Laboratoires Flashcards
Qu’est-ce qu’une culture pure?
Une seule espèce microbienne
Pourquoi devons nous isoler les microorganismes en culture pure?
Pour les caractériser
Comment pouvons nous isoler un microorganisme?
Par une technique de repiquage en milieu solide ou liquide qui respecte une technique aseptique rigoureuse.
En général, de quoi sont composés les milieux de culture?
D’éléments nutritifs permettant la croissance des microorganismes.
Comment s’appelle un milieu de culture liquide?
bouillon nutritif
Comment s’appelle un milieu de culture solide?
Gélose
Qu’avons-nous ajouté au bouillon nutritif pour obtenir une gélose?
de l’agar.
Que forme la multiplication des cellules dans un milieu de culture liquide?
Une suspension qui apparaît de plus en plus trouble, empêchant ainsi la lumière de traverser efficacement le milieu.
Que forme la multiplication des cellules sur une gélose?
des colonies à l’endroit où elles ont été déposées initialement.
Peut-on voir une bactérie seule à l’oeil nu?
Non
Qu’est-ce qu’une colonie bactérienne?
- Des millions de cellules réunies autour d’une cellule mère.
- Amas de cellules
Comment peut-on observé les colonies?
À l’oeil nu ou au microscope.
Dans une colonie, les cellules sont identiques ou non?
-Elles sont identiques
Est-ce que des espèces bactériennes différentes ayant des caractères différents auront des colonies de même apparence?
Non, elles présenteront généralement des colonies d’apparences différentes sur une même gélose.
Peut-on utiliser l’apparence des colonies pour déterminer le nombre d’espèce?
Oui, l’aspect des colonies peut être utile pour déterminer si une culture contient une seule espèce ou plus d’une espèce.
Est-ce que l’on peut se fier seulement à l’apparence des colonies pour identifier une espèce inconnue?
L’apparence des colonies peut servir avec une certaine limite d’élément d’identification d’une espèce inconnue.
De quoi dépend l’apparence des colonies sur un milieu de culture solide?
- Espèce microbienne
- Conditions physico-chimiques de l’incubation (T°, pH, présence de gaz,…)
- Milieu de culture employé
- Durée de l’incubation
Que contiennent les géloses sang?
Des globules rouges de moutons
Que permet de vérifier la gélose sang?
La capacité de certaines espèces microbiennes plus fastidieuses de lyser les GR dans le but de profiter d’une source plus importante de nutriments
Quelles sont les deux techniques utilisées pour obtenir des colonies isolées?
- Isolement par épuisement
- Méthode des dilutions
Quelle est la limite importante d’une technique d’isolement faite à partir d’un mélange de 2 espèces ou plus?
Si une espèce est beaucoup moins abondante qu’une autre, il sera ainsi difficile d’obtenir des colonies isolées de l’espèce minoritaire.
En quoi consiste l’isolement par épuisement? (technique)
- Étalement progressif des microorganismes sur une gélose en boîte de Pétri. Cet isolement est réalisé à l’aide d’un fil de nichrome en forme de boucle porté par un manche de Koch. Après l’avoir plongé dans une culture microbienne liquide ou avoir touché à une colonie sur une gélose, quelques milliers de cellules peuvent être présentes à la surface du fil. Ces microorganismes peuvent être déposés à la surface d’une gélose en effectuant des striations. À mesure que les stries s’éloignent de la zone de contact initiale sur la gélose, le nombre de microorganismes diminue sur le fil.
- Au niveau des stries les plus éloignées de l’endroit ou le fil bouclé à toucher la gélose pour la première foie, le nombre de bactéries est très faible. On aura alors des cellules microbiennes bien séparées les unes des autres déposées sur la gélose. Elles donneront des colonies isolées en se multipliant.
En quoi consiste la méthode des dilutions? (technique)
-les cellules microbiennes sont d’abord séparées les unes des autres en effectuant des dilutions progressives en milieu liquide. Par la suite, chacune des dilution est ensemencée sur une gélose.
Que permet la méthode des dilutions?
-Calculer le nombre d’unités viables (NUV) et d’observer les différentes espèces qui sont présentes
Pour quelles raisons est utilisé la méthode des dilutions?
Pour vérifier la contamination microbiologique et dénombrer les microoragnismes d’aliments comme le lait et l’eau où le compte précis de microorganismes est très important.
Pourquoi la méthode des dilutions n’est pas utilisée fréquemment en microbiologie clinique?
Car on ne veut pas connaître le nombre de microorganismes, mais on veut plutôt les identifier.
Pourquoi l’air ambiant n’est pas propice à la multiplication microbienne?
- Faible concentration de matières organiques
- Faible humidité relative
À quoi servent les particules solides dans l’air pour les microorganismes?
-De véhicule inerte
Quelles sont les particules dans l’air?
- Poussière (particules solides)
- Particules liquides comme aérosols
Qu’arrive-t-il si l’air est confiné?
Plus l’air est confiné, plus on y retrouvera des bactéries et des virus provenant des voies respiratoires humaines, parfois des systèmes de ventilation et des animaux domestiques.
Est-ce que le corps humain est un bon environnement pour les microorganismes? Pourquoi?
Oui puisqu’il est humide et riche en nutriments à sa surface (peau et muqueuse).
Quelles sont les sources de contamination des aliments?
- Air ambiant
- Milieux naturels comme le sol, les eaux brutes ou les eaux usées
- Les animaux
- Les personnes qui les manipulent.
Est-ce qu’un aliment d’excellente qualité contient de microorganismes?
Oui
En laboratoire, comment crée-t-on une zone protégée de la contamination?
-Il faut utiliser un Bec Bunsen qui est capable de créer une flamme à partir d’un gaz combustible. Lorsque cette dernière est bleue (1500°C) et d’une hauteur de 5 à 10 cm, une zone protégée en forme de parapluie et d’une trentaine de centimètre de diamètre se forme autour de la flamme du Bec. Pour que cette zone soit protégée, il ne doit pas y avoir de courant d’air qui fait osciller la flamme.
Qu’est-ce que la turbidité?
Lorsqu’un microorganisme rend le liquide du bouillon nutritif trouble.
Quelles sont les 3 étapes de l’isolement par épuisement sur milieu solide?
- striations avec fil bouclé sur un premier tiers de la gélose puis flambage du fil bouclé. Le laisser refroidir.
- Deuxième série de striations sur un deuxième tiers de la gélose en ayant soin de repasser à quelques reprises le fil bouclé stérilisé sur les dernières stries de la premières série.
- troisième série de stries sur le dernier tiers de la gélose, en ayant soin de repasser à quelques reprises le fil bouclé sur les dernières stries de la deuxième série de striations.
Est-ce que deux colonies distinctes ayant une morphologie différente sur une même gélose sont deux espèces différentes?
Deux colonies distinctes présentant des morphologies différentes sur une même gélose seront nécessairement des espèces différentes.
Que permettent les caractéristiques morphologiques des colonies sur gélose?
Elles permettent de différencier entre eux les microorganismes (dans bien des cas).
Est-ce que deux colonies distinctes ayant une morphologie identique sur une même gélose sont d’une seule espèce?
Deux colonies distinctes présentant une même morphologie coloniale sur une même gélose n’appartiendront pas nécessairement à la même espèce.
Avec quoi peut-on étaler uniformément sur la gélose une goutte d’une culture inconnue? Ou cette technique est-elle utilisée?
- Un étaleur coudé (patin)
- En industrie et dans le milieu hospitalier.
Existe-t-il un milieu de croissance qui permet de faire croître tous les microorganismes? Pourquoi?
Non, car les besoins nutritionnels sont différents d’un microorganisme à un autre.
Quels aliments sont fermentés par des microorganismes?
Lait, fromage, boissons alcoolisées
Lorsque l’on fermente des aliments avec des microorganismes à quoi faut-il faire attention?
- il faut s’assurer de pouvoir arrêter le processus au bon moment.
- Prévenir le développement de microorganismes pathogènes.
Que peuvent causer des microorganismes pathogènes dans les aliments?
Des toxi-infections
Quelle est la différence entre la stérilité et la désinfection?
La stérilité vise à détruire tous les microoragnismes alors que la désinfection vise à détruire les microorganismes potentiellement pathogènes.
Qu’est-ce que la décontamination?
Réduire la teneur en microorganismes en dessous d’un seuil qui selon les normes g’hygiène publique est considéré comme étant sécuritaire.
Quel est le but des méthodes antiseptiques?
Prévenir l’infection d’un tissu vivant.
Quels sont les principaux agents physiques pour contrôler le développement microbien?
- La chaleur
- Les basses températures
- La filtration
- Les radiations
À quoi mène l’utilisation d’une température élevée (>100°C)?
À la stérilisation
Comment peut-on qualifier l’appertisation, l’ébullition et la pasteurisation?
Ce sont des méthodes de contrôle et pas de stérilisation.
Quels sont les principaux traitements de stérilisation par la chaleur? (dire T° et temps aussi)
- La chaleur sèche au four Pasteur à 170°C pendant 2 h au minimum
- La chaleur humide à l’autoclave à 121°C pendant 15 à 30 minutes.
Quels microoragnismes l’ébullition nous permet de détruire?
La plupart des virus
Les bactéries sous leur forme végétative
Quels microoragnismes la pasteurisation permet de détruire?
Elle détruit les microorganismes les plus sensibles à la chaleur dont plusieurs pathogènes présents dans les produits laitiers.
Est-ce que les basses températures sont des méthodes de stérilisation?
Non.
Quel est le but des basses températures?
Ralentir et retarder le développement des microorganismes
Quelles sont les différences entre la réfrigération et la congélation?
La réfrigération (4 à 7°C) ralentit le métabolisme microbien alors que la congélation (<0 à -18°C ou -70°C ou -195°C) peut aller jusqu’à bloquer complètement toute activité métabolique.
Que se passe-t-il lorsque on décongèle un aliment?
Les microorganismes peuvent se mettre à croître à nouveau puisque ceux-ci non pas été tués.
Quelle est la température optimale de croissance des mésophiles? des psychrophiles? des thermophiles?
- Mésophiles: 20 à 45°C
- Psychrophiles: en dessous de 10°C
- Thermophiles: entre 45°C et 60°C
Pourquoi appelle-t-on certaines microorganismes des psychrotrophes ou des psychrophiles falcultatifs?
Ils ont des températures optimales de croissance variant de 20 à 30°C, mais ils peuvent vivre entre 0 et 7°C.
Quelles sont les caractéristiques des microorganismes dits thermorésistants?
- Ils ne se reproduisent pas à des températures plutôt élevées, mais peuvent y survivre momentanément lorsqui’ils y sont exposés.
- Ce sont souvent des mésophiles producteurs d’enspores ou des thermophiles.
- Peuvent supporter de hautes températures pour quelques minutes.
Quels microorganismes sont présents dans le lait cru? d’où proviennent-ils?
- bactéries lactiques qui ne sont pas dangereuses pour la santé
- Entérobactéries (coliformes)
- Bactéries pouvant causer des infections bovines transmissibles à l’homme comme la tuberculose bovine ou la brucellose.
- Les bactéries viennent des animaux, de l’équipement et du personnel.
Que fait-on au lait suite à la traite?
-Le lait est rapidement refroidit à 5°C afin de limiter la croissance microbienne.
Comment pasterise-t-on le lait?
Incubant pendant 16 secondes à 72,8°C suivi d’un refroidissement rapide
Est-ce que le lait pasteurisé est stérile?
non
Quelles bactéries peuvent être présentes suite à la pasteurisation?
- Lactobacilles
- Les streptocoques thermorésistants et les forme sporulées
Comment le lait UHT est pasteurisé?
Procédé thermique particulier sous pression de 135-145°C durant 3 à 5 secondes.