitches gebildeten komplexen Sturkturelemente liganden-spezifisch?

A

Binden hochspezifisch nieder molekulare Liganden

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11
Q

Worauf berüht sich die Spezifität zu Liganden bei Riboswitches?

A
  • Purin bindende Riboswitches weisen die gleiche 2D- & 3D- Struktur auf, können aber sehr spezifisch zwischen Guanin oder Adenin diskriminieren
  • Die Spezifität beruht auf einem einzigen Pyrimidin Nukleotid
    –> Adenin-Riboswitch am Uracil 74 & Guanin-Riboswitch am Cytosin 74
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12
Q

Was ist die Hauptfunktion von Riboswitches?

A
  • Regulation der Genexpression durch Liganden induzierte Bildung alternativer Strukturen
  • Riboswitch regulierte Genexpression = Riboregulation
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13
Q

Was sind die wesentlichen Strukturelemente von Riboswitches?

A
  • Aptamer Domäne (AD; Sensor)
  • Expressionsplattform (EP)
  • Switching-Sequenz (SS)
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14
Q

Wofür sind die Aptamer Domäne (AD)?

A
  • Bindung des Liganden (L)
  • Benötigen ihren Liganden für korrekte Faltung -> induced-fit-Bindung
  • ~35-200 nt lang
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15
Q

Wofür ist das Expressionsplattform (EP)?

A
  • Auslösung regulatorischer Signale
  • Modulation der Transkription oder Translation
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16
Q

Wofür ist das Switching-Sequenz (SS)?

A

Liganden-freie und -gebundene Konformationen sind sich ausschließende Strukturen, die durch die Switching-Sequenz (SS) vermittelt werden

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17
Q

Welche Elemente des Riboswitches interagieren zusammen, wenn ein Ligand nicht bindet am AD?

A

(-L): Basenpaarung zwischen EP und SS

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18
Q

Welche Elemente des Riboswitches interagieren zusammen, wenn ein Ligand bindet am AD?

A

(+L): Basenpaarung zwischen AD und SS

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19
Q

Was sind Kategorien von Stoffen, die Bekannte Riboswitch-Liganden sind?

A
  1. Coenzyme
  2. Nukleobasen & Derivate
  3. Aminosäuren
  4. Zucker
  5. Ionen
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20
Q

Was sind Beispiele für Coenzyme, die Bekannte Riboswitch-Liganden sind?

A
  • Vitamin B12
  • Thiaminpyrophosphat (TPP), B1
  • Flavinmononukleotid (FMN), B2
  • Tetrahydrofolsäure (THF), B9
    [Diese sind Vitamin-Derivate]
  • S-Adenosylmethionin (SAM)
  • S-Adenosylhomocystein (SAH)
  • Molybdän-Cofaktor (MoCo)
    [Alle enthalten RNA Komponente]
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21
Q

Was sind Beispiele für Nukleobasen & Derivate, die Bekannte Riboswitch-Liganden sind?

A
  • Guanin
  • Adenin
  • preQ1 (Queuosin Vorläufer)
  • zyklisches di-GMP
    [Alle enthalten RNA Komponente]
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22
Q

Was sind Beispiele für Aminosäuren, die Bekannte Riboswitch-Liganden sind?

A
  • Glycin
  • Lysin
  • Glutamin
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23
Q

Was sind Beispiele für Zucker:, die Bekannte Riboswitch-Liganden sind?

A

Glukose-6-phosphat

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24
Q

Was sind Beispiele für Ionen, die Bekannte Riboswitch-Liganden sind?

A
  • Mg2 +
  • Mn 2+
  • F-
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25
Q

Was sind die biologischen Funktionen von Riboswitches?

A
  1. Hauptsächlich Regulation der Expression von Genen, die für Proteine der Biosynthese und des Transports kodieren
  2. Regulation der Verfügbarkeit von Coenzymen
  3. Aktivierung von Stressantworten (z.B. Überleben bei hoher Salz-Konzentration)
  4. Regulation diverser zelluläre Funktionen über den sekundären Botenstoff zyklisches di Guanosinmonophosphat (c-di-GMP), z.B. reduziert Flagellen-vermittelte Motilität und fördert die Bildung von Biofilmen
  5. Häufig negative Regulation (off-switch) durch feedback loops (Feedback inhibition), seltener aktivierend (on-switch)
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26
Q

Was ist eine Riboswitch-Familie und was sind Beispiele dafür?

A
  • Gruppe von RNAs, die den gleichen Liganden binden
  • z.B. SAM (S-Adenosylmethionin)-bindende Riboswitch-Familie
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27
Q

Was sind Riboswitch-Klassen und was sind Beispiele dafür?

A
  • unterscheiden sich in ihrer 2D und 3D Struktur
  • z.B. SAM-I (4-stem junction), SAM-II ( pseudoknot ), SAM-III (3-stem junction)
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28
Q

Was sind Funktionen von SAM-Riboswitches?

A
  1. Regulation
  2. SAM-Biosynthese und -Transport
  3. Biosynthese von Methionin & Cystein
  4. Schwefelstoffwechsel
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29
Q

Was passiert, wenn keinen Liganden am Riboswitch – Transkriptionstermination (off-switch) bindet?

A
  • Basenpaarung zwischen SS und EP
  • Ausbildung einer Anti-Terminator-Haarnadel
  • Fortsetzung der Transkription
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30
Q

Was passiert, wenn einen Liganden am Riboswitch – Transkriptionstermination (off-switch) bindet?

A
  • Basenpaarung zwischen SS und AD
  • Ausbildung einer Terminator-Haarnadel
  • Abbruch der Transkription
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31
Q

Was passiert, wenn keinen Liganden am Riboswitch – Translationsinhibition (off-switch) bindet?

A
  • Basenpaarung zwischen SS und EP
  • Ausbildung eines Anti-Sequestors
  • RBS bleibt zugänglich
  • Translation
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32
Q

Was passiert, wenn einen Liganden am Riboswitch – Translationsinhibition (off-switch) bindet?

A
  • Basenpaarung zwischen SS und AD
  • Ausbildung eines Sequestors
  • Maskierung der RBS
  • Inhibition der Translation
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33
Q

Was ist die biologische Funktion von Lysin-Riboswitch (Off-switch)?

A

Regulation der Lysin-Biosynthese und des Transports

34
Q

Was sind Besipiele von Lysin-Riboswitch (Off-switch)?

A
  • Transkriptionstermination in Thermotoga maritima (Gram -)
  • Translationsinhibition in Escherichia coli (Gram -)
35
Q

Können Riboswitches aktivierend auf Transkription oder Translation wirken?

A

Ja, z.B. Adenin-Riboswitch (On-switch)

36
Q

Was sind Besipiele von Adenin-Riboswitch (On-switch)?

A
  • Transkription in Bacillus subtilis (Gram +)
  • Translation in Vibrio vulnificus (Gram -)
37
Q

Wie funktionieren Adenin-Riboswitch (On-switch)?

A
  • Purin Efflux Pumpe (pbuE)
  • Hohe Adenin-Konzentration führt zur Transkription bzw. Translation von pbuE
  • Ausscheidung von Adenin
38
Q

Was macht der GlmS-Riboswitch speziell?

A
  • Es ist gleichzeitig auch ein Ribozym
  • Es spielt die Rolle einens Sensors und katalytischen Regulators
39
Q

Welche Bakterien regulieren die GlmS-Genexpression durch ein Riboswitch-Ribozym?

A

Gram + Bakterien (z.B. Bacillus subtilis)

40
Q

Was ist der Mechanismus des Riboswitch-Ribozyms für die Regulation der GlmS-Expression in Bakterien?

A
  • Bindung von GlcN6P führt zur Selbst Spaltung der mRNA -> 5‘-Hydroxyl entsteht
  • Erkennung des neuen 5‘-OH durch RNase J1 -> Degradation der mRNA
41
Q

Finden sich auch Riboswitches in Archaeen und Eukaryoten?

A
  • Bakterien: Viele
  • Archaeen: Fluorid-responsiver Riboswitch in hyperthermophilen Archaeen
  • Eukaryoten: Thiaminpyrophosphat-responsiver Riboswitch in Hefen, Algen & höheren Planzen
42
Q

Woran binden die Riboswitches in Eukaryoten?

A

Thiaminpyrophosphat (TPP)

43
Q

Wo kommen Thiaminpyrophosphat (TPP)
bindende Riboswitches vor? Was ist ein Beispiel?

A
  • Vorkommen: Pilze, Algen und höhere Pflanzen
  • Beispiel: Arabidopsis thaliana (Ackerschmalwand)
44
Q

Wo liegt der Riboswitch in Eukaryoten?

A

im 3‘ UTR

45
Q

Was ist der Mechanismus von Riboswitches in Eukaryoten?

A

Alternatives Splicing, führt zur Degradation der mRNA

46
Q

Was ist die Funktion von Thiaminpyrophosphat (TPP)
bindende Riboswitches?

A

Regulation der Expression von Thiamin C-Synthetase (THIC)

47
Q

Was passiert, wenn der Riboswitch TPP-frei ist?

A
  • Basenpaarung mit mRNA Region stromaufwärts vom Poly(A)-Signal
  • Maskierung der 5‘ Splice Stelle
  • Transkription stoppt nach Poly(A)-Signal
  • Polyadenylierung stabilisiert mRNA
  • Effiziente Translation
48
Q

Was passiert, wenn der Riboswitch TPP-gebunden ist?

A
  • Demaskierung der 5‘ Splice Stelle
  • Alternatives Splicing möglich
  • Verlust des im Intron liegenden Poly(A)-Signals
  • Keine Polyadenylierung
  • Degradierung der mRNA
49
Q

Was sind bakterielle RNA-Thermometer?

A
  • Bakterien können die Umgebungstemperatur messen
  • Temperatursensoren sind kleine RNA-Elemente
50
Q

Wo liegen bakterielle RNA-Thermometer?

A

in der 5‘ Region der zu regulierenden mRNA

51
Q

Was ist die Funktion von bakterielle RNA-Thermometer?

A
  • Kontrolle der Expression verschiedener Stress Gene (heat-shock Gene, cold-shock Gene und Virulenzgene)
  • Regulation der Translation
52
Q

Was passiert in bakterielle RNA-Thermometer bei niedriger (optimaler) Temperatur?

A

Ribosomenbindestelle (RBS) und Startkodon (AUG) sind durch Basenpaarung mit dem 5‘ UTR der mRNA nicht zugänglich -> Maskierung von RBS/AUG

53
Q

Was passiert in bakterielle RNA-Thermometer bei hoher Temperatur (Hitzestress)?

A

Aufschmelzen der Struktur im 5‘ Bereich -> RBS und AUG zugänglich -> Bindung der ribosomalen Untereinheiten

–> »Gekoppeltes System: Sensor und Regulator
–> »Direkte Reaktion auf Änderungen der Umgebungstemperatur

54
Q

Was für ein System ist in den bakteriellen RNA-Thermometer zu beobachten? Und wozu hilft das?

A
  • Gekoppeltes System: Sensor und Regulator
  • Direkte Reaktion auf Änderungen der Umgebungstemperatur
55
Q

Wie ist der Aufschmelzungsmechanismus von Heat-shock RNA-Thermometer?

A

Graduelle Erhöhung der Umgebungstemperatur -> graduelles Aufschmelzen der gepaarten Region
* Reißverschluß zipper ähnlicher Mechanismus

56
Q

Was sind ROSE-Elemente?

A
  • ROSE (Repression Of heat-Shock gene Expression)
  • Sequenz von 60 bis >100 nt
57
Q

Wo auf dem Genom sind ROSE-Elemente zu finden?

A

im 5‘ Bereich

58
Q

Wo kommen ROSE-Elemente vor?

A

verschiedener Hitzeschock Operons in Gram
negativen Bakterien (z.B. Rhizobia, Escherichia und Salmonella)

59
Q

Was ist die Hauptfunktion von ROSE-Elemente?

A

Regulation der Genexpression von mind. 5 heat-shock Operons (auch σ 32)

60
Q

Woran sind die ROSE-Elemente erkennbar?

A

Temperatur-sensibler 3‘-Hairpin mit weniger GC-Inhalt

[Temperatur-stabile 5‘-Hairpins (↑GC!) -> Sichern korrekte Faltung des labilen 3‘-Hairpin während der Transkription]

61
Q

Was ist für das graduelle Aufschmelzen der Temperatur-sensiblen 3‘-Haarnadel besonders wichtig in ROSE-Elementen?

A

Nicht-Watson-Crick (N-WC) Basenpaare (Bp)

62
Q

Wie sind die N-WC Bp bei 37˚C?

A
  • Triple Basenpaarung, U96 bildet je eine Wasserstoffbrückenbindung mit C80 und U81 aus
  • N-WC-Bp U79-U97
63
Q

Wie sind die N-WC Bp bei 42˚C?

A
  • N-WC Bp G83-G94
  • Temperatur labile Wobble-Paarung zwischen G72 und U104 im AUG
64
Q

Was ist die Funktion eines Virulenz-RNA-Thermometers?

A
  • 37˚C, ein Signal für pathogene Bakterien zur erfolgreichen Invasion in einen Warmblüter
  • Induktion der Expression von Virulenzfaktoren
65
Q

Was ist die Funktion von Virulenzfaktoren in Virulenz-RNA-Thermometer? Was sind Beispiele davon?

A
  • Verhelfen dem Bakterium sich im Wirt zu etablieren und erhöhen die Pathogenität des Krankheitserregers
  • Beispiele:
  • Adhäsine (Pili, Membranproteine): Anhaftung an Zielzelle
  • Antiphagozytosefaktoren: Verhindern Phagozytose durch Fresszellen
  • Invasionsfaktoren: Ausbreitung des Erregers im Gewebe
  • Exotoxine: Membranschädigung, Proteinbiosynthese-Inhibition
66
Q

Was ist ein Beispiel von Bakterien, die den Virulenz-RNA-Thermometer enthalten?

A

Listeria monocytogenes (Gram+)

67
Q

Wo kommen Listeria monocytogenes (Gram+) vor?

A

ubiquitär, in Gewässer und Böden, auf Pflanzen

68
Q

Was sind die üblichen Wirtsorganismen von Listeria monocytogenes (Gram+)?

A

Schalentiere, Fische, Vögel, Säugetiere

69
Q

Was ist die Wachstumstemperatur für Listeria monocytogenes (Gram+)?

A

zwischen 4˚C bis 40˚C, Optimum bei 30-37˚C

70
Q

Wie werden Listeria monocytogenes (Gram+) häufig infeziert?

A

häufig durch verdorbene Lebensmittel (Fisch, Fleisch, Milch, vorgeschnittener Salat)

71
Q

Was sind die Erkrankungen durch eine Listeria monocytogenes (Gram+) Infektion?

A
  • meist leichte Symptome im Magen-Darm-Bereich wie Übelkeit, Erbrechen, Durchfall
  • selten Hirnhautentzündung, pränatale Infektionen, Fehlgeburten
72
Q

Was ist PrfA?

A

ein Transkriptionsaktivator für Virulenzgene

73
Q

Wo ist PrfA zu finden?

A

im 5‘-Region

74
Q

Was passiert in Virulenz-RNA-Thermometer bei einer Temperatur von 37˚C?

A
  • Temperaturerhöhung bewirkt Aufschmelzen der Sekundärstruktur im Bereich der RBS und AUG
  • Ribosomenbindung möglich
  • Expression des Transkriptionsfaktors PrfA
  • PrfA-vermittelte Aktivierung der Expression der Virulenzgene
75
Q

Was sind die Aufgaben von dem PrfA-Virulenz-Regulon?

A
  • Eindringen in die Wirtszelle
  • Entweichen aus Phagosomen
  • Intrazelluläre Vermehrung
  • Aktin-basierte Ausbreitung von Zelle zu Zelle
76
Q

Was passiert bei einer Temperaturerniedrigung in Cold shock RNA-Thermometer?

A
  • Erniedrigte Membranfluidität
  • Erniedrigte Transkription und Translation durch Stabilisierung von Sekundärstrukturen
  • Ineffiziente Faltung von Proteinen
  • Verringerte Enzymaktivität
77
Q

Wann werden die cold shock-Proteinen (CSP) expremiert?

A

cold shock-Protein A (CspA) wird in E. coli unter cold shock-Bedingungen (von 37˚C auf 10˚C) exprimiert

78
Q

Was sind die Funktionen von CspA?

A
  • reguliert die Translation als auch die Stabilität der cspA-mRNA
  • RNA Chaperon, bindet an einzelsträngige RNA
  • Verhinderung kältestabilisierte Sekundär und Tertiärstrukturen in der Ziel RNA
  • Adaption an niedrige Temperaturen, Aufrechterhaltung von Transkription und Translation
79
Q

Wie läuft die Transkription und Translation bei 37˚C in Bakterien mit Cold shock RNA-Thermometer?

A
  • SD und AUG nicht zugänglich
  • keine Translation
  • mRNA sehr instabil
  • (Halbwertzeit der mRNA: ~20 Sekunden)
80
Q

Wie läuft die Transkription und Translation bei 10˚C in Bakterien mit Cold shock RNA-Thermometer?

A
  • Ko-transkriptionelle Faltung der mRNA führt bei Erniedrigung der Temperatur zu einer anderen Struktur, wodurch die mRNA deutlich stabilisiert wird
  • (Halbwertzeit der mRNA: ~30 Minuten)
  • SD zugänglich, effiziente CspA Translation
  • Stabilisierung des Thermosensors durch einen Pseudoknoten
81
Q

Was ist der Unterschied zwischen heat shock und cold shock RNA-Thermometer?

A
  • Heat shock:
    Erhöhung der Umgebungstemperatur führt zum graduellen Aufschmelzen der basengepaarten Region
  • Cold shock = RNA switch:
    Abhängig von der Umgebungstemperatur können zwei sich gegenseitig ausschließende Strukturen gebildet werden (off-on)
    Diese Strukturen können aber nicht wie echte Riboswitches ineinander umgewandelt werden (ko- transkriptionelle Faltung der mRNA)