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Microbio > Observation > Flashcards

Observation Flashcards

1
Q

Comment fonctionne le principe d’un microscope électronique ?

A

Électron bombarde l’échantillon (au lieu des photons)

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Q

qu’est-ce qui différent entre microscope optique et électronique ?

A

Le grossissement
(longueur d’onde photon vs longueur d’onde electron)

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3
Q

c’est quoi l’anatomie du microscope (en haut jusquen bas)

A
  • lentille (occulaire)
  • objectif
  • échantillon
  • condenseur
  • lampe
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4
Q

Il est ou le condenseur

A

entre l’échantillon et la lumiere

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5
Q

Qu’est-ce qui aggrandit ?

A

objectif 1er fois, occulaire 2e

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6
Q

Le meilleur microscope photonique peut aller à un grossissement jusqu’è combien ?

A

objectif 200x
occulaire 15x
-> 3000x

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7
Q

quel sont les 3 aggrandissement courrantes chez les microscopes photnique ?

A

100x
400x
1000x

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8
Q

c’est quoi une limite de résolution?

A

distance minimal entre deux points pour pouvoir les distinguer

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9
Q

comment on calcul la limite de résulotion? (2)

A

= longueur d’onde /2n sin( 1/2 angle cone de lumière entrant dans l’objectif)

  • 0,5 longueur d’onde /nsin(1/2 angle)
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10
Q

c’est quoi le n dans la limite de résolution?

A

indice de refraction du milieu

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11
Q

l’ouverture numérique (NA) peut remplacer quoi dans la formule ?

A

nsin(1/2 angle)

(écrit sur les objectif)

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12
Q

Quel facteur pouvons nous intervenir pour aider les facteurs limitants. quoi pour rempalcer:
-> Longueur d’onde lumière visible

A

UV (180-> 400nm)
-doit mettre objectif en quartz, car UV passe pas les vitres
- doit mettre une transformation optique = pour voir au visible, mais perd résolution

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13
Q

Quel facteur pouvons nous intervenir pour aider les facteurs limitants. quoi pour rempalcer:
-> indice de refraction du milieu

A

mettre dans du verre = 1,5
huile immersion = 1,56

(faisceaux lumineux dévient moins )

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14
Q

indice de refraction de l’air = ?

A

1.0

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15
Q

on peut toujours mettre de lhuile à immersion? habituellement utilisé ou?

A

Faux.
doit être écrit qu’on peut.

objectif à fort grosissement (60-100x)

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16
Q

on veut que la distance entre l’objectif et l’échantillon soit grand ou petit ? ce qui donne une angle plus grand ou petit ?

A

petite distance, grand angle

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17
Q

Meilleure est l’ouverture numérique (NA) plus quelle est grande ?

A

Vrai

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18
Q

le meilleur microscope photonique a une limite de résolution de combien?

A

0,1 u

(lumière blanche, la limite = 0,2u)

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19
Q

c’est quoi le contraste ?
il est proportionnel à quoi?

A

capacité à distinguer une structure de son environnement
-> quantité de lumière absorbé

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20
Q

c’est quoi le microscope à fond clair ?
qui la découvert ?

A

structure sombre sur fond clair
Kohler

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21
Q

Quelle sont les limitations du microscope à fond clair ?

sert à quoi spécialement

A

-> doit être de gros m-o

-> voir la mobilité (état frais)
-> morphologie

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22
Q

Désavantage du microscope à fond clair à l’état frais ?

A

Pas de contraste

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23
Q

Comment pouvons nous augmenter le contraste dans un microscope à fond clair ?

désavantage ?

A

-> coloration

-> ne peut se faire sur organisme vivant (exigent fixatif)

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24
Q

comment les colorants fonctionnent ?

A

chargé -/+ = s’attache
hydrophobe = s’insère lipide de membrane

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25
Q

c’est quoi une coloration simple ?
exemple ?

A

coloration uniforme
-> Bleu de methylène (chargé +)

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26
Q

Pourquoi le Bleu de methylène marche bien ?

A

majorité m-o ssont chargé - = s’Accroche bien.

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27
Q

comment o fixe une couleur ?

A
  • Seche echantillon (flamme = fixe)
  • trempe coloration
  • rince
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28
Q

c’est quoi une coloration différentielle ?
exemple ? (2)

A

capacité de prendre un pigment plus que l’autre

-> Gram
-> Alcoolo-acido-resistante (mycobactérie)

29
Q

Comment la coloration de Gram fonctionne ?

A

rétention du crytal violet

-> chargé + retiennent violet
- chargé - retiennent le rouge

(couleur opposé = discerne bien)

30
Q

comment fonctionne la coloration alcoolo acido résistante ?

A

retient colorant rouge/rose malgrès le lavage a l’alcool et à l’acide

(le reste relache)

31
Q

grosse différence entre coloration simple et différentiel ?

A

Simple: colore tout
différentielle: descrimine organisme voulu

32
Q

autre coloration différentielle autre que gram et AAR?

A

-> endospore
-> capsule
-> flagelle (grossit = pas de coloration)
-> corps d’inclusion (N, S, P…)

33
Q

c’est quoi le microscope à fond noir ?
différence avec le fond clair normal?

A

clair sur fond noir (rien ne dévie la lumière)
Dans le condensateur:
-> Cone d’Abbé + miroir
-> éclairage oblique (X)
-> visualise seulement les rayons déviés

34
Q

Avantage fond noir ?

A

pas de fixation, pas de coloration
=> possible voir cellule vivante

35
Q

c’Est quoi le microscope à contraste de phase ?

différence avec le normal?

A

on joue avec la physique pour aider
fond est clair
-> condensateur + objectif avec anneaux de phase
-> filtre coloré

36
Q

Principe microscope à contraste de phase ?

A

Mise en phase de la lumière incidente
= réfraction lumière par les structure cellulaire
= change de phase
= change d’intensité de la lumière

37
Q

avantage microscope contraste ?

A

cellule vivante (pas fixation/coloration)
voit mieux (mais Halo)

38
Q

Comment reconnaitre microscope à contraste?

A

Halo

39
Q

Principe d’un microscope à contraste d’interférence différentielle ?

Différence visuelle ?

différence microscope ?

A

fonctionne par modification de la. lumière polarisé = intensité lumineuse différente

-> coloré et impression de relief

->. condensateur a un système de lentille polarisante contrôler par informatique

40
Q

Avantage microscope à contraste d’interférence différentielle ?

A

-> sans coloration ni fixation

-> cellule

-> absence de Halo

41
Q

Limites du microscope à contraste d’interférence différentielle?

A

préparation transparente
mince

(la lumière doit pouvoir traverser)

extrêmement cher

42
Q

Principe du microscope à (epi)fluorescence ?

différence avec le microscope normal ?

A

Utilse le UV.

-> colorant fluo
-> lampe UV excitatrice
-> filtre selectif (bloque)
-> Miroir dichroique (2 couleurs)

43
Q

différence entre microscope epifluorescence et fluorescence ?

A

différence par comment la lumière est émise et récolté

-> epifluorescence la lumière emise et récolté même place

44
Q

avantage microscope à fluorescence ?

A

-> colorant fluo vitale
-> cellule vivante
-> permet de voir cellule vivante vs cellule morte
-> permet utiliser immunofluorescence (anticorps spécifique)

45
Q

Comment on peut reconnaitre les cellules vivantes vs mortes daans un microscope à fluorescence ?

A

Morte: membrane cytoplasmique perméable = entre = diffuse

Vivante: exclu par la membrane =

46
Q

à quoi sert l’immunofluorescence
comment c’Est fait ?

A

sert à trouver pour reconnaitre
-anticorps + fluorochrome
-> s’accroche cible seulement et éliminer si pas de cible

47
Q

C’est quoi la microscopie FISH?

A

Fluo in situ hybridization

-> sonde ADN fluo spécifique

différent fluorochrome pour différente espece = va détecter espece précise

(quantification)

48
Q

Grossièrement, à quoi sert:
-immunofluorescence (et limites)
- fluorochrome vitaux
- FISH

A

-> diagnostic (détection)
limite: sensibilité des anticorps (affinité)

-> proportion morte/vivante

-> quantification des proportion
+ analyse informatique d’image

49
Q

Microscope électronique ont été inventé quand, par qui?
but ?

A

Ruska
(Nobel en 1986)
voir des petits m-o

50
Q

différence entre le grossissement, la longueur d’onde et limite de résolution microscope électronique vs photonique ?

A

Photonique :
1000x et 0,1u
longueur d’onde photon= 5x10^-7

Électronique:
400,000 x et 0,05u
longueur d’onde électron = 5x10^-12

51
Q

Le microscope électronique a quoi de plus ? quoi ca sert?

A
  1. électro-aimant
  2. lentille magnétque (car traverse ni le verre, ni le quartz)

(sert à moduler faisceaux d’électrons)

52
Q

Le microscope électronique doit être situer ou? pourquoi?

A

sous-sol
-> moins de vibration

53
Q

Avec quel objet ont peut détecter les images du microscope électronique ?
pourquoi besoin de ca ?

A
  • écran fluorescent
  • plaque photographique
  • détecteur numérique

-> longueure d’onde non visible à l’oeil nu, besoin instrument pour visualiser

54
Q

limite microscope à électron?

A
  1. électron voyagent dans le vide = intérieur doit être vide = cellule non vivante (majorité)
  2. électrons sont non-pénétrantn = doit être coupe ultrafine (20-100 nm)

= possible altération car pour couper fin = rigide

  1. contraste très bas = doit être coloré
55
Q

Comment on colore les coupes de microscopie électronique ?

A

matériaux impérméable électron = métaux (fer, or, uranium, lanthane)

ou acide phosphotungstine

56
Q

c’est quoi les types de coloration pour le microscope électronique ?

A
  1. ‘ombrage (shadow casting)
  2. Coloration négative
  3. cryodécapage
  4. immunolocalisation cellulaire
57
Q

Comment fonctionne la coloration d’ombrage (shadow casting)

A

vaporise métaux à un angle précis = projette ombre

+ bille témoins servent pour comparer les ombres pour déterminer l’élévation

58
Q

Comment fonctionne la coloration négative ?
utile dans quoi?

A

trempe dans l’Acide phosphotungstine
= accumule dans les creux = sombre = accumule électrons
= relief

-> structure virus

59
Q

Comment fonctionne la coloration cryodécapage ?

A

congèle (-180c)
-> coupe transversal = fracture zone de faiblesse

= ouvre cellule
+ technique ombrage
= voit dans l’échantillon

60
Q

comment fonctionne la coloration d’immuno-localisation cellulaire

A

anticorps spécifique + bille Fe ou Au

= localise prot dans la cellule

-> doit être coupler sinon voit pas

61
Q

c’est quoi les deux types de microscope électronique ?

A
  1. transmission
  2. à balayage
62
Q

comment fonctionne le microscope à transmission?
limite ?

A
  1. Électron traversent l’échantillon

-> détecteur sous l’échantillon (image par transparence) = doit être mince mince
-> limite de résolution faible (le plus faible des microscopes électronique)

63
Q

Comment fonctionne le microscope à balayage ?

A

balais surface échantillon
= électron réfléchis (détecteur latéral)

= effet 3D

64
Q

Comment fonctionne la cryoélectromicroscopie ?

A

congèlation rapide -135 (azote liquide)
= conserve l’intégralité des structures sous vide

(Cryo-EM) = modélise des structure protéique (comme virus, spike)

= une image à la fois = reconstruction 3D par l’ordinateur

65
Q

Comment fonctionne le microscope confocal à balayage laser ?
avantage ?

A

-> illumitation laser UV
-> utilise fluorochrome
-> détecte exclusivement par plan au foyer et élimine fluo si hors foyer

-> balais horizontale, vertical, temporel
-> reconstruction + quantification ordinateur (3D ou 4D)

=> + de contraste et - d’interférence

66
Q

à quel moment on utilise le microscope confocal à balayage laser ?

A
  1. détection ou localisation structure dans cell ou tissu
  2. développement biofilm dans le temps
  3. quantification + positionnement cell morte/vivante
67
Q

Comment fonctionne le microscope à balayage de sonde ?
qui la inventé ? quand ?

A

(effet tunnel)
sonde balais la surface = mesure le déplacement hori/verti et le courant entre les nuages électronique

  • grossissement 10^8
    -> lien intermoléculaire
    -> observation en milieu aqueux

-> Rohrer et bining 1989

68
Q

À quoi sert les billes dans le microscope électronique?

A

Savoir environs la hauteur des structures

69
Q

différence entre microscopie électronique à transmission ou à balayage ?

A

Transmission: transparence dans les photos (voit à travers)

Balayage: ne voit pas du tout à travers

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