Nukleinske kisline Flashcards
iz česa so nukleotidi?
*dušikove baze *sladkorne enote *ene ali več fosfatnih skupin
nukleozidi
(deoksi)riboza(C1’) + baza (N9 ali N1), povezani z glikozidno vezjo
nukleotidi
nukleozid + ena ali več fosfatnih skupin
AMP
najpogostejši mononukleotid v celici
nukleinske kisline
polimeri nukleotidov, povezanih s 3’,5’ fosfodiestrsko vezjo
od prostega 5’-konca proti prostem 3’-koncu
nivoji strukture DNA, lastnosti vijačnice
*primarna struktura (zaporedje nukleotidov)
*sekundarna struktura (ponavljajoče se ureditev polinukleotidnih verig)
*terciarna struktura (dodatno zvitje)
desna vijačnica
antiparalelni verigi
stabilizacija vijačnice
H-vezi, pi-interakcije med naloženimi bazami
taljenje DNA
DNA se stali v ozkem temperaturnem intervalu (5-10 oC) *prevoju talilne temperature pravimo temperatura tališča Tm *proces je reverzibilen
Nukleosom
enota, sestavljena iz histona (8) in okoli navite DNA (147 bp) imenujemo nukleosom
dodatno zvijanje DNA
*kompaktnost *odpornost na cepitev *vpliv na uravnavanje podvojevanja in prepisovanja
*topoizomeraze so encimi, ki katalizirajo pretvorbo
manj stabilna oblika
tridimenzionalne strukture RNA
notranje zanke izbokline/lasnične zanke
tRNA
*najmanjše molekule izmed RNA (74-93 nukleotidov)
*oblika L (2D deteljica), tri lasnične zanke
*segmenti z dvojno vijačnico *stabilizacija preko H-vezi
*CCA konec za vezavo ak *antikodonska zanka
nukleaze
*prisotne v vseh celicah, katalizirajo hidrolizo fosfodiesterskih vezi
*razgrajujejo poškodovane nukleinske kisline
*tip a cepijo vez s 3’ -OH skupino
*tip b cepijo vez s 5’ -OH skupino
restrikcijske endonukleaze
*so najbolj specifične endonukleaze (več 100)
*so bakterijski encimi, ščitijo pred bakteriofagi (lastna DNA zaščitena z metilacijo)
eksperimentalna potrditev semikonzervativne replikacije
*gojili E. coli v mediju z NH4Cl, označen z 15Ntežkim izotopom dušika (DNA je težja) *prenesli v medij z 14NNH4Clin spremljali dogajanje skozi generacije
*’težko’ DNA, ki vsebuje dve verigi 15N-DNA
*‘lahko’ DNA, ki vsebuje dve verigi 14N-DNA
*hibridno« DNA
podvojevanje linearne DNA pri evkariontih
*podvojevanje vsakega kromosoma začne hkrati na več izhodiščih (∼30.000 mest ori, ∼100/kromosom)
*enako, kot pri prokariontih poteka v obesmeri *posamezna izhodišča tvorijo replikacijske mehurčke (replikon) *replikacijski mehurčki se na koncu združijo
Dna polimeraze
*encimi, ki katalizirajo sintezo DNA
*za delovanje potrebujejo matrico(starševsko DNA) *potrebujejo Mg2+ione (2 v akt. mestu encima)
*za začetek delovanja potrebujejo predhodno začetni oligonukleod
*podaljševanje nastajajoče verige začne vedno v smeri 5’à3’ *matrična veriga se bere3’à5’ *energijo za reakcijo daje sprostitev molekule pirofosfata in njegova hidroliza do ortofosfata
*lahko imajo eksonukleazno akvnost (sposobnost odcepljanja napačno sparjenih baz)
vrste DNA polimeraz (baktrijske)
*DNA polimeraza III je glavni podvojevalni encim
kompleksna struktura, 10 podenot (900 kDa), večja hitrost *DNA polimerazi I in II pa sodelujeta pri kontrolnem branju in popravljanju napak
delujeta dodatno kot nukleazi (cepita fosfodiestersko vez)
helikaza
*protein za razpiranje DNA *veže se na izhodišče replikacije *prekine H-vezi *reakcija je sklopljena s hidrolizo ATP
DNA –giraza
*pomaga pri odvijanju verig DNA (zmanjša napetost) *oblikujejo se replikacijske vilice *po vezavi DNA deluje encim v treh korakih
*cepi eno izmed verig DNA (nukleof. napad Tyr)
*se prestavi preko te cepitve
*ponovno poveže DNA
proteini SSB
*vežejo se na enoverižno DNA *stabilizirajo izpostavljene verige (zaščita pred nukleazami)
primaza
je RNA polimeraza, ki najprej sintetizira kratko zaporedja RNA (RNA primer, 4-10 nt)
DNA polimeraza III in I med replikacijo
*podaljševanje vodilne verige gre v smeri napredujočih replikacijskih vilic
*podaljševanje zaostajajoče verige gre v obratni smeri , dokler ne doseže RNA-primerja
*RNA-primer se z eksonukleazno aktivnostjo DNA polimeraze I v smeri 5’à3’ odstrani
*DNA polimeraza I sintetizira predel RNA primerjev -zapolni vrzel
*sintetizira se nov RNA primer za nov Okazakijev fragment
DNA ligaza
katalizira nastanek fosfodiestrske vezi