elisa

Question 1

avan de recolter un serum d animal immunisé keskon doi faire

Answer 1

d’abord effectuer un test de dépistage de la production d’anticorps avant de récolter un volume important de sérum d’un animal immunisé

Question 2

a koi ser le test de depistage de la production d anticorps

Answer 2

on prélève par prise de sang un échantillon afin de déterminer

si la production d’anticorps est jugée satisfaisante et décider s’il y a lieu de faire une immunisation tertiaire,

avant de prélever la totalité du sérum et/ou des splénocytes, nécessaires pour la fusion d’hybridome qui permet de produire des anticorps
monoclonaux.

Question 3

on va former koi avec le serum

Answer 3

anticorps monoclonau

Question 4

ds cette experience kan on preleve le sang des souris

Answer 4

des souris deux semaines après l’immunisation secondaire

Question 5

le test de epistage par capture d anticorp permet koi

Answer 5

e par capture d’anticorps, qui permet le dosage et le titrage des anticorps produits par la souris

Question 6

kan la methode de elisa est approprier

Answer 6

lorsque la protéine utilisée pour l’immunisation est relativement pure

Question 7

test de capture d anticotp cki

Answer 7

elisa

Question 8

nomme les 5 etape de l elisa

Answer 8

1. Adsorption de l’antigène sur le support
2. Blocage des sites résiduels
3. Échantillons de sérum
4. Anticorps secondaire
5. Révélation

Question 9

cmt se fai l adsorption de l antigene sur le support

Answer 9

on adsorbe une quantité connue de l’antigène utilisé pour l’immunisation sur une plaque 96 puits (surface d’un
puits = 0,32 cm ) en polystyrène

Question 10

les proteine antigenique se li a koi et cmt

Answer 10

). Les protéines se lient au polystyrène de façon non-covalente et pHdépendante.

Question 11

les proteine antigenic non fixé sur le polystyrene fon koi

Answer 11

Les protéines non fixées au support sont ensuite lavées

Question 12

pr pa ke l anticorp se fox o polysyterene keskon fau

Answer 12

: afin d’empêcher que les anticorps se fixent au support de façon non-spécifique, on bloque les sites résiduels avec une
protéine (élimination du « bruit de fond »

Question 13

apre avoir ajouter les anticorp du sereum keskon fai

Answer 13

les anticorps spécifiques à l’antigène utilisé, présents dans l’antisérum de souris, se fixent de façon spécifique à l’antigène
adsorbé au support.

Les anticorps non fixés sont ensuite éliminés par l’étape de lavag

Question 14

anticorp secondaire ajouté son cmt

Answer 14

des anticorps anti-immunoglobulines de souris conjugués à la peroxydase de raifort, une enzyme, sont ajoutés aux puits

Question 15

anticotps secondaire se fix a ki

Answer 15

Ces
anticorps se fixent aux anticorps de l’antisérum de souris fixés aux antigènes adsorbés au support. Les anticorps secondaires non-fixés sont éliminés par
l’étape de lavage.

Question 16

cmt on revele

Answer 16

par coloratipn

Question 17

cki le chromogene utiliser ds lexperience

Answer 17

: le chromogène utilisé dans ce test est le dihydrochloride o‑phénylènediamine (OPD)

Question 18

OPD ajouté ac ki

Answer 18

equel est ajouté aux puits avec du peroxyde
d’hydrogène (H O ), l

Question 19

le peroxyde d hydrogene cvki

Answer 19

e substrat de l’enzyme conjuguée aux anticorps secondaires

Question 20

donc h202 reagi avec ki

Answer 20

la peroxydase de raifort r

Question 21

h2o2 et peroxydase de reffor on kel conseq pr opd

Answer 21

l’OPD
s’oxyde, ce qui entraîne la coloration jaune du puits.

Question 22

. L’intensité de la coloration est directement proportionnelle à

Answer 22

à la concentration d’anticorps dans le puits

Question 23

cmt on arrete la reaction de chromogene

Answer 23

e avec l’acide sulfurique (H SO )

Question 24

prk on arrete la reaction chromogenic

Answer 24

Une fois la réaction chromogénique arrêtée avec l’acide sulfurique (H SO ) 2M, l’intensité de coloration peut être lue au spectrophotomètre à 492 nm.

Question 25

??

Answer 25

En effectuant des dilutions de l’antisérum et à l’aide de puits contrôles positif et négatif, il est possible de titrer les anticorps produits par la souris. L’utilisation de
l’OPD comme agent de révélation permet une limite de détection de l’ordre d’environ 100 pg/mL

Question 26

Afin d’éviter la contamination croisée entre les puits, dans quel sens devriez-vous les aspirer ?

Question 27

Pourquoi aspirer le premier lavage, mais pas les 2 autres ?

Question 28

À moins d’indication contraire, quel est le diluant à utiliser pour la préparation de solution à partir de poudres ?

Question 29

À l’étape 13, pourquoi aspirer le dernier lavage seulement ?