Metodología bioquímica (01) Flashcards
¿Por qué surgen las técnicas de fraccionamiento subcelular?
Para poder abordar el estudio de los componentes ubicados en el interior de la célula
¿Para qué se lleva a cabo la lisis?
A través de la ruptura controlada de la envoltura celular se produce la liberación del material ubicado en el interior
¿Qué se hace en la separación?
Se separa a la molécula de interés del resto
¿Cuáles son las etapas del proceso de fraccionamiento subcelular?
Lisis y homogeneización, fraccionamiento y análisis. Explicar como apuntes
¿Qué hay que saber antes de llevar a cabo la lisis? Pon un ejemplo
Debe conocerse el material de partida, aquello que se desea aislar y seleccionar el método más adecuado.
Ejemplo: Las envolturas
¿Qué hay que tener en cuenta a la hora de seleccionar el medio de homogeneización?
Isotónico, inhibidores de proteasas, temperatura fría, no agua, posibilidad de añadir factores adicionales
¿Qué hay que tener en cuenta a la hora de seleccionar el método de ruptura?
Naturaleza del producto, estabilidad del producto, coste del método, pureza del método, velocidad y escala de la operación
¿Cómo se clasifican los métodos de homogeneización? ¿Cuáles son?
Se clasifican en mecánicos y no mecánicos.
Mecánicos= Mortero con mazo, agitador o molino de esferas, homogeneizador de émbolo, homogeneizador a altas presiones, homogeneizador de aspas, homogeneizador a altas presiones, sonicadores, presión-descomprensión y congelación-descongelación.
No mecánicos= Choque osmótico, disolución lipídica en disolventes orgánicos, detergentes, permeabilización enzimática y tratamiento alcalino
¿Cuáles son los principales fines de la homogeneización?
Obtener lisis celular superior al 90%, evitar rotura nuclear y de otros orgánulos y utilizar relación célula/medio de homogeneización tan alta como sea posible.
