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Biologie > MÉTHODES D'ÉTUDES DE LA CELLULE > Flashcards

MÉTHODES D'ÉTUDES DE LA CELLULE Flashcards

1
Q

Définition épaisseur

A

épaisseur de l’échantillon observé

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Q

Épaisseur pour un microscope optique

A

fine

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3
Q

Définition grossisement

A

rapport théorique entre les dimensions d’un objet vu à l’oeil nu et à travers un instrument

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4
Q

Formule grossissement d’un appareil

A

produit des grossissement de chaque élément de l’appareil : xn

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5
Q

Définition grossissement utile

A

grossissement qui permet à l’oeil de distinguer tous les détails les plus fins distinctement

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6
Q

Observation via le microscope

A

par transparence

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7
Q

Observation via la loupe binoculaire

A

par lumière réfléchie (= objets opaques)

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8
Q

Définition profondeur de champ

A

zone comprise entre le premier et le dernier plan net de l’image

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9
Q

Profondeur de champ faible

A

image proche, fort grossissement

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10
Q

Définition résolution

A

distance la plus petite entre 2 points d’un échantillon pour qu’ils puissent être distingués

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11
Q

Résolution pour l’oeil humain

A

75 um pour des objets observés à 25m

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12
Q

Résolution pour une loupe binoculaire

A

2um

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13
Q

Facteurs faisant varier la résolution pour l’oeil humain

A
  • âge
  • contraste de la scène
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14
Q

Formule résolution

A

R = 0,61 x (λ/n.sin α)

n: plus petit indice de réfraction du trajet optique
α : demi-angle d’ouverture de la lentille

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15
Q

Définition limite de résolution

A

distance la plus petite entre 2 objets pour qu’ils puissent être distingués dans les meilleures conditions

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16
Q

Comment évolue la résolution

A

Elle s’améliore avec une petite longueur d’onde et une petite limite de résolution

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17
Q

Comparaison microscopes électroniques et photoniques

A

ME > MP car λe < λp

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18
Q

Comment s’appelle(nt) le(s) composé(s) servant à contrôler le diamètre de la zone éclairée

A
  • le condenseur
  • le diaphragme
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19
Q

Type(s) de microscope(s) photoniques

A
  • microscopes par transmission
  • microscope à lumière polarisée/à fond noir/ à contraste de phase
  • microscope confocal à balayage
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20
Q

Microscopes par transmission

A
  • observation directe de structure
  • jusqu’à 0,2 um
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21
Q

Microscopes à lumière polarisée

A

informations indirectes sur l’ultra structure des cellules

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22
Q

Microscope confocal à balayage

A

images 3D grâce à l’utilisation d’un laser comme source lumineuse

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23
Q

Type de lumière utilisée par les microscopes photoniques

A

lumière visible (390 à 760 nm)

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24
Q

Longueurs d’ondes des ultraviolets et infrarouges

A
  • ultraviolet : <390nm
  • infrarouge : >760nm
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25
Q

Loupe binoculaire

A
  • observation de deux façons : lumière réfléchie ou transparence
  • limite de résolution de 2um
  • grossissement utile de x200
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26
Q

Microscope photonique classique

A
  • observation en transparence
  • échantillon de faible épaisseur (<10um)
  • limite de résolution de 0,2 um
  • grossissement utile de x40 à x1250
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27
Q

Ordre de diffusion de l’image

A

lampe > préparation > objectif > oculaire > oeil

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28
Q

Grossissement objectif

A

entre 4 et 100

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29
Q

Grossissement oculaires

A

entre 10 et 12,5

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30
Q

Grossissement total

A

entre 40 et 1250

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31
Q

Objectif à immersion

A

la lentille baigne dans un liquide ayant un indice de réfraction proche de celui du verre, améliorant ainsi la résolution

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32
Q

L’oeil voit une image :

A

virtuelle, agrandie et renversée (VAR)

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33
Q

Microscope photonique inversé

A
  • objectif en bas, lumière en haut
  • permet d’observer les cellules en culture
  • observation par transparence
  • limite de résolution : 0,2um
  • grossissement utile : x40 à x1250
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34
Q

Microscope confocal

A
  • éclairage par balayage laser
  • utilisable en fluoescence
  • permet une reconstitution 3D
  • améliore la résolution
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35
Q

Caractéristiques matériel biologique

A
  • transparent
  • réfringent
  • peu visible à l’état frais
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36
Q

Objectif microscopie en contraste de phase

A

observer des cellules sans préparation ou coloration particulière
(principalement cellules vivantes)

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37
Q

Principe microscopie en contraste de phase

A

sélectionner la lumière déviée par un matériel réfringent à l’aide de deux anneaux appariés :
- un sur le condenseur (=clair)
- un dans l’objectif (=sombre)
L’ensemble ne laisse passer que la lumière réfractée

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38
Q

Principe contraste interférentiel

A
  • création d’interférences lumineuses en lumière polarisée => lumière directe réduite, lumière traversant l’objet transmise
  • faisceau lumineux dédoublé puis recomposé
  • très bonne qualité
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39
Q

Principe fond noir

A
  • blocage de la lumière source par le condenseur
  • observation de la lumière déviée et diffusée par l’objet
    => bactériologie
40
Q

Définition polarisation

A

propriété qui consiste à orienter le plan de vibration de la lumière

41
Q

Principe polarisation

A
  • placement de l’échantillon entre un analyseur et un polariseur
  • détection des variations de polarisation après que la lumière ai traversé l’échantillon
  • permet de visualiser les structures biréfringentes ou polarisantes
  • utilisé en minéralogie
42
Q

Définition polariseur

A

2 lames polarisantes

43
Q

Transmission totale

A

analyseur et polariseur parallèles => toute la lumière passe

44
Q

Extinction totale

A

analyseur et polariseur perpendiculaires => aucune lumière ne passe

45
Q

Définition fluorescence

A

propriété qu’ont certaines molécules d’émettre des photons d’énergie plus faible (= λ ++) que les photons de la lumière incidente du microscope

46
Q

Auto-fluorescent

A

émet de la fluorescence par lui même

47
Q

Fluorescence secondaire

A

combiné avec un fluororchrome

48
Q

Principe épifluorescence

A
  • lumière excitatrice sélectionnée par des filtres colorés
  • dirigée sur l’objet à travers l’objectif par un miroir semi-transparent
  • recueillement de la lumière fluo par l’objectif
  • retraverser le miroir et des filtres colorées
  • forme une image dans l’oculaire
49
Q

Principe combinaison

A

combinaison de plusieurs méthodes pour améliorer la précision

50
Q

Etapes de préparation pour les cellules

A
  • étalement
  • fixation
  • coloration
51
Q

Etapes de préparation pour les tissus biologiques

A
  • fixation
  • inclusion
  • coupe
  • coloration
52
Q

Objectif(s) fixation

A
  • préserver les structures
  • durcir les pièces
53
Q

Défaut fixation

A

Provoque une mort cellulaire, arrête les réactions biologiques et fige le matériel

54
Q

Type(s) de fixateurs

A
  • fixateurs coagulants
  • fixateurs additifs
55
Q

Fixateurs coagulants

A
  • solvants organiques
  • entraine une coagulation des protéines
  • alcools et acides (= protéines nucléaires ++)
56
Q

Fixateurs additifs

A
  • provoquent des pontages chimiques entre les protéines
  • acide picrique ; aldéhydes ; tétrode d’osmium (= lipides +)
57
Q

Préparations les plus utilisées

A
  • formol tamponné
  • liquide de Bouin
  • carnoy
58
Q

Formol Tamponné

A
  • immersion dans le formol
  • rinçage avec un tampon
59
Q

Liquide de Bouin

A
  • jaune
  • constitué d’acide picrique, de formol, d’acide acétique
60
Q

Carnoy

A

constitué d’acide acétique et de méthanol

61
Q

Étapes inclusion en paraffine

A

on plonge le tissu dans :
- l’eau (lavage)
- des bains d’alcool de concentrations croissantes (déshydratation)
- un solvant organique (enlever l’alcool)
- de la paraffine liquide chauffée à 56°
on laisse refroidir
se conserve longtemps
LONG

62
Q

Objectif inclusion en paraffine

A
  • réaliser un bloc que l’on pourra couper en tranches
63
Q

Etapes coupe

A
  • fondre légèrement
  • tissus minéraux décalcifiés avec un acide faible
  • découpage avec un microtome
64
Q

Objectif coloration

A

accentuer le contraste pour mieux visualiser les différents éléments

65
Q

Étapes coloration

A
  • 2 bains de Toluène (suppression paraffine)
  • bains d’alcool de concentration décroissante (réhydratation)
  • bain de colorant en solution aqueuse
  • rinçage à l’eau
    => association de 2 ou 3 colorants
66
Q

Etapes montage

A
  • bains d’alcool de concentration croissante (déshydratation)
  • bains de toluène x2
  • dépôt d’une résine liquide hydrophobe (même indice de réfraction que le verre) entre la lame et la lamelle
67
Q

Objectif(s) résine hydrophobe

A
  • tenir en place
  • protéger le matériel
  • conserver les préparations colorées
  • améliorer la visibilité
68
Q

Avantages coupe en paraffine

A
  • conservation des structures
  • qualité des images très bonne
69
Q

Inconvénients coupe en paraffine

A
  • lent (36h à 48h)
  • petites molécules libres dissoutes
  • fixation doit être immédiate
  • lipides dissous
  • arrêt des activités biologiques
  • modification de la conformation des cellules
70
Q

Principe coupe en congélation

A
  • coupe de tissus congelés à laide d’un cryo-microtomes
  • coloration rapide
71
Q

Avantages coupe en congélation

A
  • rapide
  • permet l’examen extemporané
  • maintien l’activité biochimique
  • met en évidence les molécules non observables en histologie classique
72
Q

Inconvénients coupe en congélation

A
  • qualité médiocre
  • aucune conservation
73
Q

Principe colorations vitales

A

peuvent se faire sur des tissus dont les cellules sont vivantes

74
Q

Type(s) de colorant(s) vital(aux)

A
  • colorants phagocytés (ex. encore de chine) => cellules mononucléées
  • colorant diffusant à travers la membrane (ex. bleu de nil)
  • colorants pour cellules morte par perméabilité membranaire (ex. éosine-nigrosine)
75
Q

Définition métachromasie

A

propriété d’un colorant à changer de couleur en fonction du pH des molécules sur lesquelles il s’est fixé (ex. bleu de toluidine)

76
Q

Type(s) de colorant(s) général(aux)

A
  • colorants acides
  • colorants basiques
77
Q

Colorants acides

A
  • se fixent sur les molécules basiques/structures acidophiles (ex. protéines cytoplasmiques)
  • colorants anioniques
  • ex. éosine
78
Q

Colorants basiques

A
  • se fixent sur les molécules acides/ tissus basophils (ex. acides nucléiques)
  • cation colorant
    -ex. bleu de toluidine
79
Q

Colorant(s) utilisé(s) pour les coupes

A
  • hématéine
  • érythrosine
  • hématéine - éosine (HE)
  • safran
  • hématéine-érythrosine-safran (HES)
80
Q

Colorant(s) utilisé(s) pour les frottis sanguins

A
  • May Grünwald-Giema (MGG)
    => cytoplasme en bleu, noyau en pourpre
81
Q

Principe colorations histochimiques

A

mettre en évidence in situ les différents constituants (ex. protéines, glucides, acides nucléiques, métaux, etc)

82
Q

Exemples de colorations histochimiques

A
  • technique du PAS
  • technique de Feulgen-Rosenbeck
  • colorations argentiques
  • coloration de Perl’s
83
Q

Technique du PAS

A
  • Periodic Acid Schiff
  • mets en évidence les sucres complexes grâce à la fuschine
84
Q

Technique de Feulgen-Rosenbeck

A
  • met en évidence l’ADN
  • dosage par photométrie
  • coloration proportionnelle à la quantité d’ADN
85
Q

Colorations Argentiques

A
  • mettent en évidence la mélanine, les amines biogènes et les neurofibrilles
86
Q

Coloration perl’s

A

met en évidence le fer

87
Q

Objectifs histo-enzymologie

A
  • rechercher une activité enzymatique
  • mettre en évidence la présence d’enzymes (peroxydases, phosphatases, estérases, etc)
88
Q

Principe histo-enzymologie

A
  • matériel frais ou congelé
  • ajout d’un substrat : si on obtient un produit après incubation, il y a une activité enzymatique
89
Q

Objectif immuno-histochimie

A

localiser des protéines dans une cellule

90
Q

Principe immuno-histochimie

A
  • utilisation d’anticorps de la famille des immunoglobulines qui réagissent à des antigènes et ont une liaison très spécifiques avec les protéines
  • marquage par immunofluorescence (directe et indirecte)
91
Q

Anticorps polyclonaux

A
  • se fixent sur tous les épitopes d’un antigène
  • récupérés dans le sérum d’un animal immunisé
92
Q

Anticorps monoclonaux

A
  • se fixent sur un seul épitope
  • produits in vitro à partir d’un clone de plasmocyte animal puis fusionné à une cellule (type lymphocyte tumoral)
93
Q

Lymphocyte tumoral

A

production d’anticorps sans limite

94
Q

Immunofluorescence directe

A

anticorps couplé à une molécule fluorescente

95
Q

Immunofluorescence indirecte

A
  • utilisation d’un anticorps secondaire couplé à une molécule fluorescente
  • fixation à l’anticorps primaire
    => marquages multiples
96
Q

Objectif hybridation In Situ

A

mise en évidence de séquences définies d’ADN ou d’ARN

97
Q
A

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