Détecter l'expression d'une protéine : le western blot 2

Question 1

Transfert

Answer 1

1. Une fois que les protéines ont migré, elles sont transférées sur une membrane de nitrocellulose.
2. La fixation des protéines à la membrane se fait grâce à des interactions hydrophobes et ioniques entre la membrane et les protéines.
3. Le blocage des sites libres de la membrane est indispensable pour limiter les interactions
   non spécifiques ultérieures entre les anticorps et la membrane.
4. Le blocage est réalisé dans
   une solution de protéines concentrées (en pratique, on utilise du lait en poudre solubilisé dans le tampon d’incubation des anticorps).

Question 2

Détection / résultat

Answer 2

1. Le principe consiste à appliquer sur la membrane des anticorps marqués qui sont spécifiques des protéines d’intérêt.
2. On incube la feuille de nitrocellulose dans une
   solution tampon contenant les anticorps.
3. Après quelques lavages, on révèle la présence
   des anticorps par un système de chimioluminescence, l’enzyme responsable étant portée par l’anticorps.
4. On pourra ainsi observer la position des protéines d’intérêt sur sur le gel.