Labo 7 : Isolement de plasmides et digestion avec enzymes de restriction Flashcards
Un ? est une molécule d’ADN distincte de ?, capable de réplication autonome et non essentielle à la survie de la cellule.
plasmide
l’ADN chromosomique
Les plasmides pBR322 et pB322A sont contenus dans 2 souches de la bactérie ? et lui confèrent une résistance à ?.
Le plasmide pBR322 comprend :
Le plasmide pBR322A comprend :
E. coli (chromosome avec 4,6 millions de pb + 1 à 100 copies de plasmide de 3000 à 10 000 pb par bactérie)
l’ampiciline
un site de restriction EcoRI et un BamHI
2 sites de restriction EcoRI (fragment) et un BamHI
La dénaturation des phospholipides et des protéines des membranes cellulaires est assurée par ?, tandis que ? provoque l’augmentation du pH de la solution, ce qui dénature l’ADN chromosomique et plasmidique.
le sodium dodécyl sulfate (SDS)
le NaOH (base forte)
Plasmide recombiné qui, grâce à sa réplication autonome, permet de cloner des gènes = ?
vecteur de clonage
Molécule d’ADN créée en laboratoire composée de séquences nucléotidiques provenant de plusieurs sources créant ainsi des séquences qui n’existent pas dans les organismes vivants = ?
ADN recombinant
Représentation graphique de la localisation des sites de restriction sur une molécule d’ADN = ? (schéma représentant les sites des séquences reconnues par des enzymes de restriction)
Sert à identifier les fragments d’ADN ou à mettre en évidence les ?
carte de restriction (construite en digérant l’ADN avec plusieurs enzymes de restriction (digestions simples et multiples) et en analysant les fragments résultants par électrophorèse sur gel)
polymorphismes
Les ? sont des endonucléases reconnaissant une séquence spécifique, généralement de 4 à 8 nucléotides, qui présentent un motif de ?.
La ? de celles-ci indiquent leur provenance.
enzymes de restriction
palindrome
nomenclature
Le ? est une séquence d’ADN pouvant se lire de la même façon dans les 2 sens par rapport à un point central, soit sur le même brin, soit sur les 2 brins.
palindrome
Polarité de l’ADN…
Chaque brin possède une extrémité ? et une extrémité ?.
Par convention, on lit toujours une séquence de l’extrémité ? vers ?
5’-phosphate
3’-OH
5 vers 3
Enzyme qui catalyse la formation du lien phosphodiester = ?
ligase
Les extrémités ? s’emboîtent de façon palindromique
Les extrémités ? se collent de façon égale
cohésives (extrémité 3’ ou extrémité 5’ protubérante)
franches
Parmi les nucléotides de l’ADN, lesquels sont complémentaires ?
A et T
G et C
Étapes d'extraction des plasmides 1 - ? 2- ? 3 - ? 4 - ?
1- Centrifugation pour récolter bactéries
2- Lyse des bactéries (lyse alcaline avec SDS et NaOH)
3- Précipitation des protéines et ADN chromosomique et renaturation des plasmides
4 - Précipitation des plasmides
L’ADN peut se ? et se ?.
L’ADN natif double brin devient de l’ADN simple brin après dénaturation avec NaOH ou chaleur. Puis, il est renaturé avec baisse de pH ou refroidissement lent (ajout acétate de potassium et ponts hydrogènes vont se reformer).
dénaturer et renaturer
L’ADN est chargé ? à pH plus grand ou égal à 7.
négativement (groupements phosphate perdent leur H)
