Estructura de macromoléculas (01) Flashcards
¿Cuáles son los tres métodos para determinar la estructura de biomacomoléculas a resolución atómica?
Cristalografía de RX, criomicroscopía electrónica y espestroscopia de RMN
¿Cuáles son las etapas en la determinación de estructuras de biomacromoléculas mediante cristalografía de RX?
Obtención y purificación de la proteína, cristalización de la proteína, optimización del cristal, difracción y determinación de la fase, construcción del modelo y comprensión estructura-función.
¿Cómo se obtiene y purifica una proteína?
Se obtiene mediante ADN recombinante y se purifica mediante técnicas bioquímicas.
¿Cuáles son los requisitos para que una proteína pueda emplearse en cristalografía de RX?
- Gran cantidad
- Pura
- Soluble a grandes concentraciones
- Capaz de formar cristales moleculares
¿Qué es un cristal molecular?
Un conjunto de moléculas espacialmente ordenadas
¿Cómo permanecen las moléculas en el cristal?
En la misma posición relativa gracias a las interacciones no covalentes que establecen entre ellas.
¿En qué consiste la técnica de la gota colgante?
Solución de proteína, agente precipitante, pocillo, presión de vapor, precipitación ordenada…
¿Qué es la celdilla unidad?
Parte del cristal que, al trasladarse en las tres dimesiones del espacio, permite reconstruir el cristal entero. Puede estar compuesto por una o más moléculas.
¿Qué ocurre si hay más de una molécula en la celdilla unidad?
Las moléculas pueden encontrarse orientadas de manera distinta, pero sus posiciones y orientaciones deben estar relacionadas mediante las mismas operaciones de rotación y translación en cada celdilla.
¿Qué ocurre con las condiciones de cristalización?
Dependen de la especie molecular
¿Qué condiciones hay que tener en cuenta a la hora de cristalizar una proteína?
Temperatura, pH, concentración de proteína, concentración de agente precipitante, fuerza iónica, presencia de cofactores…
¿Cuáles son los elementos básicos a emplear en la difracción de RX?
Emisor de rayos X, fuente criogénica, cabezal goniométrico y detector de RX
¿Cómo funciona la difracción de RX?
Llegan los RX, difractan, se producen interferencias. Se generan reflexiones, conjunto de reflexiones son el patrón de difracción (huella dactilar). No es un círculo, es una esfera, el cabezal goniométrico debe rotar para obtener el patrón de difracción tridimensional.
¿Qué datos se obtienen de la difracción de RX? ¿Qué se puede inferir a partir de ellos?
Obtenemos: Coordenadas espaciales de cada reflexión, amplitud (intensidad) y la fase de cada reflexión.
Se infiere: Densidad electrónica en cada posición y las coordenadas de cada átomo.
¿Qué transformación matemática se aplica para conocer el mapa de densidad electrónica?
La transformación de Fourier.
