Détection des proteines in situ Flashcards
Immunomarquage
-méthode qui permet de détecter des protéines (ou d’autres
antigènes) dans des coupes de tissu.
-Les coupes sont exposées à des anticorps marqués dirigés contre des
épitopes de la protéine cible.
-Il devient donc possible de visualiser une cible à l’aide d’un marqueur, un colorant fluorescent par exemple.
pourquoi a préparation de l’échantillon de tissu est très importante?
- si la structure du tissu est altérée, l’affinité de l’anticorps peut être réduite fortement
- on tente de préserver le tissu proche de ses conditions de vie réelle tout en empêchant l’autolyse et la dégradation dues à une prolifération
bactérienne ou fongique.
→ Pour ce faire, on utilise des fixateurs (PFA, formol).
Immunohistochimie
-méthode dans laquelle l’anticorps de révélation est couplé à une enzyme qui convertit un substrat incolore en un produit coloré insoluble qui se
dépose au niveau de l’anticorps.
-Le résultat peut être observé directement en microscopie optique.
Immunohistofluorescence
-l’une des techniques de détection les plus performantes pour détecter la présence d’un anticorps fixé sur un antigène tissulaire ou cellulaire
-Ici, un colorant fluorescent
(isothiocyanate de fluorescéine ou phycoérythrine) est fixé de façon covalente à l’anticorps
spécifique et permet la détection directe de l’antigène à analyser.
-On peut en outre utiliser
des Ac anti-Ig fluorescents pour détecter des anticorps fixés sur l’antigène tissulaire on parle
alors dans ce cas d’immunofluorescence indirecte.
-La lecture des coupes tissulaires ou des
cellules ainsi marquées est réalisée à l’aide d’un microscope UV à fluorescence.
application des anticorps
difference entre methode direkt et indirekt
Méthode directe : en liant un anticorps
conjugué à un marqueur à sa substance cible.
Méthode indirecte : en incubant l’anticorps primaire dans la substance cible, puis en liant un anticorps secondaire marqué à l’anticorps primaire.
