POP 2 : PREPARO DE MEIOS DE CULTURA E SOLUÇÕES

Question 1

Quais os principais objetivos de se produzir um meio de cultura?

Answer 1

A preparação dos meios de cultura é realizada para:
* Ensaios microbiológicos;
* Manutenção das culturas de microrganismos

Question 2

Quais os tipos de meio de cultura?

Answer 2

Os meios de cultura dividem-se primeiramente em meios sólidos, aqueles que contém agar, e meios liquidos, sem
agar, chamados de caldos (broth).

Question 3

Como os meios de cultura podem ser preparados em geral?

Answer 3

Ambos os meios são preparados com água purificada, aquecidos até que se
dissolvam completamente (fervura) e posteriormente esterilizados por autoclavagem a 121°C por 15 minutos.

Question 4

Qual a diferença entre o meio sólido e líquido no que concerne ao crescimento dos microorganismos ?

Answer 4

Nos meios sólidos o crescimento pode ser interrompido por exaustão de nutrients e/ou ressecamento das colônias,
devendo realizar-se a transferência de colônias para novo meio. No entanto estes meios permitem a individualização
das colónias. Os meios líquidos permitem melhor difusão de metabólitos, mas não o isolamento de colónias.

Question 5

Como os meios de cultura podem ser classificados quanto ao grau nutritivo ?

Answer 5

Meios nutritivos gerais: contendo elementos minerais e metabólitos orgânicos. Ex. Agar Nutriente, Caldo
Nutriente
* Meios enriquecidos: contendo produtos biológicos (sangue, soro), vitaminas. Ex: Agar Sangue, meio geral
não selectivo.
* Meios complexos: contêm todos os ingredientes necessários para o crescimento de um determinado
microrganismo, mas não se conhecem as quantidades exatas de todos os componentes.
* Meios definidos: aqueles em que se sabe a concentração exata dos seus componentes. A composição
destes meios varia consoante os requisitos dos organismos a cultivar.

Question 6

Como os meios de cultura podem ser classificados quanto ao seu objetivo?

Answer 6

Seletivos, meios para seleção de determinados grupos de bactérias, os quais contêm substâncias que
inibem o crescimento de outras bactérias distintas daquelas que nos interessam (meios sólidos). Ex: Agar
Pseudomonas, Tiossulfato-citrato-bilis-sacarose (TCBS) para Vibrio, Agar MacConkey para coliformes.
* Diferenciais, para identificação de microrganismos, meios sólidos com a composição quimica adequada
para evidenciar uma caracteristica bioquimica (meios sólidos). Ex: MacConkey Agar pa isolamento de
coliformes, patogénios intestinais na água produtos derivados do leite, e espécimens biológicos. Neste agar
após 24h a 35°C as colónias de Escherichia coli são vermelhas e mucóides, enquanto que as colónias de
Salmonella e Shigella são brancas.
* Indicadores, meios liquidos, com a mesma função dos diferenciais, servem para evidenciar uma
caracteristica bioquímica, mas não para separar as colónias positivas e as negativas. O pH do meio é
ajustado antes de autoclavar.

Question 7

Como pode ser identificado o crescimento de microorganismos no meio líquido?

Answer 7

O crescimento de bactérias num meio liquido identifica-se por turvação do meio,
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formação de uma película na sua superfície, ou aparecimento de sedimento

Question 8

Como pode ser identificado o crescimento de microorganismos em meio sólido?

Answer 8

Aparecimento de colônias

Question 9

O que é um slant ou slope ?

Answer 9

Os meios sólidos podem ainda ser vertidos em tubos de ensaio de vidro, os quais são inclinados, de modo a que,
durante a solidificação do meio, se forme um slope ou slant Este slant oferece uma superficie adequada ao
cultivo de microrganismos aeróbios e anaeróbios facultativos.

Question 10

Como é feito um slant?

Answer 10

Para inoculação de microrganismos nestes slants, utiliza-se uma alça reta e o tipo de semeio chama-se por picada
(agar stab) A semeio por picada faz-se também em meios sólidos mantidos em tubos de vidro sem slant. Este
tipo de cultura utiliza-se para a manutenção de cultura estoque, em meios designados de conservação.

Question 11

Como se da a semeadura por picada?

Answer 11

A semeadura por picada ocorre no meio de cultura slant (ágar) em tubo de ensaio rosqueável, utilizando uma agulha bacteriológica. Nesse processo, na parte mais inicial da inclinação do ágar, a agulha é inserida dentro do ágar em 2/3 terços da altura , depois retirada, podendo ou ser feito estrias na parte superficial do ágar inclinado.

Question 12

Qual a utilidade de se fazer picada no ágar?

Answer 12

Analisar crescimento anaeróbico de microorganismos

Question 13

Na semeadura de uma placa de petri com ágar, colônias de diferentes espécies possuem diferenças oculares entre si ?

Answer 13

sim, As culturas em meio sólido são convenientes para isolamento de colônias de bactérias. As colônias de diferentes
espécies de bactérias diferem no tamanho, forma, textura e cor.

Question 14

Como pode ser feito a semeadura da placa de petri?

Answer 14

A cultura de bactérias em meio sólido faz-se por
semeio por “streak” (esgotamento) ou por “pour plate” (incorporação).

Question 15

Como ocorre a semeadura em placa de petri por pour plate?

Answer 15

Transferir 1 mL da cultura para placa de Petri vazia, colocar 20 mL do meio fundido (e resfriado a cerca de 45 – 50°C) sobre a cultura e homogeneizar suavemente com movimentos circulares.

Uma variação dessa técnica é misturar a cultura com o meio fundido que já foi autoclavado em frasco e volume ideais, homogeneizar e depois transferir a mistura para a placa.

Objetivo: contagem bacteriana. É utilizado também para análise de micro-organismos anaeróbios, adicionando uma outra camada de meio fundido após o endurecimento da primeira camada.

Question 16

Como ocorre o semeio em placa de petri por streak?

Answer 16

Fazer o repique da cultura para meio sólido em placa e estriar com a alça bacteriológica sobre o meio.

A placa é dividida em 4 quadrantes (“imaginários”) e a inoculação pode ser feita de dois tipos:

Três estrias: estriar em metade da placa, com movimentos de zig-zag. Quando atingir a metade, girar a placa 90° e estriar até a metade (1/4 da placa), girar mais 90° e estriar o meio restante.

Quatro estrias: estriar até 2/3 da metade da placa, girar 90°, estriar 2/3 do próximo quadrante (1/4 da placa), girar 90°, estriar mais 2/3 do próximo quadrante (1/4 da placa), girar 90° e estriar o restante do meio.

Objetivo: obtenção de colônias isoladas.

É importante não cruzar as estrias (não tocar a alça na estria anterior), para reduzir o inóculo a cada estria e obter as colônias isoladas.

Pode-se, alternativamente, flambar a alça entre as estrias e tocar a ponta da estria anterior, arrastando um pequeno inóculo para a próxima estria.

Question 17

Porque em certas situações é utilizado neutralizante de conservante nos meios de cultura?

Answer 17

Porque na constituição de produtos farmacêuticos são utilizados conservantes para inibirem o crescimento de microorganismos, porém esses conservantes atrapalham a análise da verdadeira carga biológica do produto, por isso eles são neutralizados, para que os microorganismos da formulação sejam devidamente identificados em meio de cultura.

Question 18

Quais os principais meios de cultura para contagem microbiológica de produtos não-estéreis ?

Answer 18

Ágar nutriente
Simples, barato e de fácil preparo, é utilizado na análise de água, alimentos e leite como meio para cultivo de amostras submetidas a exames bacteriológicos e isolamento de organismos para culturas puras.

Ágar sangue
De coloração vermelha escura e opaca, oferece excelentes condições de crescimento para a maioria dos microrganismos.

Ágar Salmonella-Shigella
Possui componentes que inibem microrganismos gram positivos. Permite selecionar e isolar espécies de Salmonella e Shigella em amostras de fezes, alimentos e água.

Ágar chocolate
Utilizado para o cultivo de microrganismos considerados exigentes, embora quase todos os tipos de organismo também cresçam nesse meio de cultura de coloração castanha.
Macconkey
saboroued
etc etc

Question 19

O que é ágar Macconkey?

Answer 19

Ágar MacConkey
maio 22, 2019
4 anos atrás
O mais antigo e eficiente meio de cultura para bactérias.
O Ágar MacConkey é considerado um dos primeiros meios de cultivo para bactérias gram negativas indicando a fermentação por lactose. Recomenda-se a utilização do Ágar MacConkey em amostras clínicas que contenham microbiota mista, como urina, fezes, feridas e secreções. As bactérias gram negativas se desenvolvem melhor com essa técnica e se diferenciam por apresentarem a habilidade de fermentar a lactose.

Diferente dos outros meios de cultura, o Ágar MacConkey é seletivo, pois apresenta combinação de sais biliares e o cristal violeta, que inibem os microrganismos gram positivos, assim reduzindo relativamente doenças causadas por bactérias ou protozoários presentes nas fezes. Além disso, um dos diferenciais do Ágar MacConkey é que as bactérias gram negativas produzem colônias na cor rosa. As incapazes de fermentar permanecem incolores.

Question 20

O que é ágar TSA?

Answer 20

Tryptic Soy Agar (TSA) é um meio de cultura que está em
conformidade com as especificações da Farmacopéia dos Estados
Unidos (USP) e Farmacopéia Brasileira. É um ágar utilizado para o
isolamento e cultivo de microrganismos não fastidiosos e
fastidiosos, para avaliar contaminações microbiológicas do ar e
fluídos. As placas com embalagem tripla e irradiadas são utilizadas
para monitorar o ar em salas limpas e outras áreas ambientalmente
controladas quando a esterilidade do meio é de importância.
O TSA é usado para uma infinidade de técnicas incluindo a
manutenção de culturas de estoque, contagem de placas,
isolamento de microrganismos a partir de uma variedade de tipos de
amostras. Este meio também é usado para testar contaminantes
bacterianos em cosméticos.

Question 21

O que é Ágar Sabouraud?

Answer 21

A função do meio com nutrientes Ágar Sabouraud é o cultivo e crescimento qualitativo de fungos, como filamentoses, leveduras, espécies de cândidas e fungos associados a infecções artificiais. O Ágar Sabouraud é um método extremamente seletivo, pois seu pH, levemente ácido, favorece o crescimento de dermatófitos e inibe algumas espécies bacterianas de interesse clínico, isso acontece devido a presença de cloranfenicol, um antibiótico de amplo espectro que age contra as bactérias gram negativas, gram positivas e riquétsias.

Um dos diferenciais do meio Ágar Sabouraud é a elevada concentração de dextrose, que proporciona uma vantagem para o desenvolvimento dos fungos estáveis por osmose, a medida que a maioria das bactérias não suporta a elevada concentração de açúcar. O período de incubação do Ágar Sabouraud é de no mínimo 3 dias em temperatura de 25°C.

Question 22

Para conservantes como álcool, que tipo de neutralizante é usado?

Answer 22

Não é usado um produto químico, apenas a diluição do meio já é o suficiente para diminuir a concentração do álcool à um ponto de viabilidade de crescimento biológico.

Question 23

Para conservantes do tipo parabenos, que tipo de neutralizante é usado?

Answer 23

Polissorbato 80

Question 24

Para conservantes do tipo formaldeído, que tipo de neutralizante é usado?

Answer 24

Histidina

Question 25

Para conservantes do tipo fenoxietanol, que tipo de neutraliante é utilizado?

Answer 25

polissorbato 80 + lecitina de soja

Question 26

Qual o procedimento geral da produção de meios de cultura?

Answer 26

1- Cada meio de cultura terá especificações de reidratação conforme embalagem e especificações da farmacopeia
2- O meio deve ter seu pH checado, e se necessário, modificado, para que fique dentro das condições ideias de seu uso
3- Após isso, o meio deve ser esterilizado em autoclave
4- Antes do uso, deve-se checar novamente o pH
- Após o procedimento de esterilização, o meio deve ser guardado em geladeira

Question 27

O que ocorre caso o pH do meio não esteja correto?

Answer 27

Ele será ajustado para que fique dentro da faixa estabelecida, para isso pode-se utilizar Solução Ácido Clorídrico 0,1 M ou Solução Hidróxido de Sódio 0,1 M produzidos de acordo com a farmacopeia

Question 28

O que é ágar caseína ?

Answer 28

O ágar caseína soja é utilizado como um meio de crescimento geral para o isolamento e cultivo de micro-organismos. É um meio não seletivo de uso geral, que fornece nutrientes suficientes para permitir o crescimento de uma grande variedade de micro-organismos.

Question 29

O que é uma placa rodac?

Answer 29

Meio de cultura utilizado para detecção e enumeração de microrganismos presentes em superfícies de importância sanitária. Estas placas são utilizadas para monitoração em superfícies em salas limpas e outras áreas ambientalmente controladas.

Question 30

o que é ágar Chromocult?

Answer 30

Chromocult® Coliformes Agar é um meio de cultura cromogênico seletivo e diferencial projetado para uso em laboratórios de microbiologia analisando comida e água. Dentro de 24 horas, este meio permite a detecção , diferenciação e contagem de E. coli

Question 31

o que é ágar pseudomonas?

Answer 31

Agar Isolamento Pseudomonas é usado para o isolamento de Pseudomonas aeruginosa e outras Pseudomonas spp. em um ambiente de laboratório. Agar Isolamento Pseudomonas é muito útil para isolar Pseudomonas spp, pois inclui Irgasan, um potente antimicrobiano de amplo espectro não ativo contra Pseudomonas spp.