numerisation cellulaire Flashcards
a l aide de koi on denombre les cellule obtenu
ide d’un hématimètre,
i.e. une lame de verre épaisse portant, gravé à sa surface, des carrés de dimensions
précises d’une hauteur de 0,1 mm (la chambre à compter).
Chaque hématimètre possède deux chambres à compter
pui on rempli et mnicroscope
kel modele de carre on utilise
e modèle Neubauer, que l’on utilise au laboratoire, est d’une surface de 9 mm .
Le carré central est divisé en 25 carrés délimités par des lignes triples, qui sont à leur
tour divisés en 16 carrés.
precaution kan on compte
. Pour s’assurer de ne compter qu’une seule fois chaque cellule qui sédimente dans la chambre à compter, on compte celles qui touchent aux
délimitations supérieure et à la gauche seulement du grillage de la chambre de comptage.
Quel est le volume d’un grand carré de coin (A) sur l’hématimètre ?
Sachant que 1 µL=1 mm , par quel facteur doit-on multiplier la moyenne de cellules obtenues par grand carré pour obtenir le nombre de cellules/mL ?
Idéalement, on aspire à compter plus de 100 cellules par échantillon pour augmenter la précision du calcul.
Pour dénombrer les cellules lymphocytaires, on compte
les quatre grands carrés de coin (A) et on fait la moyenne du nombre de cellules par grand carré. Cette moyenne sera ensuite multipliée par le facteur de correction
permettant d’obtenir le nombre de cellules/mL. Il faut évidemment se rappeler de corriger le calcul d’énumération cellulaire par le facteur de dilution des cellules
dans le colorant utilisé.
kel coloran on utilise pr enumeration des cellule
’L énumération de cellules nucléées est effectuée en utilisant le bleu de trypan. Ce colorant imperméable n’est pas internalisé par les cellules vivantes, mais les
cellules mortes (perméables) peuvent l’internaliser.
Il s’agit d’un colorant toxique pour les cellules : il faut donc procéder assez rapidement pour ne pas induire de
mortalité cellulaire et ainsi fausser l’énumération cellulaire.
formulee
elisa ckoi
La technique ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) est une technique immunoenzymatique qui permet la détection et le dosage des antigènes ou des anticorps présents
dans une solution.
cmt se fai la tech elisa
En adsorbant l’antigène utilisé pour immuniser la souris au fond d’une plaque, on pourra, à la séance 3, doser les anticorps produits contre celui-ci contenus dans
l’antisérum.
On adsorbe l’antigène à une concentration connue dans le fond de la plaque qui servira à l’ELISA. L’antigène se fixera au plastique en fonction du pH, des forces
électrostatiques et surtout, des forces hydrophobes
