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Citometria e Imunologia > Módulo 3: Citometria de Fluxo > Flashcards

Módulo 3: Citometria de Fluxo Flashcards

1
Q

O que é a Citómica?

A

Análise citométrica de citomas (sistemas celulares, estruturas celulares, etc)

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Q

O que pode ser analisado pela citómica?

A
  • DNA/RNA
  • Funcionalidades celulares: crescimento, viabilidade, morte, diferenciação
  • Metabolismo celular
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3
Q

A citometria é uma análise qualitativa/quantitativa de …?

A

Quantitativa de células e/ou sistemas celulares

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4
Q

A citometria de fluxo é usada para avaliar clusters celulares ou cell individuais?

A

Cell individuais

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Q

Quais são as características da citometria de fluxo?

A
  • Rapidez
  • sensibilidade
  • medição de vários parâmetro ao mesmo tempo
  • medição de cell individuais
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6
Q

A citometria de fluxo mede as características … e … de partículas … num fluxo de fluído.

A
  • fisicas
  • quimicas
  • individuais
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7
Q

A citometria de fluxo permite a medição individual da … e da … de luz

(ambos são fenómenos luminosos)

A
  • fluorescência
  • dispersão
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8
Q

Baseados nas características citométricas, como se chamam os sistemas capazes de separar fisicamente as células em citometria de fluxo?

A

Cell sorters

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9
Q

Quais são as limitações da citometria de fluxo?

A
  • limitada a amostras líquidas
  • análise de dados sofisticada
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10
Q

As características das medições da citometria de fluxo são fornecidas em forma de …?

A

Distribuição

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11
Q

A maioria das medições de citometria de fluxo utiliza marcadores de que tipo?

A

Fluorescentes

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12
Q

Aplicações citometria de fluxo:

A
  • imunofluorescencia
  • Cinética do ciclo celular e da célula
  • genética
  • biologia molecular
  • microbiologia
  • oceanografia biológica
  • biologia do câncro
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13
Q

A análise celular da citometria de fluxo analisa parâmetros como:

A
  • forma
  • dimensões
  • estrutura
  • composição
  • (enumeração de cell)

Ex: análise do picoplâncton (não são usados corantes -> analísa-se clorofila e caratenoides) ou corantes fluorescentes para DNA ou proteínas; Caract. mais importante: enumeração

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14
Q

Quais são os blocos de construção de uma citómetro de fluxo?

A
  1. sistema de fluídos (fluidics)
  2. sistema ótico (optics)
  3. sistema eletrónico (eletronics)
    Extra: cell sorters
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15
Q

Os sistema ótico inclui: 1)… e 2)…

A
  1. fonte de iluminação
  2. filtros que direcionam a luz após interceção com o sistema de fluidos
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16
Q

O sistema eletrónico converte a … em … para … e …

A

luz detetada em sinal
visualização e análise

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17
Q

A info recolhida depois de uma análise de citometria de fluxo depende da interação entre … e a … analisada.

A

luz e partícula

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18
Q

Que tipos de câmaras de citometria de fluxo existem?

A
  • básicas: cell de quartzo
  • fluxo de amostra emerge para o ar/ambiente
  • baseadas em microscópios
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19
Q

Qual é a função do sistema de fluídos?

A

Transportar as partículas (amostra) numa corrente, até ao sistema de iluminação.

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20
Q

De que maneira é possível que só uma partícula passe pelo feixe de luz num determinado momento?

A amostra tem que ser sujeita a quê?

A
  • Aplicando uma bainha de fluido (sheath fluid)
  • Quando o fluxo se mantém estável
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21
Q

A bainha de fluido acelera/desacelera as partículas e mantêm-nas/afasta-as do centro. A este processo chama-se:

A
  • Acelera
  • mantêm-nas
  • Foco hidrodinâmico
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22
Q

A amostra e a bainha de fluido misturam-se?

A

Nas condições ideiais não!

23
Q

Quais são as condições ideiais para que a bainha de fluxo e a amostra não se misturem?

A
  • diferença grande de densidade
  • diferença grande de velocidade
  • corrente estável
24
Q

Como caracterizas as velocidades da bainha de fluido e de amostra dentro da flow chamber?

A
  • Velocidade da bainha de fluxo é inferior à da amostra
25
Q

Quais as características ideais do fluxo na flow chamber?

A

Fluxo menos intenso -> feixe de amostra estreito -> eventos mais espaçados -> melhor resolução

26
Q

Qual o diâmetro normal do fluxo de amostra?

A

10 μm

27
Q

Para além de hidrodinâmica, o que pode posicionar as partículas numa única fila?

A

Acústica

28
Q

A utilização de acústica em citometria de fluxo, constitui aparelhos de medição de alta …

A

Precisão

29
Q

As fontes de luz podem ser:

A
  • lasers
  • arc lamps
  • LEDs
30
Q

Quais as características dos lasers?

A
  • feixe alta intensidade
  • luz monocromática
  • feixe de pequeno tamanho (reduz probabilidade de encontrar mais do que uma cell)
31
Q

Quais as características das Arc Lamps?

A
  • necessitam de filtros óticos para selecionar comprimentos de onda
  • mais baratos para observar fluorescência forte
  • não dão sensibilidade suficiente para fluorescência fraca

Lâmpadas xénon e mercúrio

32
Q

O sistema luminoso compreende o sistema de … e o de …

A

Excitação e captura

33
Q

Os sistemas de captura da luz consitem em … e … que direcionam … para detetores óticos.

A
  • espelhos e filtros
  • comprimentos de onda específicos
34
Q

Que fenómenos luminosos acontecem quando um feixe de luz atinge uma partícula

São 6

A
  1. reflexão
  2. absorção
  3. difração
  4. fluorescência
  5. emissão
  6. dispersão
35
Q

De que depende a dispersão da luz?

A

Características físicas das partículas
* dimensões
* morfologia
* complexidade da superfície

36
Q

Caracteriza Forward-scattered light

A
  • proporcional às dimensões/ superfície da cell
  • detetada no mesmo sentido que o feixe é emitido
37
Q

Caracteriza Side-scattered light

A
  • proporcional à complexidade/forma da cell
  • resulta no desvio do percurso do feixe por reflexão e/ou refração
  • colhida num ângulo de 90º em relação ao feixe inicial
38
Q

Os sinais de dispersão lateral + fluorescência são direcionados para …

A

Tubos fotomultiplicadores

39
Q

Os sinais de dispersão frontal são recolhidos por … e convertidos em …

A

fotodiodo … corrente

40
Q

As medições de dispersão frontal e lateral permitem diferencial cell com base…

Que exemplo de cell podes dar?

A
  • dimensões (frontal)
  • complexidade interna (Lateral)

Leucócitos (linfócitos, monócitos, neutrófilos)

41
Q

Para onde são direcionados os sinais luminosos depois de passarem pelas partículas?

A

Para sistemas de espelhos e filtros óticos

42
Q

Como é otimizada a especificidade de cada detetor para determinados comprimentos de onda?

A

Através de filtros óticos: Bandpass Filters

43
Q

A banda de comprimentos de onda que chega aos detetores é próxima do pico de …

A

emissão do pigmento

Um Bandpass filter 500/30 só permite a passagem de luz numa gama próxima dos 500 nm

44
Q

Qual a diferença dos shortpass filters para os longpass?

A
  • Longpass: passagem de luz com comprimento de onda superior ou igual do referênciado
  • Shortpass: passagem de luz com comprimento de onda inferior ou igual ao referenciado

Os Bandpass permitem a passagem de comprimentos de onda superiores e inferiores ao de emissão

45
Q

O que são beam splitters?

Um exemplo de um beam splitter é:

A

Direcionam diferentes comprimentos de onda para direções diferentes

Espelhos dicroicos -> 560 SP transmite comprimentos de onda iguais ou inferiores; os superiores são refletidos em 45º em relação ao de incidência

46
Q

Quantos detetores são necessários para medir dispersão de luz frontal?

A

1

47
Q

Para … e dispersão de luz … são usados fotomultiplicadores.

A
  • fluorescência
  • dispersão frontal
48
Q

A sensibilidade dos detetores depende do …

A

comprimento de onda da luz

49
Q

Os sinais luminosos são convertidos em elétricos através de:

Quais os mais sensíveis?

A
  • fotorrecetores
  • fotodiodos
  • tubos fotomultiplicadores

Fotomultiplicadores (para disperção lateral e fluorecência)

50
Q

Como se forma o pulso elétrico?

A
  1. Partícula passa pelo feixe luminoso
  2. desvio da luz ou fluorescência da partícula
  3. luz/fotão atinge fotorrecetor
  4. conversão em eletrões (proporcional)
  5. maior corrente elétrica
  6. corrente ampliada e convertida em voltes
  7. voltes convertidos em sinal digital
51
Q

O ponto mais elevado do pulso elétrico ocorre quando:

A

A partícula se encontra no centro do feixe / máximo de luz refletida ou de fluorescência é alcançado

52
Q

O pico do sinal reflete…

A

a fluorescência total da célula

53
Q

Para exibir dados de um único parâmetro, usa-se um histograma…; para dois dados um histograma …

A

univariado
bivariado/citograma

54
Q

Um cell sorter, pode separar as células como?

A
  • mecanicamente
  • aplicação de voltagem ao fluxo

Citometria e Imunologia (5 decks)

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