Méthodes d’étude des cellules et tissus Flashcards
La culture cellulaire
→ ensemble de techniques utilisées pour faire croître des
cellules hors de leur organisme (ex-vivo) ou de leur milieu
d’origine.
→ en vue d’expérimentation scientifique
- observation des cellules vivantes dans des conditions
favorables
- système expérimental beaucoup plus simple qu’un
animal entier avec la possibilité de contrôler les conditions de
l’étude
Les cultures cellulaires animales
Besoin d’un grand nombre de cellules pour des études diverses :
Informations sur un type cellulaire dans la population hétérogène d’un tissu
Isolement cellules par rapport au tissu: [dissociation + mise en culture +/-
prolifération]
Comportements différent en culture selon le type de cellule
Cellules circulantes → culture en suspension → Cellules Flottantes
Cellules organisées en tissu → adhérentes au support
Cultures primaires ou secondaires lignées (immortelles - commercialisées)
les cultures primaire principe
• Principe: il s’agit d’aller chercher une cellule dans un organisme pluricellulaire
et de la faire « pousser » in vitro.
• Les cellules peuvent être flottantes ou adhérentes, selon le type cellulaire
considéré.
importance du milieu de culture (culture primaire)
Les cellules primaires sont très sensibles à leur environnement.
Dans ces conditions, il faut trouver :
- un facteur de croissance spécifique, qui dépend du type de cellule à
privilégier (souvent contenu dans du sérum de veau fœtal)
- une cellule nourricière adaptée qui permettra d’habiller le plastique d’une
couche de cellules sur lesquelles les cellules d’intérêt pourront pousser et
échanger des nutriments.
In vitro: Les lignées cellulaires
• Les lignées cellulaires sont des cellules “immortelles”, c’est-à-dire des
cellules que l’on peut maintenir en culture indéfiniment. Ce sont des
cellules qui ont été rendues immortelles car :
elles sont cancéreuses ;
elles sont contaminées par un virus qui les rend immortelles (comme un virus du
groupe Herpès ou le SV40);
elles ont été modifiées par génie génétique pour être immortelles ; le plus simple
étant de leur injecter le gène codant pour une protéine rendant immortel (comme
le gène T du virus SV40).
• Leur culture est considérée comme « facile », car elles échappent à
tout phénomène de sénescence, et plus ou moins à l’apoptose. Elles
s’adaptent donc facilement aux conditions de culture artificielles.
• En conséquence, les lignées sont exposées au risque de dérivation de
souche. C’est ce qui pose des problèmes de reproductibilité entre
deux laboratoires différents.
Utilisation des cultures cellulaires
Etude des mécanismes de la physiologie cellulaire :
- contrôle du cycle cellulaire
- métabolisme
- régulation de l’expression des gènes
- étude de la motilité cellulaire
- étude des jonctions cellulaires…
Utilisation des cultures cellulaires
En médecine on utilise les cultures cellulaires pour :
- la réalisation de greffes ou d’autogreffes (cellules souches sanguines)
- le dépistage des maladies génétiques (caryotype)
- la thérapie génique…
Utilisation des cultures cellulaires
L’industrie pharmaceutique utilise les cultures cellulaires pour :
- l’étude pharmacologique et toxicologique des nouveaux médicaments
- la production de substances à usage thérapeutique : insuline, hormone de
croissance. .. - la production de vaccins.
Utilisation des anticorps
- expression d’une protéine (western blot)
- localisation d’une protéine dans un tissu
- recherche des partenaires d’une protéine (Immunoprécipitation)
notion de base anticorps
- Glycoprotéine complexe produite pas des plasmocytes en réponse à une
stimulation par un antigène. - Peut se fixer spécifiquement à l’antigène (neutralisation et recrutement du
système immunitaire).
Affinité déf.
force de liaison antigène-anticorps
epitope déf.
déterminant antigénique
paratope déf.
site de liaison à l’antigène, présent sur l’anticorps
Anticorps monoclonaux déf.
-anticorps ayant le même paratope et dirigés contre un
seul épitope
-Ils sont produits par un même clone de plasmocytes
Anticorps polyclonaux déf.
anticorps reconnaissant de multiples épitopes d’un même antigène (Ac monospécifique) ou de plusieurs antigènes (Ac polyspécifiques)
