Microscopie Flashcards
Nommez les deux grandes classes de microscopes et leur particules respectives.
photonique: photons
électronique: électrons
Nommez les trois organes de bases d’un microscope photonique
- condensateur
- objectif
- oculaire
Quelle est la limite de grandissement d’un microscope photonique?
3000x
Définissez la limite de résolution (LR)
C’est la distance minimale entre deux points pour que ces derniers soient percus comme distincts
Donnez la formule permettant de calculer la limite de résolution
longueur d’onde/2nsintêta
Comment peut-on intervenir sur la limite de résolution avec la longueur d’onde? Expliquez.
Si on diminue la longueur d’inde, LR va aussi diminuer (c’est ce qu’on veut). On utilise donc des ultraviolets (180-400nm)
Pourquoi les UV ne sont pas une bonne solution pour diminuer la limite de résolution? (2 réponses)
- Parce que il faut faire une transformation optique étant donnée que les rayons UV sont hors de notre spectre visible
- Seulement une question de sécurité
Expliquez le principe de l’huile à immersion
- L’indice de réfraction de l’huile est presque identique à celui du verre.
- C’est donc comme si il n’y avait aucun changement de milieu entre la lame et l’objectif.
- Cela permet donc de capturer tous les rayons lumineux.
Définissez ce qu’est le contraste.
C’est la capacité à distinguer une structure de son environnement
Sur quoi renseigne le « épi » dans un microscope à épifluorescence?
C’est la disposition de la source de lumière dans le microscope
Expliquez brièvement le principe du microscope a fluorescence
Une source de lumière envoie des rayons UV sur la lame à observer. Ces rayons UV sont excitateurs pour les fluorochromes, qui émettent alors dans le visible. Cette lumière visible est ce que l’on perçoit dans ce type de microscope.
Qu’est ce qu’un miroir dichroïque?
Un miroir qui bloque (réfléchi) les UV et laisse passer la lumière visible
Quelle est l’application la plus importante de la microscopie à fluorescence?
Pouvoir être en mesure de distinguer des cellules vivantes de cellules mortes
Dans la microscopie à fluorescence, comment est-ce possible de faire la distinction entre les cellules vivantes et les cellules mortes?
Parce que les cellules vivantes sont imperméables à certains fluorochromes, qui restent donc à leur surface.
Les cellules mortes par contre sont perméables et laissent donc entrer ces fluorochromes.
Qu’est ce que l’immunofluorescence?
C’est la détection de protéines particulières grâce à l’utilisation d’anticorps rendus fluorescents grâce à un couplage anticorps-fluorochrome
Comment peut-on « voir » un virus avec la microscopie à fluorescence? Expliquez.
On en peut pas voir les virus en tant que tel. Cependant, les cellules virales produisent des protéines du virus. On peut alors préparer des anticorps spécifiques couplés à des fluorochromes pour détecter ces protéines, et donc les sites d’infection du virus.
Expliquez l’utilité de « FISH » en microscopie fluorescente.
Cela permet de savoir quelle espèces on a et en quelle quantité de chaque.
Pourquoi dit-on que l’immunofluorescence demande beaucoup de spécificité?
Parce que la sonde (L’anticorps) doit se rendre jusqu’au noyau de la cellule
Expliquez comment on apercoit l’image en microscopie à fond clair?
On voit les structures sombres sur un fond clair
Pourquoi la microscopie à fond clair a un contraste diminué?
Car il faut préparer les échantillons à observer à l’état frais.
Définissez coloration simple et donnez-en un exemple.
C’est un seul colorant, comme le bleu de méthylène
Vrai ou faux. La majorité des colorants sont sans danger pour les organismes observés. Expliquez.
Faux, il existe en réalité peu de colorants vitaux.
Une coloration acceptable exige que deux conditions spécifiques soient remplies. Quelles sont-elles?
La fixation du colorant et la coloration en elle-même
Donnez deux caractéristiques générales des colorants.
Ils sont chargés (+/-) et hydrophobes
Comment le colorant Ziehl-Neelsen fonctionne avec les mycobactéries?
Ces mycobactéries ont dans leur paroi des composés qui retiennent le carbol-Fuchsine
Nommez les quatre structures cellulaires qui sont mises en évidence par la coloration différentielle.
- Endospores
- Capsule
- Flagelles
- Corps d’inclusion
Nommez les quatre microscopes photoniques.
- à fond noir
- à contraste de phase
- À contraste d’interférence différentielle
- À fluorescence
Expliquez comment on apercoit l’image en microscopie à fond clair?
On voit les structures sombres sur un fond clair
Où se situe la principale différence entre la microscopie à fond sombre et à fond clair au niveau de la conception du microscope?
Dans le condensateur. Il y a le cône de Abbe
À quoi sert le cône de Abbe et dans quel microscope est-il présent?
Il permet de s’assurer que les rayons déviés et réfractés forment l’image que l’on aperçoit. Il est dans le microscope à fond noir
Quelle sorte de visualisation peut-on faire en microscopie à fond noir?
Des cellules vivantes surtout
Vrai ou faux. La visualisation des structures dans la microscopie à fond noir se fait sans aucune coloration ni fixation.
Vrai
Quelles sont les différences internes dans un microscope à contraste de phase?
Il y a des anneaux de phase dans le condensateur et les objectifs
Expliquez brièvement le principe du microscope à contraste de phase.
Les structures cellulaires observées vont réfracter la lumière incidente. Cela va changer la phase de la lumière, et donc son intensité.
En vous appuyant sur le principe de base du microscope à contraste de phase, pourquoi on aperçoit des images avec des intensités lumineuses différentes?
Car les structures observés on toutes des densités différentes, ce qui implique des réfractions différentes et donc des intensités lumineuses différentes.
Puisque la microscopie à contraste de phase produit des __________, on utilise des ____________ pour augmenter la qualité générale de l’image.
Images sombres sur fond clair ; filtres colorés
Expliquez le principe de base du microscope d’interférence différentielle.
On envoie de la lumière polarisée. Les structures vont avoir des réfractions différentes, ce qui va modifier la polarisation et donc l’intensité lumineuse.
Vrai ou faux. Le microscope d’interférence différentielle créé des images en 3D. Expliquez.
Faux, il créé des images avec une impression de 3D
En ce qui a trait au condensateur, qu’y a-t-il de particulier avec le microscope d’interférence différentielle?
Il y a un système de lentilles polarisantes contrôlées par informatique.
Quel est l’avantage majeur du microscope d’interférence différentielle sur le contraste de phase?
L’absence de halo de diffraction
Qui est à l’origine de la microscopie électronique? En quelle année?
Ruska, en 1931
Quelle sont le deux paramètre qui sont augmentés en microscopie électronique part rapport a la microscopie photonique?
Le grossissement et la limite de résolution
Puisque les électrons ne sont pas visibles pour les humains, comment peut-on voir des images avec la microscopie électronique?
Les électrons sont vaporisé sur un support permettant l’analyse de ces électrons et la reconstitution tition d’une image correspondante
Sur quels support peut-on avoir une image en microscopie électronique?
Un écran fluorescent, une plaque photographique ou un détecteur numérique
Pourquoi l’Intérieur d’un microscope électronique doit être sous vide?
Parce que les électrons voyagent seulement dans le vide
Comment fait-on pour contrer le fait que le matériel vivant observé est non électron dense?
En utilisant des matériaux imperméables aux électrons
Quels composée peut-on utiliser pour « colorer » des échantillons pour la microscopie électronique ?
Des métaux comme le fer et l’or et l’acide phosphotungstique
Expliquez le principe de la technique d”ombrage dans la microscopie électronique.
Ce sont des métaux qui sont vaporisés a un angle précis sur l’échantillon. On a des billes témoins dont leur taille est déjà connues. La vaporisation de métaux produit des ombres qui peuvent alors être comparées avec les billes témoins
Expliquez comment fonctionne une coloration négative en microscopie électronique. Donnez un exemple de « colorant ».
C’est un « colorant » qui s’accumule dans les creux. Ainsi, les creux vont être sombres alors que les protubérances de l’échantillon seront claires.
Ex: acide phosphotungstique
Grace à une coloration négative en microscopie électronique, on peut distinguer deux phénomènes différents. Quel sont ils?
On peut apercevoir le relier et la structure des virus.
Expliquez le fonctionnement du cryodécapage
On congèle l’échantillon à -180 degrés et on fait une coupe transversale. C’est suivi de la technique de l’ombrage.
Que permet de voir le cryodécapage en microscopie électronique?
l’intérieur des cellules et les structures
Expliquez le principe de l’immuno-localisation cellulaire et dites quelle est sa fonction principale.
On a un anticorps pour une protéine ou une structure spécifique.
On ajoute alors une bille de fer ou d’or à l’anticorps.
Cela permet de localiser une protéine ou une structure dans une cellule.
Expliquez brièvement comment fonctionne la microscopie électronique à transmission et caractériser le type d’images fournies.
Ce sont des électrons qui vont traverser l’échantillon. Le détecteur se retrouve en dessous de l’échantillon et permet d’obtenir des images en transparences de structures très fines.
Qu’en est-il de la limite de résolution du microscope électronique a transmission?
C’est la plus fine qu’on aie
Expliquez brièvement comment fonctionne la microscopie électronique à balayage et caractériser le type d’images fournies.
On balaie la surface de l’échantillon avec des électrons. Ces électrons sont alors réfléchis et captés par un détecteur latéral. Cela permet d’obtenir des images de la surface des échantillons donnant une impression de 3D.
Comment peut on différencier une image d’un microscope a contraste de phase et d’un microscope à interférence différentielle ?
Le microscope à interférence différentielle donne une impression de 3D.
Qu’est ce que la cryoélectromicroscopie?
C’est une congélation très rapides des échantillons à très basse température pour vitrifier l’eau.
Quel est le but principal de la cryoélectromicroscopie?
Conserver l’Intégrité des structures sous vide
À quoi sert la vitrification de l’eau dans la cryoélectromicroscopie?
À empêcher la formation de cristaux d’eau qui pourraient détériorer l’échantillon
Qu’est ce que la cryotomographie électronique ?
Ce sont des images prises en strates d’un échantillon reconstitués grâce à un système informatique
Quel est le gros avantage de la cryotomographie électronique?
Elle permet une analyse complète d’un échantillon en 3D sans aucune destruction de celui-ci.
Expliquez le principe de base du microscope confocal à balayage laser
oN a une illumination de l’échantillon par laser UV. Cet échantillon produit de la fluorescence car il a été couplé a des flurochromes. On a l’image seulement de ce qui se situe au plan du foyer, et on élimine tout le reste.
Quels sont les deux paramètres modifiés dans le microscope confocal à balayage laser par rapport au microscopes a fluorescence classique?
Le contraste est augmenté et l’interférence diminuée
Le microscope confocal à balayage laser est photonique ou électrique?
Photonique
Vrai ou faux. Le microscope confocal à balayage laser permet la visualisation d’images en 3D.
Vrai
Pourquoi dit-on que le microscope confocal à balayage laser nous permet d”observer en 4D?
Parce qu’il est possible d’observer le déplacement ou encore la croissance à travers le temps ( cette quatrième dimension fait ici référence au temps)
Expliquez comment fonctionne le microscope à effet tunnel
C’est une sonde avec une pointe de la grosseur de quelques totems seulement qui balaie la surface. Elle mesure le courant entre son extrémité et les autres atomes de l’échantillon qu’elle rencontre.
Pourquoi est-ce intéressant que le microscope à effet tunnel puisse analyser des échantillons en milieu aqueux?
Cela permet d’observer des molécules dans leur état « naturel »
Quel est le grossissement du microscope à effet tunnel?
100 millions de fois
