Microscopie Flashcards
Définit ce qu’est la lumière (principe physique)
La lumière est des particules (photons) qui possèdent de l’énergie et qui se déplacent dans l’espace selon des axes sinusoïdaux appelés ondes électromagnétiques (ondes lumineuses)
Quelles sont les deux théories de la lumière ?
Particule (λ) ou onde (E)
Théorie des ondes, définis les paramètres de la lumière (lesquelles et leurs unités)
- Sinusoïdale
- Possède une longueur d’onde λ nm (distances entre les deux maximas successifs)
- Possède une amplitude A (hauteur onde par rapport à l’axe horizontal)
- Possède une fréquence v en Hz
- Possède une vitesse c (constante) : 2,998x10^8 m/s
- Constante de Planck : 6,626x10^-34 Js
V ou F. La longueur d’onde λ est inversement proportionnelle à la fréquence
V. Because λ = c/v
Explique la relation λ = c/v
Plus la fréquence v diminue, plus la longueur d’onde λ augmente (squish l’onde donc more wrinkly)
Aussi c est constante (soit la vitesse 2.998x10^8 m/s
Qu’est-ce que l’énergie de l’onde lumineuse ? Unité et formule
E en joules
Où E = hv donc plus la fréquence (v) augmente plus E augmente
(h = cst de Planck)
V ou F. Si la fréquence augmente, la longueur d’onde baisse
V
V ou F. Si la fréquence augmente, l’énergie diminue
F. Selon E = hv, plus la fréquence augmente, plus l’Énergie augmente
Caractéristique de la théorie des ondes concernant le déplacement de la lumière
La lumière se déplace dans toutes les directions !
Définis le spectre électromagnétique
Décomposition du rayonnement électromagnétique en terme d’énergie ou de longueur d’onde (nm) (et on y délimite les ondes visibles ou non ) va de 10^-14 nm à 10^2 nm
Décris-moi le spectre UV (en nm)
de 30-300 nm (λ)
Décris-moi le spectre Visible (nm)
de 400-700 nm (λ). IL s’agit d’une partie infime du spectre électromagnétique et la lumière blanche possède toutes les couleurs
Décris-moi le spectre infrarouge
IF : de 700-3 000 000 nm
Faible E, Faible f, mais longue λ
V ou F. Plus on avance dans le spectre électromagnétique (plus la longueur d’onde augmente), plus la fréquence diminue
V. Le nb d’oscillations/cycles diminue (un cycle est 1 seconde)
Nomme moi tous les Phénomènes optiques (11)
Émission
Absorption
Transmission
Réflexion
Réfraction
Réfraction
Réfringence
Diffraction
Polarisation
Biréfringence
Fluorescence
Aberrations (sphéricité, chromatique, courbure de champs)
Qu’est-ce que le phénomène d’émission
La production de rayonnement électromagnétique à partir d’une source lumineuse (conversion énergie électrique ou autre en énergie lumineuse). C’est la source qui fait la conversion
Qu’est-ce que le phénomène d’absorption
Lorsqu’un corps reçoit une qté de lumière et n’en laisse passer qu’une partie (ex. les feuilles sont vertes car elle n’absorbent pas le vert). Si on absorbe de la lumière on absorbe de l’énergie (ex. chandail noir au soleil)
Qu’est-ce que le phénomène de transmission
La lumière qui a réussi à traverser l’objet et elle est mesurable !
Qu’est-ce que le lien entre émission, absorption et transmission ?
Le rayon incident est émit (émission) –> traverse l’objet dont une partie est absorbé, et une autre partie ressort donc transmise
La proportion de lumière absorbée et tranmise devrait donner 1
V ou F. Même les corps transparents absorbent la lumière
F. Ils laissent passer la lumière totalement donc la lumière est 100% transmise
Qu’est-ce que le phénomène de réflexion
Effet miroir, lumière réfléchie par l’objet
Qu’est-ce que le phénomène de réfraction
La déviation d’une onde lorsque sa vitesse change entre les deux milieux de densité optique différente (lumière déviée par un changement de milieu)
Qu’est-ce que le phénomène de réfraction (formule)
n = (sin i)/(sin r)
n est l’indice de réfraction (air = 1, eau =1,33, etc)
Qu’est-ce que le phénomène de réfringence
Tendance d’un MILIEU à causer la réfraction, donc plus un milieu est dense plus il est réfringent, donc plus son indice de réfraction est élevé
Qu’est-ce que le phénomène de diffraction
La déviation des rayons causée par la rencontre d’une arrête vive. Donc les rayons qui frappe “l’ouverture” physique d’un prisme ou whatever objet qui laisse passer la lumière. Les rayons sur les bords sont donc diffractés
Qu’est-ce que le phénomène de polarisation
Phénomène qui sélectionne la direction de vibration des rayons lumineux (laisse passer les ondes du même SENS que la FENTE)
Quel est le lien entre la polarisation et le phénomène de biréfringence ?
Car la biréfringence est une propriété des matériaux qui affecte la polarisation de la lumière.
C-a-d, dans les matériaux anisotropes, l’indice de réfraction dépend de la direction et de la polarisation de la lumière qui les traverse.
En conséquence, un faisceau lumineux qui entre dans un matériau biréfringent se sépare en deux rayons distincts, chacun polarisé dans une direction perpendiculaire à l’autre
V. OU F. La lumière polarisée vibrant dans un axe est moins éblouissante
V. car ce n’est pas tous les rayons qui transmet suite au filtre polarisateur
Décris le principe de fluorescence
Capacité d’une substance d’absorber la lumière de courte longueur d’onde et d’émettre une lumière de plus longue longueur d’onde ! (car é veut retourner à son niveau d’énergie initial
Mais besoin d’un fluochrome pour émettre et d’une lumière excitatrice courte (ex microsscopie a fluorescence avec lumière UV)
V ou F. Impossible qu’un corps émette de la fluorescence sans fluorochrome
Faux. il existe des corps qui émettent de la fluorescence primaire (corps possèdent des constituants fluorescent) vs secondaire lorsqu’il a “besoin” qu’on ajoute des fluochromes
Différence entre la fluorescence et la phosphorescence
La phosphorescence implique que la fluorescence persiste dans l’obscurité, même après l’exposition au rayons UV
C’est quoi une aberration optique
Un phénomène où la qualité de l’image formée est moins bonne lorsque les rayons traverse une lentille imparfaite (donc les rayons ne convergent pas tous au foyer secondaire, après la lentille)
Il n’y a aucune lentille parfaites, quelles sont les 3 types d’aberrations causées par une lentille ?
- Aberration de sphéricité
- Aberration chromatique
- Aberration de courbure de champs
Décris-moi l’aberration de sphéricité
Inexactitude de convergence des rayons au foyer causée par la courbure de la lentille (réfraction). C-a-d, les rayons qui traversent la lentilles ne convergent pas tous sur le MÊME point (donc pas tous au foyer).
Résultat : Image centre clair mais périphérie un peu floue
Décris-moi l’aberration chromatique
Causée par RÉFRACTION inégale des différentes longueurs d’onde de la lumière.
Résultat : Image floue avec frange colorée
V ou F. Les ondes lumineuses de plus PETITES longueurs d’onde sont les plus FORTEMENT RÉFRACTÉS
V. La lumière blanche est décomposée en rayons où les plus grosses longueurs d’ondes sont le moins réfractés et les plus petites sont le plus réfractés
Décris-moi l’aberration de courbure de champs
Lorsque l’objet est asymétrique par rapport à la lentille, il n’a pas la même forme ; car l’image se forme sur une surface courbe plutôt que plane
Résultat : IMPOSSIBLE de faire une mise au pt sur la totalité du champs en tout temps
V ou F. On peut corriger les aberrations optiques en superposant des lentilles convergentes et divergentes
V. En acolant les lentilles Convergente (concentre l’image) et Divergente (diverge l’image)
V ou F. Les rayons qui traversent une lentille sont déviés par réfraction
V.
Comment se forme l’image ?
Grâce aux prolongements des rayons diffractés par la lentille convergente ou divergente
Foyer principale vs secondaire
Le foyer principal est le point où les rayons parallèles à l’axe optique convergent après avoir traversé la lentille
C’est quoi la distance focale ?
la distance qui sépare le plan focal (point du foyer) du centre de la lentille
L’image formée avec les microscope, comment l’objectif agrandit l’image ?
L’image formée avec la lentille convergente quand l’objet est situé “en dehors” de la distance focale.
En microscopie, l’échantillon (ou l’objet) est généralement placé très près de l’objectif, mais toujours en dehors de la distance focale de ce dernier
Comme pour toute lentille convergente, si l’objet est placé en dehors de la distance focale, l’objectif produit une image réelle et inversée de l’objet (image intermédiaire).
L’oculaire agit comme une loupe et crée une image virtuelle agrandie de cette image intermédiaire, permettant à l’utilisateur de voir une image encore plus agrandie.
V ou F. Plus l’objet est éloignée de la lentille plus l’image obtenue est petite
V.
Types d’objectifs à immersion en microscopie
Anneau noir = huile à immersion
Anneau orange = glycérine
Types d’objectifs en microscopie (5) (les lentilles de corrections dans l’objectif)
- Achromatique (Ø ou A)
- Planachromatique (PL ou PLAN)
- Semi-apochromatique (SEMI-APO)
- Apochromatique (APO)
- Planapochromatique (APOPLAN)
Objectifs Achromatique (Ø ou A)
Achro donc corrige le bleu et rouge
Objectifs Planachromatique (PL ou PLAN)
Achro donc corrige le bleu et rouge
Corrige la courbure de champs (plan)
Objectifs Semi-apochromatique (SEMI-APO)
achro donc corrige bleu et rouge
meilleur définition/contraste, car c’est un ensemble de lentilles (+fluorine)
Objectifs Apochromatique (APO)
Corrige les 3 : bleu, rouge et VERT
Corrige SPHÉRICITÉ mais pas la courbure
Objectifs Planapochromatique (APOPLAN)
Corrige les 3 : bleu, rouge et VERT,
Corrige sphéricité ET courbure de champs
Différence entre aberration de sphéricité et courbure de champs
sphéricité = centre clair mais contours confus (image non déformée)
courbure de champs = mise au pt imparfaite sur la totalité du champs déformant l’image
Types d’objectifs en microscopie de routine (2-3)
- Achromatique (Ø ou A)
- Planachromatique (PL ou PLAN)
- Semi-apochromatique (parfois) (SEMIM-APO)
Types d’objectifs en microscopie de recherche (3)
- Semi-apochromatique (SEMI-APO)
- Apochromatique (APO)
- Planapochromatique (APOPLAN)
Composantes du microscope qui maintient lame
Platine
Surplatine (qui relie verniers (mesures) et valets)
Valets
Rôle d’un condensateur (collecteur) de microscopie en fond clair
Ensemble de lentilles (sous la platine) qui converge les rayons lumineux en un point vers l’objet
Rôle des diaphragmes de microscopie en fond clair
Disque opaque avec une ouverture de diamètre réglable
Diaphragme d’ouverture (sous le condensateur) : détermine la quantité de lumière qui entre dans le condensateur (contraste)
Diaphragme de champs (détermine le diamètre du faisceau lumineux qui sort de la source
uV ou F. Les oculaires dans la microscopie en fond clair sont composés d’au moins deux lentilles
V. Au moins deux lentilles convergentes qui jouent le rôle de loupe
Les types de filtres de microscopie en fond clair (entre la source lumineuse et le condensateur)
- Filtre neutre (réduit intensité faisceau)
- Filtre de diffusion (augmente diamètre faisceau atteignant le diaph d’ouverture)
- Filtre de résolution bleu ou violet (augmente résolution)
- Filtre de contraste (augmente ou réduit contraste obj/fond)
- Filtre UV (pour absorption/transmission)
- Filtre IR (absorbe chaleur pour protect éch)
Le trajet de la lumière (7 étapes) en microscopie en fond clair
- Lampe (halogène au tungstène)
- Diaphragme de champs
- Condensateur avec le diaphragme d’ouverture
- Objet à observer
- Objectif
- Tube optique
- Oculaires - yeux
Le but de l’éclairage de Koehler
Méthode de réglage d’un microscope qui permet d’obtenir un spécimen éclairé de façon uniforme sans trop d’éclat, en évitant les maux de têtes et la fatigue des yeux
Étapes de l’éclairage de Koehler (6)
- Mise au point a 10X (réhostat 50%)
- Fermer le diaphragme d’ouverture
- Fermer le diaphragme de champs
- Ajuste la hauteur du condensateur (jusqu’à voir un hexagone aux contours définis)
- Centrer l’hexagone avec les vis d’ajustement du condensateur
- Ouvrir le diaphragme de champs juste assez pour que l’hexagone disparaisse
Qu’est-ce que l’ouverture numérique en microscopie ?
Dimension de l’ouverture par laquelle la lumière peut entrer dans l’objectif ! Plus l’objectif a un gros grossissement plus l’angle augmente, donc plus de lumière entre (mais le champs de vision est plus petits donc les objects paraissent plus sombres donc doit ajuster la lumière pour résolution)
O.N = n x sinθ
θ = angle augmente lorsque rapproche l’objectif vers objet
n = indice de réfraction de la lumière dans le verre (1,6) dans l’huile (1,52) dans l’air (1)
V ou F. Plus l’angle θ est grand, plus O.N est grand, donc plus le grandissement augmente
Vrai
Rôle de l’huile à immersion
- Augmente l’indice de réfraction (et donc on ne perd pas de rayons), donc mise au point peut être totale
V ou F. Moins de lumière qui pénètre l’objectif, plus la résolution de l’image augmente !
F. L’inverse
Définit ce qu’est la résolution
Capacité du microscope à donner une image claire et détaillée. La résolution limite est donc la plus petite distance entre deux points qui peuvent encore être perçus comme non-fusionnés
La formule de résolution
d(µm) = λ(µm) * (0,61 / O.N.)
Attention conversion nm en µm !
Quel lien en le grossissement et la profondeur de champs ?
Le grossissement diminue la profondeur de champs
Le diamètre de champs vs la profondeur de champs
La largeur de l’objet qu’on voit sans le déplacer vs l’épaisseur de l’objet qu’on voit sans changer la mise au point
Le lien entre le champs microscopique vs les objectifs utilisés
Le champs diminue plus l’objectif augmente
Quel est le résultat final obtenu par le système optique du microscope ?
Réelle, inversé et très agrandit (vs objet initial)
Formation de l’image finale du microscope (étapes)
- Lumière émise par source
- Objet est situé plus loin que objectif et son foyer objet
- Les 3 rayons incident sur la lentille (objectif) vont créer une image réelle, inversée et plus grande (après foyer image)
- L’image formée par l’objectif devient l’objet de la lentille oculaire qui est plus près l’oculaire que le foyer objet de celle-ci (à l’intérieur de distance focale)
- L’image virtuelle obtenue est très agrandit et se rend à notre oeil
- Le cristallin est la 3e lentille et l’image s’affiche sur la rétine
- L’image finale est virtuelle, inversée et très agrandit
Nomme-moi les microscopies spécialisées
- Fond noir
- Contraste de phase
- Lumière polarisée
- Fluorescence
- Électronique
Pourquoi la microscopie en fond noir ? Principe ?
But : augmenter le contraste d’objet incolores, transparents et trop semblables à l’environnement
Principe : Rayons obliques dirigés vers objets (déviés de la lentille frontale de l’objectif) via condensateur spécial
Résultats : les rayons réfractés par objet entre dans l’objectif (image brillante)
Types de condensateur en microscopie en fond noir
- Condensateur parabolique (petite ouverture numérique)
- Ultracondensateur (plus grosse ouverture numérique)
Pourquoi la microscopie à contraste de phase ? Principe ?
But : augmenter le contraste d’objet incolores, transparents et trop semblables à l’environnement (amplifier les variations des rayons directs et déphasés)
Principe : Rayons direct (aucun obstacle) et déphasés (réfractés ou retardé) via diaphragme annulaire et objectif Phaco (anneau de phase qui ralentit les rayons déphasés de total de 1/2 λ ! PH1 pour 10X et PH2 pour 40X
Résultats : l’image contient tous les rayons et est plus contrastés
Détail important par rapport aux anneaux annulaire et de phase dans la microscopie à contraste de phase ?
Doivent être parfaitement alignés, sinon image floue! ON l’aligne avec la lunette téléscopique
En quel contexte la microscopie de contraste de phase est mal adaptée ?
- Si l’échantillon se déplace en hauteur sur la lame (faible profondeur de champ)
Pourquoi la microscopie à lumière polarisée ? Principe ?
But : Observe échantillon (et ses détails) selon sa capacité à changer le plan de vibration de la lumière (biréfringence)
Principe : Filtre polariseur (polarise la lumière dans un plan) et le filtre analyseur est perpendiculaire au filtre polariseur de façon à ce que si le spécimen est monoréfringent il ne variera pas le plan (rayon réfractés et polarisé dans le même plan et donc la superposition des filtres rendent l’image noire (lumière bloquée)
Résultats : SI le spécimen entre le filtre polariseur et le filtre analyseur change le plan de vibration de la lumière on va voir le rayon réfracté
En quel contexte la microscopie de lumière polarisé est adaptée ?
Pour l’observation de spécimen biréfringent seulement ! (cristaux)
Pourquoi la microscopie à fluorescence ? Principe ?
But : Utilisée spécialisée (ex. ADN, identifications immunoglobulines, rxn Ac-Ag, etc)
Principe (prim = intrinsèque vs sec = extrinsèque fluorochrome) : Source lumineuse UV, lampe halogène, +/- séparateur chromatique, + filtre d’excitation ; filtre d’arrête de la λ excitatrice et laisser passer fluo ; filtre pour absorption thermique
Résultat : Excite avec λ plus courte pour exciter spécimen (son fluorochrome) et donc émet avec λ supérieure (énergie libérée sous forme de fluorescence) donc brille dans le noir
C’est quoi un séparateur chromatique ?
Un séparateur qui sépare la λ d’excitation pour la diriger vers l’échantillon et non l’oculaire (miroir semi-transparent è 45˚ dans le tube optique)
2 modes d’éclairage en microscopie à fluorescence
- Par lumière transmise (sans séparateur, mais filtre d’arrêt après l’objectif (avant oculaire)
- Par lumière incidente (avec le séparateur chromatique)
Pourquoi la microscopie électronique ? Principe ?
But : surtout en recherche, créer un contraste détaillé de l’échantillon
Principe : faisceau d’électrons sur échantillon (collisions entre atomes)
Résultat : Image sur un écran fluorescent très précise (0.2 nm ! vs 0.2 µm)
C’est quoi un frottis en microscopie ?
Un type d’observation d’échantillon qui constitue en l’étalement sur une lame (où on dépose une lamelle) suite à un prélèvement ou mise en culture etc (peut être coloré/fixé ou non)
C’est quoi un état frais en microscopie ?
Une préparation d’échantillon qui est observée sans avoir subi de traitement chimique, de fixation ou de coloration. Les cellules, tissus ou micro-organismes sont visualisés dans leur condition naturelle, ce qui permet d’obtenir des informations sur leur morphologie, leur comportement, et leurs interactions sans altération.
En microscopie en fond clair, que remarquez-vous lorsque vous augmenter le grossissement de l’objectif au niveau de la luminosité ?
La luminosité est moins forte
En microscopie en fond clair, que remarquez-vous lorsque vous augmenter le grossissement de l’objectif au niveau des détails ?
Il faut augmenter la définition des détails avec la vis micrométrique
En microscopie en fond clair, que remarquez-vous lorsque vous augmenter le grossissement de l’objectif au niveau du diamètre de champs ?
Il diminue
Quelles actions sont essentielles en passant de 40X à 100X ?
Huile à immersion pour le 100X (objectif à anneau noir)
Qu’est-ce que la microscopie en fond clair permet de mettre en évidence ?
Les échantillons colorés ou contrastés, même petits objets de manière précise, colorés et états frais. Il est possible de voir les contours des cellules, leur cytoplasme, noyau), caractériser leur forme générale
Qu’est-ce que la microscopie en lumière polarisée permet de mettre en évidence ?
On peut détecter les objets biréfringents (indice de réfraction différents selon la direction de la lumière qui les traverse) ex. cristaux, la texture, ou organisations de fibres de tissus biologiques.
Qu’est-ce que la microscopie en contraste de phase permet de mettre en évidence ?
On peut mieux détecter les objets transparents ou faiblement contrastés sans avoir à utiliser de colorant. On observe les structures vivantes sans les endommager (donc on peut voir les organites en plus de leur morphologie, leur mobilité, structures filamenteuses)
Quelle microscopie est le mieux pour observer les bactéries ?
En contraste de phase, car les bactéries sont petites et transparentes (difficiles à distinguer en fond clair), donc on peut les observer sans colorant, voir leurs détails internes. Aussi, la plupart des bactéries ne présentent pas de biréfringence (car pas de cristaux, fibres ou minéraux), donc ils seraient invisibles en lumière polarisée.
Est-ce que des cristaux d’acides urique sont biréfringents ?
Oui, car ils brillent et sont visibles en lumière polarisée. Donc, les cristaux démontrent des indices de réfraction différents selon la direction de la lumière qui les traverse. Lorsque placés entre le filtre analyseur et polariseur, il y a une différence de direction de rayons de lumière (car s’ils étaient perpendiculaire l’un à l’autre, le fond resterait noir et l’échantillon serait considéré monoréfringent)
Pourquoi on observe pas les états frais à 100X ?
La lame contient un spécimen non-fixé (état frais, par définition), donc l’huile pourrait risquer de créer des artéfacts à l’observation en se mélangeant à la solution s’il advenait que l’huile touche la solution sous la lamelle
Aussi, en augmentant le grossissement, la profondeur de champs et le diamètre de champs diminue donc l’observation de spécimen en état naturel est plus difficile (les micro-organisme bougent et c’est difficile de faire de bonne mise au point)
D’ailleurs, compatible avec les objets avec indice de réfraction plus près du verre que de l’eau donc la résolution sera moins bonne anyway
Les états frais sont plus observés pour leur comportement et contraste/morphologie général que pour des détails fins/précis
Quand est-ce qu’on peut dessiner qu’un quart du dessin d’observation ?
à 10X et 40X lorsque les spécimens sont petits, mais on dessine la totalité lorsque 100X en général
Oublie pas de définir les structures observées
Différences entre les bactéries gram + et - ?
+ = mauve = + épaisse (par peptidoglycanes), donc pas décoloré lors du rinçage à l’éthanol
- = rose = - épaisse car décolore avec éthanol
À quoi sert un filtre en microscopie ? définition générale
modifier les conditions d’éclairage
Quelles sont les 5 inscriptions sur un objectifs ?
type d’objectif (A, PL, SEMI-APO, APO, APO-PLAN)
grossissement/ouverture numérique
longueur tube optique/épaisseur lamelle (mm)
Formule du grossissement (la formule à la base de l’inscription du grossissement de l’objectif, je ne parle pas de G total)
grossissement objectif : longueur tube / longueur focale de l’objectif
La lentille frontale sert à quoi par rapport aux autres lentilles dans l’objectif ?
Elle donne le grossissement alors que les autres corrigent les aberrations
Comment appellent-on l’axe selon lequel les photons se déplacent ?
Onde électromagnétique
Lors de l’aberration chromatique, les plus grandes longueurs d’onde sont-elles plus ou moins réfractées ? de quelle couleur est-il question ici ?
Les plus courtes, donc les couleurs qui tirent sur le bleu et le violet
Pourquoi est-ce que l’oeil peut corriger la courbure de champs ?
Puisque l’image est courbe et que la rétine est courbe, l’oeil suit la courbe de l’image donc corrige l’aberration de sphéricité
De quelle façon peut-on corriger l’aberration de sphéricité ?
en combinant des lentilles convergentes et divergentes (forme plusieurs systèmes optiques)
De quelle façon peut-on corriger l’aberration chromatique ?
en accolant des lentilles convergentes et divergentes (lentilles achromatiques, forme un système optique)
Avec une lentille convergente, à quel endroit et de quelle grandeur se formera l’image, si l’objet est placé plus loin de la lentille que son centre de courbure
+ petite, entre le foyer image et le centre de courbure
Avec une lentille convergente, à quel endroit et de quelle grandeur se formera l’image, si l’objet est placé directement au centre courbure de la lentille
même grandeur, au centre de courbure aussi
Avec une lentille convergente, à quel endroit et de quelle grandeur se formera l’image, si l’objet est placé entre le centre de courbure et le foyer de la lentille
+ grande et plus loin que le centre de courbure
Expliquer en 3 étapes la formation de l’image avec une lentille convergente
- rayon parallèle puis passe au foyer objet (principal)
- rayon au centre de la lentille (ligne droite)
- rayon au foyer objet (secondaire) puis parallèle
Les 3 rayons convergent en un point (prolongements des rayons) et forme l’image
V ou F. Plus un objet est éloigné de la lentille plus son image sera grande
Faux
Pourquoi on dit que l’oculaire agit comme une loupe et crée une image finale virtuelle agrandie (l’objet est placé où) ?
car l’image intermédiaire créée par l’objectif se trouve à l’intérieur de la distance focale de l’oculaire (mais plus près de son foyer que de la lentille de l’oculaire)
Quelle aberration l’image virtuelle formée. par l’oculaire subit-elle en traversant le cristallin ?
Aberrations de courbure de champs
Pourquoi est-ce que l’intérieur du tube optique est noir ?
Réduire les réflexions lumineuses (parasites sur l’image), éviter l’éblouissement de l’image…
Entre quelles composantes du microscope se trouve le tube optique ?
entre l’oculaire et l’objectif
Quelle est la longueur mécanique standard du tube optique ?
160 mm
Quel est le rôle principal du tube optique ?
support des oculaires et des objectifs
Quel type de lentilles contiennent les oculaires ?
convergentes
Quels sont les 3 principaux dispositifs du système d’éclairage ?
Lampe
Collecteur
Diaphragme de champs
V ou F. Plus la qté de lumière qui entre dans l’objectif est petite plus la résolution est grande
F. l’inverse
Comment augmente-t-on l’ouverture numérique ? (2 façons)
- en augmentant l’angle du demi-cone de lumière (augmente le grossissement de l’objectif)
- en ajoutant un médium (ex. huile a immersion) a un plus haut indice de réfraction pour inclure le plus de rayons dans l’objectif
Quelle est la résolution maximal en microscopie a fond clair ?
200 nm (soit 0,2 µm)
Que représente la portion de l’objet qu’il est possible de voir sans bouger l’objet ?
Diamètre de champs
Que représente l’épaisseur de l’objet qu’il est possible de voir sans bouger la vis micrométrique ?
Profondeur de champs
Qu’est-ce qui arrive aux rayons à l’intérieur du condensateur parabolique en microscopie a fond noir ?
Réflexion par miroirs (obliquement)
concentrés sur l’objet
Lequel des condensateurs parabolique et cardioïde donne les rayons les plus obliques
Mieux pour petite O.N. vs grande O.N. donc le 2e
(et avec un + grand objectif, + obliques, the better)
V ou F. La lumiere incidente de la source lumineuse en microscopie à polarisation a multiple plans de vibration
V (avant de passer par filtre polariseur)
Nommes les 3 filtres en fluorescence, donne leur emplacement et leur rôle
- filtre d’excitation, entre source et éch (donne longueur d’onde d’excitation)
- filtre d’arrêt entre éch et oeil (protege contre UV)
- filtre d’absorption thermique entre source et filtre d’excitation (protect filtre d’excitation et éch)
Qu’est-ce que le séparateur chromatique et où est-il situé ?
miroir semi-transparent et angulé, pour dévier longueur d’onde excitatrice sur l’éch, dans le tube optique, donc protège l’oeil contre rayons UV
Quelle est l’application principale en labo médical de la fluorescence ?
Immunofluorescence
Que fait l’anneau de phase aux rayons déphasés en microscopie de contraste de phase ?
il retardent les rayons déphasés de 1/4 de longueur d’onde (déjà retard. de 1/4 de longueur d’onde car percute l’objet
V ou F. Tous les objectifs phaco possède un anneau de couleur
Vrai
V ou F. Les rayons directs forment l’image et les rayons déphasés ajoutent les détails
faux!
Les anneaux de phase ont tous le même diamètre
Faux
Il n’est pas nécessaire de faire le Koehler avant de faire la microscopie en contraste de phase
Faux, mais vrai au collège
Différence entre anneaux de phase et anneau annulaire
- anneau de phase (rond sombre)
- anneau nnulaire (anneau framenté en 3, illuminé)
Quel avantage du contraste de phase vs en fond noir ?
+ nette et + détaillée
Quel type de microscopie est le plus approprié pour :
État frais d’urine
Frottis sanguins coloré
État frais bactéries
Frottis cellules fluochromés
Frottis sécrétion vaginales coloré
- contraste de phase (car bactéries possible !)
- fond clair
- contraste de phase
- fluorescence
- (levures) fond clair car déjà colorés
