Protéines Recombinantes Flashcards
À quel endroit de la cellule les protéines recombinante agissent-elles?
À l’extérieur de la cellules
À quel niveau les protéines recombinantes agissent-elles?
- Ligand
- Anticorps neutralisant
- Anticorps qui empêche l’hétérodimérisation des récepteurs
- Anticorps qui empêche l’activation des récepteurs tyrosine kinase
Les régions codantes dérivent de quoi?
Plusieurs milliers de gènes clonés
Qu’est-ce que l’adalimumab?
Un anticorps intégralement humain neutralisant le TNF-Alpha
Pourquoi développer des protéines recombinantes?
Les produits dérivés des animaux provoquent des réactions immunitaires
Quelles sont les avantages des protéines recombinantes?
- Production à grande échelle
- Propriétés uniques (anticorps)
Quel est le principe de l’ADN recombinant?
Un fragment ADN d’intérêt isolé à partir d’un organisme est cloné dans un vecteur (fragment d’ADN capable de réplication autonome et de lire l’information du transgène).
Quelles sont les polymérase qui nous permettent de se servie de l’ARN comme matrice?
Les réverses transcriptases
Les réverses transcriptases sont disponibles commercialement sous quelles formes recombinantes?
AMV et MuLV
Comment définit-on la protéine recombinante?
Les protéines recombinantes sont ainsi qualifiées dans la mesure où elles sont produites par des cellules dont l’ADN a été modifié (recombiné) par recombinaison génétique.
Qu’elles sont les éléments nécessaires à la production d’une protéine recombinante?
1- L’emploi d’un vecteur d’expression (transporteur génétique d’un gène d’intérêt codant pour la protéine recherchée
2- l’utilisation d’une cellule hôte
3- Une phase de production
4 - Séparation et extraction de la protéine du milieu de culture et une purification de celle-ci
Quelles sont les grandes lignes de la production d’une protéine recombinante?
• Identification de la source (tissu/cellules) responsable de la production du biologique (la protéine recombinante)
• Trouver la séquence ARNm (Blue print)
• Design oligonucléotides; RT-PCR (production d’ADNc); PCR (amplification de l’ADNc sous forme double-brin (ds-ADNc) et prêt au clonage);
• Clonage de l’ADNc dans un vecteur d’expression choisi et séquençage (on veut que cette recombinaison génétique entre l’insert et le vecteur produise une construction plasmidique permettant la production d’une protéine fonctionnelle)
• Amplification construction plasmidique
• Insertion de la construction dans l’hôte (transformation/transfection)
• Production de la protéine par l’hôte
• Purification de la protéine recombinante
Quels sont les inconvénient de la production de l’insuline recombinante?
- Coute cher pour un rendement faible
- Allergies
-Virus
Quelles est le processus naturel de biosynthèse de l’insuline (préproinsuline à insuline)?
1- Production de la préproinsuline au niveau du RE
2- Oxydations des résidus cystéines et clivage par protéases
3- Stockage de l’insuline dans des vésicules de sécrétions dans des cellules spécialisées du pancréas
Où sont présentes les protéines et les ARNm de l’insuline?
Les cellules beta (îlots de Langerhans) du pancréas
