PCR

Question 1

PCR : amplification exponentielle d’une séquence d’ADN double brin ⭐️⭐️ :
✔️effectuée in vitro ⭐️
✔️par extension de …
✔️à l’aide d’une ADN polymerase ..

Answer 1

extension de 2 amorces ⭐️⭐️

ADN polymerase THERMOSTABLE ⭐️⭐️

Question 2

PCR étapes

Answer 2

1️⃣dénaturation de l’ADN ⭐️⭐️⭐️

2️⃣hybridation des amorces ⭐️⭐️⭐️ : fixation d’un couple d’amorce de part et d’autre de la région à amplifier ⭐️

3️⃣elongation ⭐️⭐️⭐️

Question 3

PCR : étape d’élongation :
✔️synthèse d’un brin complémentaire ⭐️⭐️ par ..

✔️utilisation de..

Answer 3

✔️synthèse par ADN polymerase ⭐️⭐️⭐️ thermostable ⭐️⭐️

✔️utilisation de dNTPs ⭐️⭐️

Question 4

PCR : rendement théorique

Answer 4

2^n

n= nombre de cycle

Question 5

PCR : limite de la longueur des régions amplifiées

Answer 5

100pb a 50 000 pb ⭐️⭐️⭐️

en moyenne 1000pb

Question 6

2 types de PCR

Answer 6

✔️PCR en point final

✔️PCR en temps réel = real time PCR :
• quantification absolue : determination charge virale
• quantification relative : niveau d’expression d’un gène ⭐️⭐️

Question 7

PCR en temps réels : quantification relative :

Answer 7

niveau d’expression d’un gène ⭐️⭐️

Question 8

PCR : cinétique : en général limitation à combien de cycle ?

Answer 8

30 à 40

Question 9

autres types de PCR

Answer 9

✔️PCR multiplexe : plus d’un amplicon à la fois et 3+ amorces

✔️PCR nichée : hautement spécifique, 2 étapes successives avec 2 couples d’amorces

Question 10

RT-PCR reverse transcriptase PCR : but :

Answer 10

synthèse d’un ADN complémentaire à partir d’un ARN

Question 11

RT-PCR reverse transcriptase PCR : applications

Answer 11

étude de l’expression des gènes ⭐️⭐️

Question 12

PCR digitale ⭐️⭐️ = dPCR : but

Answer 12

✔️PCR quantitative avec quantification absolue

✔️repérer un fragment d’ADN muté
=> analyse surtout d’ADN circulant / ADN circulant fœtal
=> oncologie

Question 13

technique de beaming =

Answer 13

PCR digitale en émulsion