Módulo 5: Ciclo celular, DNA e Ploidia Flashcards
O que é necessário para que uma fase do ciclo celular avance?
CDK (cyclin dependent kinase) e ciclinas (regulam CDK)
Em que partes se divide o ciclo celular?
Interfase:
* G1 (crescimento)
* S (duplicação DNA)
* G2 (Crescimento e preparação para mitose)
Mitose (Profase, metafase, anafase, telofase)
As células da primeira fase do ciclo celular continuam sempre para S?
Não! Podem ficar retidas em G0 para reparação
Alterações cromossómicas e células cancerosas são resultado de um ciclo celular …
descordenado
O que é constante durante o ciclo celular: a quantidade de CDK ou a sua atividade?
A quantidade
Que agentes podem ser identificados por imunofenotipagem durante o ciclo celular? Que informação nos dão?
- Proteínas associadas ao controlo do ciclo celular; detetar a fase do ciclo celular
Ki-67 está presente em todas as fases menos na de repouso (G0)
Qual é o constituinte celular mais medido na avaliação do ciclo celular?
Conteúdo de DNA
A quantificação do DNA celular serve para avaliar:
- nível ploidia
- posição no ciclo celular
- células apoptóticas
Em citometria, o conteúdo em DNA é definido com os termos …
DNA ploidy / DNA index (DI)
Qual é o DNA index ao longo do ciclo celular?
E na apoptose?
- G0/G1 = 1
- G2/M = 2
- S: 1< DI < 2
- apoptose <1
O que é a ploidia celular?
Nº de cromossomas da célula
O nº normal de cromossomas de uma célula somática é:
2n
Aneuploidia é…
nº anormal de cromossomas
Para marcar o conteúdo em DNA, deve-se usar um fluorocromo estequiométrico?
Sim
Os resultados da medição do conteúdo de DNA são apresentados comumente na forma de…
histogramas de frequência
A coloração de DNA por ser feita em células … ou …
Vivas ou fixas
Quais são os corantes mais usados para marcar DNA de cell. vivas
- Hoechst 33342
- DRAQ5
Hoechst é citotóxico, principalmente quando incidido com UVs
Quais são os corantes mais usados para marcar DNA de cell. fixadas
- DAPI
- PI
- 7-AAD
A utilização de PI requer pré-tratamento de…
RNAse, uma vez que o PI também se liga ao RNA
Apesar do DAPI ser específico do DNA, este não é…
estequiométrico
As normas de análise de DNA (estandardização) foram feitas por …
eritrócitos de truta e galinha
Para que haja homeostase, há morte celular. Como se chama esse processo?
Morte celular programada
A partir de critérios … existem … tipos de morte celular:
Morfológicos
3
* apoptose: tipo 1
* morte celular autofágica: tipo 2
* necrose
Qual é a principal via de morte celular?
Apoptose
Quais as características da apoptose?
- porcesso organizada
- dependente ATP
- degradação DNA internucleossomal regularizada
- membrana celular intacta
- não há inflamação
- ativação de caspases
A autofagia é resposta a…
fome de nutrientes e stress ambiental
Também relacionado com determinadas doenças
A necrose está associada a …
- esgotamento do ATP
- inchaço dos organelos
- rotura celular
- inflamação
- fragmentação do DNA tardia e aleatória
De que forma operam as caspases?
De forma hierárquica como iniciadores e efetores.
Existem quantas vias de sinalização para ativação das caspases?
2
Intrínseca (stress celular) e Extrínseca (com recetores de morte)
Os ensaios para a apoptose são diversos uma vez que …
a apoptose é um processo regulado por vários passos.
Que métodos existem para detetar a apoptose?
- ativação de caspase
- fragmentação de DNA
- alterações na membrana
- dano mitocondrial
As técnicas que detetam a fragmentação do DNA são específicas da apoptose?
Não. Mas podem detetar danos numa variedade de morte celular
Mesmo assim, é o método mais usado para destacar cell apoptóticas.
A deteção da degradação do DNA faz-se normalmente por … .
As céll. apoptoticas demonstram um perfil … enquanto que as necróticas…
Eletroforese em gel
Apoptose: escada
Necrose: esfregaço
Que métodos de marcação de DNA podem ser usados?
- enzimática (ISNT e TUNEL)
- flurocromo (intercalam com DNA, por isso o sinal pode ser menor em apoptose)
Que característica está associada à membrana celular de células em apoptose?
É dependente de caspase?
passagem de fosfatidilserina da membrana interna para a externa
Sim
Também se usa PI em ensaios da membrana. Para quê?
Com afinidade à fosfatidilserina, usa-se …
Uma vez que distuingue células saudáveis e nas fases iniciais de apoptose das células nas fases finais de apoptose
Annexin-V
A passagem da fosfatidilserina para a membrana externa acontece nos estágios iniciais ou finais?
Iniciais
