Lab coloration HE (Histotechnologie) Flashcards
Modification numéro 1 colore quels éléments:
Éléments non nucléaires avec éosine non acidifié.
Déparaffinage non complété:
Taches ou zones blanches peuvent être observées dans les sections de tissus après l’étape de déparaffinage.
Qu’est ce qui cause la déparaffinage non complété:
- eau ayant demeuré dans le tissu
- séchage incomplet des coupes
- séjour trop court dans les bains de xylène lors du déparaffinage
Manque de détails nucléaires:
Lorsqu’il est pratiquement impossible d’observer les différents motifs de la chromatine dans le noyau, la coloration nucléaire est souvent surnommée brouillés ou boueuse.
Qu’est ce qui cause le manque de détails nucléaires:
- fixation incomplète
- chaleur excessive lors de la circulation des tissus ou lors du séchage des coupes
Noyaux colorés trop pâle peut être causé par:
- un séjour trop court dans la solution d’hématoxyline
- utiliser une solution d’hématoxyline suroxydée ou expirée
- trop de différenciation de l’hématoxyline
- si dans une section d’os, décalcification excessive
- fixateur très acide (correction en augmentant le séjour dans l’hématoxyline ou en utilisant une méthode qui permet d’augmenter la basophilie du tissu)
Noyaux colorés trop foncé est causé par:
- séjour trop long dans la solution d’hématoxyline
- sections trop épaisses
- différenciation de l’hématoxyline insuffisante
Noyau de couleur rouge ou rouge-brun est causé par:
La solution d’hématoxyline est sur le point de ne plus être bonne ou l’étape de bleuissement des noyaux n’a pas été effectuée correctement.
Cytoplasme coloré trop pâle est causé par:
- augmentation de pH de l’éosine au-dessus de 5 (causé par une contamination de l’éosine par l’agent de bleuissement ou par une éosine qui n’a pas été acidifié
- sections trop minces
- séjour dans les agents déshydratants ait été trop long (plus il y a d’eau, plus il y aura d’éosine d’enlevé)
Cytoplasme coloré trop foncé est causé par:
Surtout avec le mélange éosine-phloxine
Éosine incorrectement différencié est causé par:
- la fixation n’est pas complète
- la déshydratation ou l’éclaircissement n’est pas complète
- les sections venant d’être colorées à l’éosine demeurent dans des alcools ayant les plus faibles dilutions pour une différenciation approprié
- le pH de l’éosine n’est pas adéquat
Précipités bleu-noir sur les sections est causé par:
- si la mince couche métallique qui se développe sur la plupart des hématoxyline a été ramassée par la lame lors de la coloration
- prévention: filtrant l’hématoxyline avant l’utiliser
eau et coupes d’aspect brumeux ou laiteux:
- présence de xylène sur les coupes et dans le bain d’eau
Coloration HE irrégulière:
- présence d’eau ou de liquide fixateur dans la paraffine lors de l’imprégnation
- contamination des réactifs dans un appareil à circulation de type fermée causé par un mauvais fonctionnement de l’équipement
- contamination des réactifs causé par ‘absorption d’eau présente dans l’atmosphère par les alcools servant à la déshydratation dans le cas d’un appareil à circulation de type ouvert.
- si le niveau des solutions ne partient pas à recouvrir toute la surface de la lame
Comment fait on pour éviter une contamination dans les systèmes ouverts.
Utilier du toluène au lieu du xylène dans les zones où le taux d’humidité est élevé car le toluène est plus tolérant face à l’eau par rapport au xylène.
Résultat de la modification 1 (Utilisation d’une solution éosine non acidifié):
Cytoplasme coloré trop pâle
Éosine incorrectement différencié
Résultat de la modification 2 (omettre l’étape du bleuissement des noyaux):
Les noyaux seront de couleur rouge ou rouge-brun.
Résultat de la modification 3 (pas rincer les lames à la sortie de l’agent de bleuissement):
Cytoplasme coloré trop pâle
Prévention d’une déparaffinage non complété:
- bien assécher les sections avant le déparaffinage
- laisser suffisamment longtemps dans le xylène lors du déparaffinage
- éviter l’utilisation de xylène contaminé. changer la solution si nécessaire
Comment corriger le déparaffinage non complété:
Si un mauvais séchage des coupes est en cause, traiter les sections avec alcool absolu pour retirer l’eau et traiter de nouveau au xylène pour retirer la paraffine
Si les coupes ont été colorées, décolorer, traiter et recolorer
Prévention d’un manque de détails nucléaires:
- fixer les tissus complètement
- déshydratation et éclaircissement complète du tissu avant imprégnation
- chaleur seulement pour paraffine
- ne pas laisser le tissu dans la paraffine fondue pour une période de temps prolongée
- assécher les coupes à une température convenanble (
Prévention des noyaux colorés trop pâle:
- laisser les coupes suffisamment longtemps dans l’hématoxyline
- attention à la suroxydation ou l’expiration de l’hématoxyline
- respecter le temps de différenciation des noyaux
Prévention de noyaux colorés trop foncés:
- s’assure de la bonne épaisseur de la section
- s’assurer du bon temps dans l’hématoxyline
- s’assurer du bon temps de différenciation
Correction de noyaux colorés trop foncé:
Si section pas trop épaisse, décolorer et recolorer en s’assurer ou ajustant les temps dans l’hématoxyline et de différenciation.
Prévention de noyau de couleur rouge ou rouge-brun:
- S’assurer d’un bon bleuissement des noyaux, il est impossible de trop bleuir
- vérifier l’état d’oxydation de l’hématoxyline
Prévention du cytoplasme coloré trop pâle:
- rincer les coupes après l’agent de bleuissement
- acidifier l’éosine
- s’assurer d’une bonne épaisseur des coupes
- s’assurer que le séjour dans les alcools à basse concentration suivant l’éosine ne soit pas trop long. Plus il y a d’eau dans ces solutions d’alcool, plus il y aura d’éosine d’enlevé
Correction du cytoplasme coloré trop pâle:
Décolorer les coupes et recolorer en y apportant les corrections
Prévention de l’éosine incorrectement différencié:
- s’assurer que la fixation est adéquate et complète
- s’assurer que la déshydratation et éclaircissement sont adéquats lors de la circulation
- les sections venant d’être colorées à l’éosine demeurent dans des alcools ayant les plus faibles dilutions pour une différenciation approprié. Un séjour adéquat dans l’alcool 70% donnera la meilleure différenciation de l’éosine.
- le pH de l’éosine est adéquat
`Correction de l’éosine incorrectement différencié:
Décolorer et recolorer si possible
Prévention d’un précipité bleu-noir sur les sections:
FIltrer l’hématoxyline tous les jours avant l’utilisation.
Prévention d’une coloration HE irrégulière:
Utiliser du toluène au lieu du xylène
Correction de la colroation HE irrégulière:
Ne peut pas être corrigé
Comment se fait la déparaffinage:
- 2 bains de xylène
- 1 bain d’alcool 100%
- 1 bain d’alcool 95%
- 1 bain d’alcool 70%
- 1 bain avec eau courante
Hématoxyline doit être oxydé par quoi pour devenir de l’hématéine:
Oxyde mercurique ou iodate de sodium
Hématoxyline n’est pas utilisable jusqu’à ce qu’on rajoute:
Un mordant, devient donc une laque
Hématoxyline est directe ou indirecte:
Indirecte
Est ce que l’hématoxyline est acide ou basique:
Elle est acide mais avec un morndant, elle deivent basique qui se lie à l’ADN
Hématoxyline est régressive ou progressive:
Régressive
Rôle de l’éosine:
Permet de faire la différence entre le cytoplasme, les fibres tissu conjonctif et les globules rouges en les colorant en différentes tintes de rose.
Éosine est directe ou indirecte:
Directe car ne requiert pas de mordant, mais nécessite un accentuateur.
L’éosine est acide ou basique:
Acide
Solutions de HE:
- hématoxyline
- eau
- alcool acide 1%
- eau
- carbonate de lithium
- eau
- alcool 95%
- éosine
- alcool 95%
- alcool 100%
- alcool 100%
- xylène
- xylène
Couleur du noyau:
Bleu
Couleur du cytoplasme, muscle, tissu conjonctif:
DIfférentes tintes de rose
Couleur des globules rouges:
rose vif à orangé
Couleur de mucine:
peu ou pas coloré
Couleur de cartilage:
Mauve
Couleur de dépots de calcium
Bleu foncé
