Microscopie Flashcards
Waar wordt de lichtmicroscoop voor gebruikt?
Om gekleurde preparaten te bekijken of de enzymeactiviteit en de lokalisatie ervan e.g. cel en weefsel
Waar is wit licht uit opgebouwd?
Uit een spectrium van UV tot infrarood
UV licht heeft … energie en een … golflengte
UV licht heeft veel energie en een korte golflengte
Infrarood heeft … energie en een … golflengte
Infrarood heeft weinig energie en een lange golflengte
Wat is resolutie?
De afstand tussen 2 punten waarbij je die kan onderscheiden van elkaar, hoe kleiner, hoe beter
Wat is aberration correction?
Wanneer er binnen in de lens nog meerdere lenzen zitten die het beeld focussen, hoe groter de vergroting, hoe meer lenzen en hoe hoger de NA
Waarvoor gebruik je de fluoroscentiemicrscoop?
Om immunostainings en tags te bekijken
Wat is de resolutie van een lichtmicroscoop?
1/10 micrometer
Wat is de resolutie van een SEM?
1^-5 nm
Wat is de resolutie van een TEM?
0.1 nm
Hoe werkt directe kleuring?
De antilichaam is primair gebonden aan de epitope
Hoe werkt de indirecte kleuring?
Er is een secundaire antilichaam die bindt aan de epitope
Groen = ….
Alexa 488
Blauw = ….
Alexa 644
Rood = …
Alexa 568
Hoe komt fluoroscentie tot stand?
Doordat energie terugvalt (excitatie) en het spectrum dan doorschuift waardoor ander licht wordt uitgezonden (emissie)
Wat voor lichtbron heb je nodig voor fluoroscentiemicroscopie?
HBO/XBO, deze straalt pieken van licht uit
Wat voor lichtbron heeft de CLSM
Een laser voor monochromatisch licht, er is geen excitatie filter meer nodig
Wat is doordringen?
Wanneer je valse co-lokalisatie krijgt doordat er twee golflengtes tegelijk op dezelfde punt wordt gemeten
Wat is een Z-stack?
Een reeks van verschillende foto’s om zo een 3D beeld te creëren
Secundaire elektronen geven de …
Morfologie
Back-scattered elektronen geven de…
Contrast en compositie van het materiaal
EDX/EDS detecteerd….
de elementen van het materiaal
Hoe … de accelerating voltage (AV) hoe … de resolutie, dit heeft te maken met het … en de …
Hoe hoger de accelerating voltage (AV) hoe beter de resolutie, dit heeft te maken met het kilovoltage en de bundel diameter
Een … bundel, geeft een … AV, dus weer een … resolutie
Een kleinere bundel, geeft een hogere AV, dus weer een betere resoltie
Als een anode een … lading heeft trekt deze … aan de elektronen
Als een anode een hogere positieve lading heeft trekt deze sneller aan de elektronen
Waarom moeten biologische materialen eerst worden gefixeerd met glutaaraldehyde?
Omdat de resolutie anders nooit wordt behaald
Waarom wordt kritisch puntdrogen gedaan?
Omdat er geen vloeistof aanwezig kan zijn wanneer je het preparaat bekijkt, dit zorgt ook voor een mooiere morfolgie
Waarmee doe je kritisch puntdrogen?
Met acetone of ethanol, omdat deze goed mengen met vloeibare CO2
Wat heb je nodig om vloeibare CO2 te gebruiken?
Een lage temperatuur en een hoge druk
Waarom wordt de sample gecoat en opgedampt?
Zodat er geleiding kan plaatsvinden