OBSERVATIONS MICROSCOPIQUES DES MICROORGANISMES Flashcards

1
Q

Quel type de microscope (photonique/optique ou électronique) permet un plus grand agrandissement?

A

Le microscope électronique puisque la longueur d’onde des électrons est plus petite que celle des protons, donc diminue la limite de résolution, donc permet un plus grand agrandissement.

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2
Q

PHOTONIQUE: De quoi sont composés les microscopes photonique?

A

De plusieurs systèmes de lentilles: un condensateur, un objectif et un oculaire.

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3
Q

PHOTONIQUE: Vrai ou faux. Le condensateur modifie l’agrandissement de l’image?

A

Faux. Seul l’objectif et l’oculaire modifient l’agrandissement de l’image.

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4
Q

PHOTONIQUE: Comment obtenir l’agrandissement total d’une image?

A

Objectif x Oculaire = Agrandissement.

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5
Q

PHOTONIQUE: Quels sont les facteurs limitants du microscope photonique et sur lesquels pouvons nous intervenir?

A
  • La limite de résolution : on ne peut pas intervenir seulement sur l’ouverture numérique (indiqué sur l’objectif).
  • Le contraste : on peut intervenir en effectuant une coloration ou en utilisant des microscopes photoniques conçus pour avoir un meilleur contraste.
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6
Q

PHOTONIQUE: Qu’est-ce qui a la capacité de distinguer une structure de son environnement et qui est proportionnel à la différence de quantité de lumière absorbée (structure vs milieu)?

A

Le contraste.

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7
Q

PHOTONIQUE: Quel est le principe du microscope à fond clair?

A

Structures sombres sur un fond clair. Préparation à l’état frais, permet de voir la morphologie (structure), la motilité (déplacement), l’axe de division cellulaire, et les corps d’inclusion cytoplasmiques.

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8
Q

PHOTONIQUE: Quel est le point négatif de la préparation à l’état frais pour l’observation avec le microscope à fond clair?

A

Peu de contraste, observation difficile.

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9
Q

PHOTONIQUE: Quels sont les types de microscope photonique (5)?

A
  • Microscope à fond clair
  • Microscope à fond noir
  • Microscope à contraste de phase
  • Microscope à contraste d’interférence différentielle
  • Microscope à fluorescence
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10
Q

PHOTONIQUE: Comment augmenter le contraste avec le microscope à fond clair?

A

Avec la coloration de l’échantillon.

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11
Q

PHOTONIQUE: Quels sont les différents types de coloration et qu’est-ce qu’ils permettent d’identifier?

A
  • Coloration simple: un seul colorant (bleu de méthylène, coloration uniforme (colorant a une charge + dans un pH neutre alors que la majorité des microorganismes sont chargés -)
  • Coloration différentielle: gram (+ ou -), alcoolo-acido-résistance (plus rapide) et Ziehl-Neelsen (Carbol-Fuchsine), identifier les structures cellulaires à l’intérieur d’un microorganisme
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12
Q

PHOTONIQUE: Quels sont les inconvénients de la coloration de l’échantillon?

A
  • Peu de colorants sont vitaux (mort des cellules)

- Exige la fixation (ne distingue plus la motilité des microorganismes)

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13
Q

PHOTONIQUE: Quel est le principe du microscope à fond noir?

A

Structures claires sur fond noir.

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14
Q

PHOTONIQUE: Quelles sont les différences entre la microscopie à fond clair vs la microscopie à fond noir?

A

Au niveau du condensateur : cône de Abbe + miroirs, éclairage oblique et visualisation des rayons déviés.

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15
Q

PHOTONIQUE: Quel est le principal avantage du microscope à fond noir?

A

Visualisation sans fixation ni coloration (observer des cellules vivantes, peut voir les divisions cellulaires et le déplacement).

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16
Q

PHOTONIQUE: Quel est le principe du microscope à contraste de phase?

A

Structures sombres sur un fond clair.

Mise en phase de la lumière incidente: réfraction de la lumière par les structures cellulaires induit un changement de phase de la lumière, donc un changement d’intensité de lumière.

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17
Q

PHOTONIQUE: Que peut-on utiliser pour augmenter le confort de l’observateur lors de l’utilisation du microscope à contraste de phase?

A

Des filtres colorés.

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18
Q

PHOTONIQUE: Quels sont les avantages du microscope à contraste de phase?

A

Visualisation de structures fines sans fixation ni colorations (cellules vivantes).

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19
Q

PHOTONIQUE: Vrai ou faux. Le microscope à fond noir est plus récent que le microscope à contraste de phase.

A

Faux.

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20
Q

PHOTONIQUE: À quel niveau le microscope à contraste de phase est-il différent?

A

Différences internes au niveau du condensateur et des objectifs (anneaux de phase).

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21
Q

PHOTONIQUE: VRAI OU FAUX? En microscopie à contraste de phase, les cellules observées sont mortes, comme en microscopie à fond clair.

A

Faux.

22
Q

PHOTONIQUE: Quel est le principe du microscope à contraste d’interférence différentiel?

A

Visualisation de structures fines, lumière polarisée à un angle variable. Échantillon vivant, non coloré (coloration vient de la polarisation), impression de pseudo-relief 3D.

23
Q

PHOTONIQUE: Quelle est la différence entre le microscope à contraste d’interférence différentiel et les autres microscopes?

A

Différence au niveau du condensateur, systèmes de lentilles polarisantes contrôlées par informatique.

24
Q

PHOTONIQUE: Quelle est la limite du microscope à contraste d’interférence différentielle?

A

Les préparations transparentes.

25
Q

PHOTONIQUE: Quels sont les avantages du microscope à contraste d’interférence différentielle?

A
  • Visualisation de structures fines sans coloration ni fixation
  • Absence de Halo
26
Q

PHOTONIQUE: Quel est le désavantage du microscope à contraste d’interférence différentielle?

A

Très couteux

27
Q

PHOTONIQUE: Quel est le principe du microscope à épifluorescence?

A

Excitation d’un échantillon avec une lumière de longueur d’onde spécifique, dans les UV. Forme une image avec une lumière fluorescente émise par l’objet (émission d’un photon dans le visible).

28
Q

PHOTONIQUE: Comment doit-on colorer les cellules en microscopie à fluorescence?

A

On doit utiliser des colorants fluorescents, des fluorochromes.

29
Q

PHOTONIQUE: Qu’est-ce qui est opaque aux rayons UV mais translucide aux longueurs d’ondes dans le visible?

A

Le miroir dichroïque.

30
Q

PHOTONIQUE: Quel matériel a les mêmes caractéristiques que le miroir dichroïque?

A

Le verre.

31
Q

PHOTONIQUE: De quoi sont faits les objectifs d’un microscope à fluorescence pour laisser passer toutes les longueurs d’ondes (UV et visibles)?

A

En quartz.

32
Q

PHOTONIQUE: Quels sont les applications du microscope à fluorescence?

A
  • Fluorochromes vitaux
  • Immunofluorescence
  • Hybridation Fluorescente in situ (FISH)
33
Q

PHOTONIQUE: À quoi servent les différentes application du microscope à fluorescence (Fluorochromes vitaux, Immunofluorescence et Hybridation Fluorescente in situ (FISH)?

A

Fluorochromes vitaux: déterminer la proportion des cellules vivantes et des cellules mortes.

Immunofluorescence: détecter des pathogènes

Hybridation Fluorescente in situ (FISH): quantification des proportions et analyse informatique d’images

34
Q

PHOTONIQUE: Quelle est la limite de l’immunofluorescence?

A

La sensibilité des anticorps.

35
Q

ÉLECTRONIQUE: Quel matériel faut-il éviter afin de faire des observations avec un microscope électrique?

A

Le verre, celui-ci bloque les électrons, ce qui empêche de voir l’échantillon. On veut plutôt utiliser des lentilles magnétiques.

36
Q

ÉLECTRONIQUE: Où doit-on installer un microscope électronique et pourquoi?

A

Au sol ou même au sous-sol afin d’avoir le moins de vibration possible. *éviter les tours

37
Q

ÉLECTRONIQUE: Quelles sont les composantes nécessaires à la formation d’une image?

A

Un écran fluorescent, une plaque photographique et un détecteur numérique.

38
Q

ÉLECTRONIQUE: Quelles sont les limites du microscope électronique?

A
  • Les électrons voyagent dans le vide, nécessite l’intérieur du microscope vide
  • Les électrons sont non-pénétrants, nécessite une coupe ultrafine (altérations suite à la coupe)
  • Le matériel vivant est non électron-dense, diminue le contraste, nécessite la coloration avec des matériaux imperméables aux électrons
39
Q

Quelles sont les différentes techniques de préparation (coloration) et en quoi elles consistent?

A
  • Technique d’ombrage: vaporisation de métaux à un angle précis pour recouvrir l’échantillon, ce qui projette une ombre (déterminer l’élévation)
  • Coloration négative: acide phosphotungstique, accumulation d’électrons dans les creux, absence d’électrons dans les protubérances, ce qui donne du relief (déterminer la structure)
  • Cryodécapage: froid et fracture d’une structure, suivie de la technique d’ombrage (voir l’intérieur d’une cellule et ses structures)
  • Immuno-localisation cellulaire: utilise une composante du système immunitaire (anticorps) et des biles de Fe ou Au (localiser une protéine dans la cellule)
40
Q

Quels sont les deux types de microscopes électroniques?

A
  • Microscope électronique à transmission, transparent (on voit au travers l’échantillon)
  • Microscope électronique à balayage, effet 3D (on voit que la surface de l’échantillon)
41
Q

Comment fonctionne le microscope électronique à transmission?

A

Les électrons traversent l’échantillon et sont détectés sous l’échantillon (même principe que les microscopes photoniques). La limite de résolution plus petite, donc agrandissement plus grand possible. Détection de structure très fines.

42
Q

Comment fonctionne le microscope électronique à balayage?

A

Les électrons sont réfléchis et sont détectés latéralement. La limite de résolution est plus grande, donc agrandissement plus grand moins possible.

43
Q

Quel microscope électronique est le plus utile?

A

Le microscope électronique à transmission.

44
Q

Quels types de microscope électronique utilise une congélation rapide?

A

La cryoélectromicroscopie et la cryotomographie électronique.

45
Q

Qu’est-ce qui différentie la cryoélectromicroscopie de la cryotomographie électronique?

A

La cryoélectromicroscopie permet une modélisation des structures protéiques alors que la cryotomographie électronique permet une reconstruction 3D.

46
Q

Quel microscope électronique illumine par laser UV, utilise des fluorochromes et détecte la fluorescence?

A

Le microscope confocal à balayage laser.

47
Q

Quels sont les avantages du microscope confocal à balayage laser?

A
  • Élimine la fluorescence des plans hors foyer
  • Augmente le contraste
  • Diminue l’interférence
  • Permet une reconstitution 3D et même 4D (temporelle)
48
Q

Quelles applications permet le microscope confocal à balayage laser?

A
  • Détection ou localisation d’une structure dans une cellule ou un tissu
  • Développement d’un biofilm vs temps
  • Quantification et la position des cellules vivantes/mortes
49
Q

Quels sont les deux types de microscope à balayage de sonde?

A
  • À effet tunnel

- À force atomique

50
Q

À quoi sert le microscope à balayage de sonde?

A
  • À mesurer le déplacement vertical et horizontal et le courant entre les nuages électroniques
  • À déterminer les liens intermoléculaires
  • À faire des observations en milieux aqueux
51
Q

Vrai ou faux. Une sonde peut déplacer les atomes alors que des rayons ne peuvent pas.

A

Vrai.

52
Q

Quel est l’avantage du microscope à balayage de sonde?

A

Obtenir des observations plus précises des structures vivantes et des matériaux.