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Observation Flashcards

1
Q

Comment fonctionne le principe d’un microscope électronique ?

A

Électron bombarde l’échantillon (au lieu des photons)

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Q

qu’est-ce qui différent entre microscope optique et électronique ?

A

Le grossissement
(longueur d’onde photon vs longueur d’onde electron)

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3
Q

c’est quoi l’anatomie du microscope (en haut jusquen bas)

A
  • lentille (occulaire)
  • objectif
  • échantillon
  • condenseur
  • lampe
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4
Q

Il est ou le condenseur

A

entre l’échantillon et la lumiere

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5
Q

Qu’est-ce qui aggrandit ?

A

objectif 1er fois, occulaire 2e

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6
Q

Le meilleur microscope photonique peut aller à un grossissement jusqu’è combien ?

A

objectif 200x
occulaire 15x
-> 3000x

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7
Q

quel sont les 3 aggrandissement courrantes chez les microscopes photnique ?

A

100x
400x
1000x

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8
Q

c’est quoi une limite de résolution?

A

distance minimal entre deux points pour pouvoir les distinguer

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9
Q

comment on calcul la limite de résulotion? (2)

A

= longueur d’onde /2n sin( 1/2 angle cone de lumière entrant dans l’objectif)

  • 0,5 longueur d’onde /nsin(1/2 angle)
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10
Q

c’est quoi le n dans la limite de résolution?

A

indice de refraction du milieu

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11
Q

l’ouverture numérique (NA) peut remplacer quoi dans la formule ?

A

nsin(1/2 angle)

(écrit sur les objectif)

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12
Q

Quel facteur pouvons nous intervenir pour aider les facteurs limitants. quoi pour rempalcer:
-> Longueur d’onde lumière visible

A

UV (180-> 400nm)
-doit mettre objectif en quartz, car UV passe pas les vitres
- doit mettre une transformation optique = pour voir au visible, mais perd résolution

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13
Q

Quel facteur pouvons nous intervenir pour aider les facteurs limitants. quoi pour rempalcer:
-> indice de refraction du milieu

A

mettre dans du verre = 1,5
huile immersion = 1,56

(faisceaux lumineux dévient moins )

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14
Q

indice de refraction de l’air = ?

A

1.0

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15
Q

on peut toujours mettre de lhuile à immersion? habituellement utilisé ou?

A

Faux.
doit être écrit qu’on peut.

objectif à fort grosissement (60-100x)

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16
Q

on veut que la distance entre l’objectif et l’échantillon soit grand ou petit ? ce qui donne une angle plus grand ou petit ?

A

petite distance, grand angle

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17
Q

Meilleure est l’ouverture numérique (NA) plus quelle est grande ?

A

Vrai

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18
Q

le meilleur microscope photonique a une limite de résolution de combien?

A

0,1 u

(lumière blanche, la limite = 0,2u)

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19
Q

c’est quoi le contraste ?
il est proportionnel à quoi?

A

capacité à distinguer une structure de son environnement
-> quantité de lumière absorbé

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20
Q

c’est quoi le microscope à fond clair ?
qui la découvert ?

A

structure sombre sur fond clair
Kohler

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21
Q

Quelle sont les limitations du microscope à fond clair ?

sert à quoi spécialement

A

-> doit être de gros m-o

-> voir la mobilité (état frais)
-> morphologie

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22
Q

Désavantage du microscope à fond clair à l’état frais ?

A

Pas de contraste

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23
Q

Comment pouvons nous augmenter le contraste dans un microscope à fond clair ?

désavantage ?

A

-> coloration

-> ne peut se faire sur organisme vivant (exigent fixatif)

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24
Q

comment les colorants fonctionnent ?

A

chargé -/+ = s’attache
hydrophobe = s’insère lipide de membrane

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25
c'est quoi une coloration simple ? exemple ?
coloration uniforme -> Bleu de methylène (chargé +)
26
Pourquoi le Bleu de methylène marche bien ?
majorité m-o ssont chargé - = s'Accroche bien.
27
comment o fixe une couleur ?
- Seche echantillon (flamme = fixe) - trempe coloration - rince
28
c'est quoi une coloration différentielle ? exemple ? (2)
capacité de prendre un pigment plus que l'autre -> Gram -> Alcoolo-acido-resistante (mycobactérie)
29
Comment la coloration de Gram fonctionne ?
rétention du crytal violet -> chargé + retiennent violet - chargé - retiennent le rouge (couleur opposé = discerne bien)
30
comment fonctionne la coloration alcoolo acido résistante ?
retient colorant rouge/rose malgrès le lavage a l'alcool et à l'acide (le reste relache)
31
grosse différence entre coloration simple et différentiel ?
Simple: colore tout différentielle: descrimine organisme voulu
32
autre coloration différentielle autre que gram et AAR?
-> endospore -> capsule -> flagelle (grossit = pas de coloration) -> corps d'inclusion (N, S, P...)
33
c'est quoi le microscope à fond noir ? différence avec le fond clair normal?
clair sur fond noir (rien ne dévie la lumière) Dans le condensateur: -> Cone d'Abbé + miroir -> éclairage oblique (X) -> visualise seulement les rayons déviés
34
Avantage fond noir ?
pas de fixation, pas de coloration => possible voir cellule vivante
35
c'Est quoi le microscope à contraste de phase ? différence avec le normal?
on joue avec la physique pour aider fond est clair -> condensateur + objectif avec anneaux de phase -> filtre coloré
36
Principe microscope à contraste de phase ?
Mise en phase de la lumière incidente = réfraction lumière par les structure cellulaire = change de phase = change d'intensité de la lumière
37
avantage microscope contraste ?
cellule vivante (pas fixation/coloration) voit mieux (mais Halo)
38
Comment reconnaitre microscope à contraste?
Halo
39
Principe d'un microscope à contraste d'interférence différentielle ? Différence visuelle ? différence microscope ?
fonctionne par modification de la. lumière polarisé = intensité lumineuse différente -> coloré et impression de relief ->. condensateur a un système de lentille polarisante contrôler par informatique
40
Avantage microscope à contraste d'interférence différentielle ?
-> sans coloration ni fixation -> cellule -> absence de Halo
41
Limites du microscope à contraste d'interférence différentielle?
préparation transparente mince (la lumière doit pouvoir traverser) extrêmement cher
42
Principe du microscope à (epi)fluorescence ? différence avec le microscope normal ?
Utilse le UV. -> colorant fluo -> lampe UV excitatrice -> filtre selectif (bloque) -> Miroir dichroique (2 couleurs)
43
différence entre microscope epifluorescence et fluorescence ?
différence par comment la lumière est émise et récolté -> epifluorescence la lumière emise et récolté même place
44
avantage microscope à fluorescence ?
-> colorant fluo vitale -> cellule vivante -> permet de voir cellule vivante vs cellule morte -> permet utiliser immunofluorescence (anticorps spécifique)
45
Comment on peut reconnaitre les cellules vivantes vs mortes daans un microscope à fluorescence ?
Morte: membrane cytoplasmique perméable = entre = diffuse Vivante: exclu par la membrane =
46
à quoi sert l'immunofluorescence comment c'Est fait ?
sert à trouver pour reconnaitre -anticorps + fluorochrome -> s'accroche cible seulement et éliminer si pas de cible
47
C'est quoi la microscopie FISH?
Fluo in situ hybridization -> sonde ADN fluo spécifique différent fluorochrome pour différente espece = va détecter espece précise (quantification)
48
Grossièrement, à quoi sert: -immunofluorescence (et limites) - fluorochrome vitaux - FISH
-> diagnostic (détection) limite: sensibilité des anticorps (affinité) -> proportion morte/vivante -> quantification des proportion + analyse informatique d'image
49
Microscope électronique ont été inventé quand, par qui? but ?
Ruska (Nobel en 1986) voir des petits m-o
50
différence entre le grossissement, la longueur d'onde et limite de résolution microscope électronique vs photonique ?
Photonique : 1000x et 0,1u longueur d'onde photon= 5x10^-7 Électronique: 400,000 x et 0,05u longueur d'onde électron = 5x10^-12
51
Le microscope électronique a quoi de plus ? quoi ca sert?
1. électro-aimant 2. lentille magnétque (car traverse ni le verre, ni le quartz) (sert à moduler faisceaux d'électrons)
52
Le microscope électronique doit être situer ou? pourquoi?
sous-sol -> moins de vibration
53
Avec quel objet ont peut détecter les images du microscope électronique ? pourquoi besoin de ca ?
- écran fluorescent - plaque photographique - détecteur numérique -> longueure d'onde non visible à l'oeil nu, besoin instrument pour visualiser
54
limite microscope à électron?
1. électron voyagent dans le vide = intérieur doit être vide = cellule non vivante (majorité) 2. électrons sont non-pénétrantn = doit être coupe ultrafine (20-100 nm) = possible altération car pour couper fin = rigide 3. contraste très bas = doit être coloré
55
Comment on colore les coupes de microscopie électronique ?
matériaux impérméable électron = métaux (fer, or, uranium, lanthane) ou acide phosphotungstine
56
c'est quoi les types de coloration pour le microscope électronique ?
1. 'ombrage (shadow casting) 2. Coloration négative 3. cryodécapage 4. immunolocalisation cellulaire
57
Comment fonctionne la coloration d'ombrage (shadow casting)
vaporise métaux à un angle précis = projette ombre + bille témoins servent pour comparer les ombres pour déterminer l'élévation
58
Comment fonctionne la coloration négative ? utile dans quoi?
trempe dans l'Acide phosphotungstine = accumule dans les creux = sombre = accumule électrons = relief -> structure virus
59
Comment fonctionne la coloration cryodécapage ?
congèle (-180c) -> coupe transversal = fracture zone de faiblesse = ouvre cellule + technique ombrage = voit dans l'échantillon
60
comment fonctionne la coloration d'immuno-localisation cellulaire
anticorps spécifique + bille Fe ou Au = localise prot dans la cellule -> doit être coupler sinon voit pas
61
c'est quoi les deux types de microscope électronique ?
1. transmission 2. à balayage
62
comment fonctionne le microscope à transmission? limite ?
1. Électron traversent l'échantillon -> détecteur sous l'échantillon (image par transparence) = doit être mince mince -> limite de résolution faible (le plus faible des microscopes électronique)
63
Comment fonctionne le microscope à balayage ?
balais surface échantillon = électron réfléchis (détecteur latéral) = effet 3D
64
Comment fonctionne la cryoélectromicroscopie ?
congèlation rapide -135 (azote liquide) = conserve l'intégralité des structures sous vide (Cryo-EM) = modélise des structure protéique (comme virus, spike) = une image à la fois = reconstruction 3D par l'ordinateur
65
Comment fonctionne le microscope confocal à balayage laser ? avantage ?
-> illumitation laser UV -> utilise fluorochrome -> détecte exclusivement par plan au foyer et élimine fluo si hors foyer -> balais horizontale, vertical, temporel -> reconstruction + quantification ordinateur (3D ou 4D) => + de contraste et - d'interférence
66
à quel moment on utilise le microscope confocal à balayage laser ?
1. détection ou localisation structure dans cell ou tissu 2. développement biofilm dans le temps 3. quantification + positionnement cell morte/vivante
67
Comment fonctionne le microscope à balayage de sonde ? qui la inventé ? quand ?
(effet tunnel) sonde balais la surface = mesure le déplacement hori/verti et le courant entre les nuages électronique - grossissement 10^8 -> lien intermoléculaire -> observation en milieu aqueux -> Rohrer et bining 1989
68
À quoi sert les billes dans le microscope électronique?
Savoir environs la hauteur des structures
69
différence entre microscopie électronique à transmission ou à balayage ?
Transmission: transparence dans les photos (voit à travers) Balayage: ne voit pas du tout à travers

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