Methode D'etudes Des Proteines Flashcards
Dans quels cas uttilise t’on la loi de la spectrophotométrie beer lambert
Molecules dans un milieu simple
Molecules preponderante dans un milieu complexe
Dans le cas d’une molécule minoritaire dans un milieu complexe
Que fait on ?
On l’étudie par reaction colorimetrique Car : concentration trop faible Milieu trop complexe Pas de spectre caractéristiques Pas de dosage simple possible
Quels s deux types de dosages colorimetrique
Methode de biuret
Et
BCA= acide bicinchoninique
En quoi consiste la methode de biuret
Complexe de l’azote des liaison peptidique avec le cuivre
Quel pH est nescessaire a la methode de biuret
Ph alcalin
Absorbance de la methode de biuret et bca
540 nm biuret
Bca 562 nm
En quoi consiste la bca
Meme methode que biuret sauf qu’on uttilise des ions cuivres chelaté par 2 BCA
Biuret et BCA sont sensibles jusqua quelle concentration ?
Biuret = 1mg Bca = 2μg/mL
Vf: dans l’electrophorese native les protéines sont dénaturées
Faux elles ne sont pas dénaturées
Quel type de support uttilise ton dans l’electrophorese native
Fel d’aggarose ou PAGE (polyacrylamide )
Dans l’electrophorese native les proteines sont séparés par leur poid moleculaire V/F
Faux les protenes sont separees selon leur charge
Pour quel diagnostic sert l’electrophorese native ?
Pour la drepanocytose
Quelle est la différence entre une Hemoglobine S et une hémoglobine A1
On a un AA acide perdu (GLU) dans Hbs
Vf: l’hemoglobine S migre au plus loin pôle - que HbA1
Faux et faux
Sens de migration du - —> + et hbs migre moins que HbA1
Dans l’electrophorese denaturante on peut utiliser 2 sortes de produits,lesquels ? Quelles sont leur particularités
SDS= detergent anionique: entoure les molecules d’une charge -
=> elimine la structure spatiale des proteines
β-mercaptoéthanol: agent réducteur
=>reduit les ponts SS
Quel type de support uttilise t’on pour l’electrophorese denaturante
SDS PAGE
Electrophorese denaturante : molecules séparées selon leur charge vf?
Faux séparés selon leur poids moleculaire
Vf: Electrophorese dénaturante: prot qui ont un faible poids moléculaire migre plus vite du - vers +
Vrai
Quel support uttilise t’on pour l’electrofocalisation ?
Gel page + gradient de pH
Les prots sont dénaturéses pour l’electrofocalisation vf?
Faux elles ne sont pas dénaturées
Electrofocalisation =migration selon charge vf?
Faux migration selon phi
Electrophorese bidimensionelle : parametre de migration ?
1- selon pHi : IEF
2-puis selon Poids moléculaire) SDS PAGE
Electrophorese bidimensionelle : les prots sont dénaturées
Faux elle sont non dénaturées puis dénaturées
Electrophorese denaturante : combien de composés peuvent être analysés au maximum ?
60
Electrophorese bidimensionelle est ensuite analysé par quoi ?
Spectrometrie de masse -> identification
Les deux etapes du western blot
1- Separation par electrophorese :sds page
2- transfert des proteines sur une membrane
2 types de membranes utilisées pour le western blot :
Nitrocellulose ou PVDF
Electrophorese capillaire : quel type de support uttilise t’on ?
Milieu liquide solution tampon
Electrophorese capillaire : comment migrent les proteines ?
Selon leur charge et leur poids moleculaire
A quoi est couplée l’Electrophorese capillaire
A un spectrophotomètre
Quels sont les atouts de l’Electrophorese capillaire
Rapide sensible et automatisable
Définition de la proteomique
Analyse de l’ensemble des proteines a un instant t dans un environnement donne
2 outils servent a la proteomique, les quels ?
1- electrophorese ou chromatographie pour la seperation
Puis spectro de masse pour l’identification
Ou 2- puces a proteines
Par quelle molecule sont clivés les proteines pour leur identification + mécanisme d’action
Par l’endopeptidase TRYPSINE qui clive en plusieurs peptidique la proteine en CTerm des ARG ou LYS
Comment s’appelle l’ancienne methode qui sequence chaque peptide depuis l’extrémité NTerm
Methode edman
Rompt la liaison du dernier aa
Quel est le but des biopuces a proteine
Permet d’analyser des 1000iers de proteines avec une qté minimale d’echantillon
Principe des biopuces a proteine
Interactions sandwich basé sur l’interaction AC<=> AG
les biopuces peuvent identifier Jusqua cb de proteines sur une lame ?
10 000 différentes
Qu’est-ce que la proteomique descriptive ?
Inventaire des proteines presente dans un échantillon
Qu’est-ce que la proteomique d’expression ?
Comparaison de proteines soumises a 2 conditions differnetes
Ex: determination des proteines caractéristiques d’une pathologie pour s’en servir comme biomarqueur
