POP 4 : PREPARACAO E CONSERVAÇÃO DE CEPAS MICROBIANAS DE REFERÊNCIA e DILUIÇÃO SERIADA Flashcards
O que é uma passagem ?
Uma passagem é definida como a transferência de uma cultura estabelecida para um meio de
cultura estéril
Como deve ocorrer o processo de PREPARO DE SUSPENSÃO MICROBIANA PARTINDO DAS CEPAS MICROBIANAS PADRÃO?
1- diluir a cepa liofilizada em 1ml de solução salina
2- Colocar em 9ml de caldo Casoy
3- Incubar por 24h (temperatura específica para bactéria e fungos)
4- Semar a suspensão microbiana em 6 placas contendo ágar adequado à cepa (TSA ou Sabouraud) , incubar por 24h (bactéria), 48h( levedura) ou 72h(fungos)
5- após o período de incubação, observe
se há o crescimento de apenas um tipo de colônia na placa semeada, a fim de certificar a pureza da cultura
6- Repique as colônias em frascos-ampola contendo 3-5 mL de Tryptic Soy Agar (TSA) ou Agar
Sabouraud (AS) solidificado de forma inclinada, incube a 30-35°C por 24 horas ou 20-25°C por
72 horas (fungos/leveduras);
7- Após o crescimento das colônias, adicione óleo mineral estéril e mantenha refrigerado a 4-8°C;
cole a etiqueta de identificação com as informações: cepa, repique, data do preparo,
responsável; e anote no livro de controle de microrganismos de referencia os dados: cepa de
referencia, lote, origem, repique realizado, data, quantidade de tubos preparados, ensaio de
pureza, responsável, observações.
Até quantas passagens as bacterias podem ter?
:Os microrganismos utilizados no teste não devem ter mais que 5 passagens contadas a partir da cultura
ATCC original.
Como ocorre o procedimento de Preparo de suspensão microbiana partindo das cepas microbianas estoque?
1- Partindo das cepas microbianas estoque, preparadas na fase anterior; no fluxo laminar, retire o(s)
frasco(s)-ampola da geladeira e retire o óleo mineral contido, com o auxílio de pipeta automática,
2- acrescente o volume de 1 mL de soro fisiológico 0,9% no frasco ampola; homogeneize no vórtex;
3- Retire a suspensão anterior e adicione a 9 mL de caldo Casoy puro em tubo de ensaio com tampa; incube a 30-35°C por 24 horas para bactérias ou 20-25°C por 72 horas (leveduras) e por 48 horas
(fungos);
4- Repique as colônias em tubos de ensaio contendo o meio de cultura adequado ao crescimento.
Observe o número de repique, só poderão ser preparadas cepas até o 5ª repique; incube a 30-35°C
por 24 horas para bactérias ou 20-25°C por 72 horas (fungos/leveduras) por 48 horas para leveduras
e 72 horas para fungos; após 48 horas de incubação, mantenha refrigerado entre 4°C- 6°
Quais os principais usos da diluição seriada ?
Teste de promoção de crescimento de meio de cultura
o Verificação de métodos microbiológicos Farmacopeicos
o Validação de métodos microbiológicos alternativos
o Teste de doseamento de antibióticos
o Teste de desafio de conservantes
