Microscopie et Coloration Flashcards
Réflexion
Onde rebondit, responsable de la couleur
Absorption
Énergie de la lumière conservée par l’objet.
Peut être émise à nouveau (luminescence ou fluorescence)
Transmission
Passage de la lumière à travers des objets sans déviation
Diffraction
Déviation ou courbure des rayons lumineux lors de leur passage à travers une ouverture de petite taille
En quoi la diffraction est limitante en microscopie?
La longueur d’onde doit être plus petite que le trou
Réfraction
Déviation de la lumière en fonction de la densité de la matière qu’elle traverse.
Utiliser pour faire du contraste (indice de réfraction spécimen et milieu doit être différente)
Résolution
Capacité d’une lentille à présenter des objets distinctement, sans chevauchement (lambda courte = meilleure résolution)
Qu’est-ce que la microscopie optique?
Utilisation de l’énergie du spectre lumineux et des lentilles pour observer.
Dépend de la source lumineuse, du type de lentille, du condensateur et du récepteur
Quels sont les 5 exemples de microscopes optiques?
1) Fond claire (visible)
2) Fond noir (visible)
3) Contraste de phase (visible)
4) À fluorescence (UV)
5) Confocal (lazer)
MO - Fond clair
Échantillon plus foncé sur fond brillant.
Spécimens frais et contrastés ou morts et colorés (utile pour dénombrement)
1000X = max
MO - Fond noir
Échantillon « brillant » sur fond noir.
Spécimens vivants invisibles en fond clair, impossible à colorer (si oui déformé)
Condensateur modifié avec disque opaque (lumière réfléchie sur le spécimen atteint l’objectif)
Pour voir les structures générales
MO - Contraste de phase
Observation des STRUCTURES INTERNES d’organismes vivants (non fixés, non colorés)
Pour augmenter le contraste entre structures d’épaisseurs variables (si brillant= faible n, si foncé = fort n)
MO - Fluorescence
Utilisation de la capacité à absorber la lumière U.V. et l’émettre dans le visible
Fluorescence
Capacité à absorber les UV et émettre de la lumière visible (fluorescence naturelle ou nécessite l’utilisation de fluorochromes).
Fluorochrome
Substance naturellement fluorescente ou colorant fluorescent absorbant UV et les réémets en lumière visible.
Filtre d’émission
Retient les UVs et laisse passer la lumière visible émise par le
fluorochrome
MO - Immunofluorescence
Utilisation d’anticorps associés à des fluorochromes.
Technique très spécifiques ou les anticorps liés aux fluorochromes vont se lier spécifiquement à un antigène ou à une protéine)
MO - Confocal
Pour la construction d’image tridimensionnelles (2D ou 3D) en utilisant les fluorochromomes.
Un laser balai l’échantillon couche par couche.
Super pour l’étude de biofilm.
Qu’est-ce que la microscopie électronique?
Utilisation d’un faisceau d’électrons (meilleur résolution) et des électroaimants (pas de lentille)
Idéal pour visualiser des spécimens de moins de 0,2 µm (virus et structures bactériennes internes)
Spécimen non-vivants, nécessite une longue préparation.
Nécessite une mise sous vide du système et donne des images en noir et blanc seulement.
Quels sont les 2 exemples de microscopes électroniques?
À balayage (SEM) et à transmission (TEM)
ME - À transmission (TEM)
Deux dimensions
Échantillons en coupe très minces (structures internes avec différentes
opacités)
Électrons traversent un spécimen jusqu’au détecteur
Grossissement jusqu’à 100 000X
ME - À balayage
Trois dimensions
Pour images tridimensionnelles des surfaces (structures externes)
Électrons du spécimens renvoyés vers un capteur
Grossissement jusqu’à 10 000X
Qu’est-ce que la microscopie à sonde?
Utilisation du principe du Braille avec une sonde et un signal électrique (pas de lumière ou d’électrons)
MS - Force atomique
Mesure la topographie des objets et en construit une image.
Utilisable en fonction du temps
Matériel vivant
Grossissement jusqu’à 100 000 000x
Nomme les deux techniques afin d’observer un échantillon en MO
Montage frais (pique) et montage fixe
Colorant basique?
Sels d’ions positifs qui vont se lier aux bactéries (car chargée négativement).
Colorant acide?
Sels d’ions négatifs qui ne vont pas se fixer aux bactéries, mais aux structures positives en arrière plan (coloration négative)
Coloration simple
Utilisation d’un colorant basique.
Pour déterminer la taille, la forme ou le groupement.
Coloration différentiel
Nécessite au moins deux colorants
Pour discriminer pour des caractéristiques distinctives des microorganismes
Coloration négative
Utilisation d’encre de Chine pour révéler une capsule
Coloration des endospores
Coloration de Schaeffer-Fulton
Coloration des flagelles
Mordant, puis colorant basique
Décrit les étapes de la coloration de Schaeffer-Fulton
1) Fixer le frottis
2) Vert de malachite (chauffage et évaporation)
3) Lavage à l’eau
4) Contre-coloration à la safranine
5) Lavage à l’eau
Décrit les étapes de la coloration de Gram
1) Colorant (violet de cristal)
2) Mordant (lugol) pour solidifier le complexe dans la paroi
3) Décoloration (éthanol 95%) pour lavage
4) Contre-colarant (safranine)
Décrit les étapes d’une coloration acido-alcoolo résistante
1) Fushine basique chauffée (augmente la fluidité de la membrane d’acide nicolique), rinçage à l’eau
2) Décoloration acide-alcool, puis rinçage à l’eau
3) Bleu de méthylène (contraste), puis rinçage à l’eau
Si rouge= présence d’acide nicolique qui conserve le fushine dans la paroi
