POP 5 : CONTAGEM MICROBIANA E PESQUISA DE PATÓGENOS Flashcards
Como deve ocorrer a preparação da amostra do insumo farmacêutico para contagem de microorganismos?
1- Após recebimento dos produtos, os mesmos serão colocados em recipientes
apropriados com solução desinfetante (álcool 70% ou cloreto de benzalcônio 0,25%) por no
mínimo 30 min; as amostras terão de ficar imersas na solução desinfetante.
2- Adicionar 10g ou 10 mL (ou peso adequado) da matéria-prima em caldo caseína-soja
adicionado dos neutralizantes polissorbato de sódio e lecitina de soja
3- Para matérias-primas
preparar a diluição 10-1.Incubar a diluição 10-1 entre 30-35º por 24 horas.
Para produto acabado ou em processo :
3.1 -Adicione 10g ou 10mL da amostra (produto em processo ou produto acabado) em 90 mL de
caldo caseína-soja adicionado dos neutralizantes polissorbato de sódio e lecitina de soja
(diluição 10-1). Preparar diluições sucessivas até 10-2 com tampão pH 7,2, utilizando
alíquotas de 1,0 mL do caldo caseína-soja para 9,0 mL tampão pH 7,2.Incubar a diluição 10-1
entre 30-35°C por 24 horas.
Existe algum procedimento diferente para contagem microbiana em formas farmacêuticas líquidas?
Sim, caso a natureza do fármaco seja de inibição do crescimento microbiano, então será necessário fazer mais diluições, até 10 -3
Como deve ocorrer o procedimento de contagem de microorganismos das amostras já preparadas ?
1-Transferir alíquotas de 1,0 mL das amostras preparadas para 2 placas de Petri para cada
diluição 10-1 e 10-2 (duplicata).Obs: Para matérias-primas utilizar apenas a diluição 10-1 para
a realização da contagem microbiana
2- Adicionar 15-20mL de Ágar caseína-soja (TSA) entre 45-50ºC a cada uma das duas placas
3-o Homogeneizar com movimentos giratórios leves, deixar em repouso com a tampa semiaberta para que o meio solidifique.
4- Incubar entre 30-35°C por 5 dias para bactérias;
5- Repetir a operação acima com as duas placas remanescentes utilizando Ágar SabouraudDextrose. Incubar as mesmas entre 20-25°C por 7 dias, para fungos e leveduras
6- Ao final do período de incubação, fazer a leitura das colônias em um contador de colônias e registrar no RQ apropriado.
7- Para contagem total das bactérias mesofílicas, contar o número total de colônias obtidas em
cada uma das 02 placas contendo o meio Ágar caseína-soja e multiplicar pelo fator de
diluição.
o Para contagem de fungos e leveduras, contar o número total de colônias obtidas em cada
umas das 02 placas contendo o meio Ágar Sabouraud-Dextrose, determinar a média das 02
placas e multiplicar pelo fator de diluição.
Quais os tipos de método de contagem de microorganismos ?
Filtração por membrana
Contagem em placas
método do número mais provável
De que formas o método de contagem em placa pode acontecer ?
Método de profundidade
Método de superfície
Como deve ocorrer o processo de pesquisa por E. coli nos insumos/produtos farmacêuticos?
1- Utilizar a amostra do produto farmacêutico preparada na diluição 10-1 (10 g ou mL
do produto para 90mL de Caldo Casoy com neutralizante, e incubada a 30-35°C por 24 horas.
2- Com auxílio de pipeta graduada estéril, transferir 1 mL da diluição 10-1 para 100 mL de caldo Mac
Conckey.
3-Incubar numa estufa a 43±1°C por 48 horas. Verificar se há crescimento microbiano no meio
4-Com o auxílio de uma alça de platina transferir uma amostra do caldo Mac Conckey para uma placa de Petri com meio Ágar Mac Conckey.Tampar a placa, invertê-la e incubar a 30-35°C por 72 horas.
5- Se houver crescimento de colônias com as características de E. coli, deve-se fazer uma pesquisa para ter certeza
Quais as características da colônia de E. coli em ágar Mac Conckey?
Colônias rosadas a vermelhas, geralmente não
mucosas, halo turvo ao redor da colônia
Como deve ocorrer o procedimento de pesquisa por Salmonella sp. em produtos/insumos farmacêuticos ?
1- Utilizar a amostra do produto farmacêutico preparada na diluição 10-1 (10 g ou mL
do produto para 90mL de Caldo Casoy com neutralizante, e incubada a 30-35°C por 24 horas.
2- Com o auxílio de pipeta automática, transferir 0,1 mL da diluição 10-1 para 10 mL de Caldo
Rappaport Vassiliadis.Incubar numa estufa a 30-35°C por 24 horas. Verificar se há crescimento
microbiano no meio
3- Com auxílio de uma alça de platina transferir uma amostra do caldo Rappaport Vassiliadis para uma
placa de Petri com meio Ágar Xilose Lisina Desoxicolato (XLD).Tampar a placa, invertê-la e incubar
a 30-35°C por 48 horas.
4- Caso haja crescimento de colônias com as caracterpisticas da salmonella, iniciar investigação por coloração de gram, para confirmar
Quais são as características das colônias de Samonella ?
Colônias vermelhas, bem desenvolvidas,
com ou sem centro negro.
Como deve ser o procedimento de pesquisa por Pseudomonas aeruginosa em insumos/produtos farmacêuticos ?
1- Utilizar a amostra do produto farmacêutico preparada na diluição 10-1 (10 g ou mL
do produto para 90mL de Caldo Casoy com neutralizante, e incubada a 30-35°C por 24 horas.
2- Com auxílio de uma alça de platina transferir uma amostra de caldo caseína-soja diluição 10-1 para uma placa de petri com meio Ágar Cetrimida.Tampar a placa, invertê-la e incubar a 30-35°C por 72
horas.
3- Se houver crescimento de colônias caracterizadas como pseudomonas, prosseguir investigação com teste de coloração de gram
Quais as características de colônias de Pseudomonas aeruginosa?
Colônias verdes a amarelas com fluorescência na luz UV
Como deve ocorrer o procedimento de investigação por Staphylococcus aureus em produtos/insumos farmacêuticos ?
1- Utilizar a amostra do produto farmacêutico preparada na diluição 10-1 (10 g ou mL
do produto para 90mL de Caldo Casoy com neutralizante, e incubada a 30-35°C por 24 horas.
2- Com auxílio de uma alça de platina transferir uma amostra de caldo caseína-soja diluição 10-1 para uma placa de petri com meio Ágar Sal Manitol.Tampar a placa, invertê-la e incubar a 30-35°C por 72
horas.
3- Caso haja crescimento de colônias com características de S. aureus, prosseguir com coloração de gram
Quais as características das colônias de Staphylococcus aureus?
Colônias amarelas ou brancas com halo amarelo
Como deve ocorrer o processo de pesquisa por Candida albicans em insumos/produtos farmacêuticos ?
1- Utilizar a amostra do produto farmacêutico preparada na diluição 10-1 (10 g ou mL
do produto para 90mL de Caldo Casoy com neutralizante, e incubada a 30-35°C por 24 horas.
2- Com auxílio de uma alça de platina transferir uma amostra de caldo caseína-soja diluição 10-1 para
uma placa de petri com meio Ágar Sabouraud Dextrose. Tampar a placa, invertê-la e incubar a 30-
35°C por 72 horas
3-Caso haja crescimento de colônias com características de Candida albicans prosseguir com coloração de gram
Quais as características de colônias de candida albicans ?
Colônias brancas, mucosas, odor fermentado
