Examen 2 (Histotechnologie) Flashcards
Quel est le prinipe des colorants amphotères:
Son comportement dépend du pH de la solution
Quels sont les artéfacts d’enrobage:
- Tissu d’apparence molle
- Orientation incorrecte
- Contamination
- Tissus pas enrobés au même niveau
- Morceaux de tissu manquants
Comment éviter l’artéfact Présence d’ondulations sur la coupe (washboarding)
- serrer le bloc ou la lame
- changer les pièces usées
- rentrer la manche du microtome
- réduire l’angle de dégagement
Présence d’ondulations sur la coupe (washboarding) est quel type d’artéfact:
Microtomie
Différents types de coupes:
- la coupe au hasard: la surface doit être 100%
- les niveaux: deux ou trois dépendant du pathologiste
- la coupe sérié: les sections doivent être placées en séquence et numéroter dans l’ordre de la coupe avec aucune section jetée
Comment le pH de la solution influence les propriétés des colorants basiques:
- si la solution est trop acide, seulement les structures riches en hydrates de carbone sulfatés seront colorés
- si elle est neutre ou alcaline, tout sera coloré
Est-ce que le colorant Safran est basique ou acide
Acide
Qu’est ce qui cause la déparaffinage non complété:
eau ayant demeuré dans le tissu
séchage incomplet des coupes
séjour trop court dans les bains de xylène lors du déparaffinage
Présence de stries est quel type d’artéfact:
Microtomie
Les sections sont excessivement comprimées est quel type d’artéfact:
Microtomie
Couleur de dépots de calcium (HE)
Bleu foncé
Comment corriger le déparaffinage non complété:
Si un mauvais séchage des coupes est en cause, traiter les sections avec alcool absolu pour retirer l’eau et traiter de nouveau au xylène pour retirer la paraffine
Si les coupes ont été colorées, décolorer, traiter et recolorer
Quels sont les auxochromes basiques:
Voir FC
Quelle est la composition du noyau:
- groupements phsophate de ADN
- Histones
Quelle est la couleur de la laque de l’Hématoxyline ferrique
Noir
Est-ce que l’angle du biseau est controlable ou non
Non
Synonyme d’enrobage:
Inclusion
Quel est le prinipe du chromophore quinoide:
Les variations de couleur sont causées par d’autres groupes (chromophores) qui sont attachés à l’anneau quinone
Deux méthodes d’étalement:
- sur eau chaude
- sur lame
Quelle est la description de l’artéfact Tissu d’apparence molle
Le centre de la pièce a une texture molle car elle a été mal circulée
Comment éviter l’artéfact Les sections alternent entre épaisses et minces, course à vide (section sautée)
- augmenter légèrement l’angle de dégagement
- vérifier le fonctionnement du mécanisme
Correction de la colroation HE irrégulière:
Ne peut pas être corrigé
Quelle est le différentiateur de l’Hématoxyline ferrique
Weigert : alcool-acide
Verhoeff : le mordant
Quelle est la cause de l’artéfact Contamination
Transfert de fragments de tissu d’un spécimen à l’autre
Quelle est la couleur du noyau de l’Hématoxyline aluminique
Bleu
Contamination est quel type d’artéfact:
Enrobage
Comment éviter l’artéfact Les sections s’envolent et se collent aux objets ou aux autres parties du microtome
- humidifier l’air en soufflant sur le bloc et sur le couteau lors de la coupe
- faire bouillir de l’eau près du microtome
- mise à terre du microtome
- ioniser l’air
Quelle est la description de l’angle de dégagement (en relation avec le bloc)
Formé par la facette inférieure du biseau et la surface du bloc à couper
Quel est le rôle du colorant Carmin
- glycogène (pas besoin de mordant)
- mucines
Quelle est l’angle de dégagement (en relation avec le bloc)
3-8o
Quelle est la formule chimique pour le groupe azo:
-N=N-
Prévention d’un précipité bleu-noir sur les sections en utilisant la coloration HE:
FIltrer l’hématoxyline tous les jours avant l’utilisation.
Différenciation par des acides:
Il y a bris du lien entre le mordant et le tissu
Les sections alternent entre épaisses et minces, course à vide (section sautée) est quel type d’artéfact:
Microtomie
Quelle est la description de l’artéfact Présence d’ondulations sur la coupe (washboarding)
Visible sur le bain d’étalement
Précipités bleu-noir sur les sections avec la coloration HE est causé par:
- si la mince couche métallique qui se développe sur la plupart des hématoxyline a été ramassée par la lame lors de la coloration
- prévention: filtrant l’hématoxyline avant l’utiliser
Coloration HE irrégulière:
- présence d’eau ou de liquide fixateur dans la paraffine lors de l’imprégnation
- contamination des réactifs dans un appareil à circulation de type fermée causé par un mauvais fonctionnement de l’équipement
- contamination des réactifs causé par ‘absorption d’eau présente dans l’atmosphère par les alcools servant à la déshydratation dans le cas d’un appareil à circulation de type ouvert.
- si le niveau des solutions ne partient pas à recouvrir toute la surface de la lame
Comment éviter l’artéfact Tissus pas enrobés au même niveau
- appliquer pression fermement et uniformément sur le tissu
- garder la paraffine fondue dans le fond du moule
- travailler rapidement quand plusieurs fragments et refroidir juste assez pour faire adhérer tous les morceaux au fond du moule
Les lames chargées sont surtout utilisés pour:
- immuno (peut pas utiliser d’adhésif)
- Argent (basique)
- Trichromique (acide)
Qu’est ce qu’un colorant:
Produit susceptible de teindre un élément ou une substance d’une manière durable.
Quel est le prinipe des colorants leuco:
Colorant dont on a détruit le chromophore par réduction (remplacement du chromophore par un atome d’hydrogène)
Adsorption:
Attraction des particules à la surface. Point de rencontre colorant-tissu, ce sont des liens chimiques de surface très fragile.
Déplacement du bloc ou tissu pour le Microtome à balancier
La cassette est mobile
Différents types de matériaux des lames:
- métal: lames jetables
- verre: coupe plastique et résine époxy
- diamnet: microscopie électronique
Comment faire le choix du type de paraffine utilisé:
Il doit être le même type que le média utilisé lors de l’imprégnation.
Comment éviter l’artéfact Le ruban de sections est incurvé
- aligner les bords horizontaux du bloc pour qu’ils soient parallèles
- s’assurer que le bas du bloc est parallèle avec le bord tranchant du couteau
- enlever le surplus de paraffine
- s’assurer que le bloc est uniformément refroidit
- déplacer ou remplacer le couteau
Hématoxyline doit être oxydé par quoi pour devenir de l’hématéine:
Oxyde mercurique ou iodate de sodium
Méthodes de séchage:
- étuve èa formaldéhyde
- ventilateur a air chaud
- plaque chauffante
- séchage a température ambiante
Différentes formes des couteaux:
- Plano concave: pour tissu inclus dans celluoidine car elle aide à garder l’humidité
- biconcave: rarement utilisé et remplacé par le biplan
- biplan en coin: lames jetables, pour coupe à la paraffine, carbowax et congélation
Problème de coupe avec un tissu hématopoiétique (foie, rate):
Bloc a la température de la pièece et ensuite faire la coupe (en théorie)
Si le bloc est trop froid, le tissu se défait en petits fragments
Quels sont les épaisseurs de coupes du microtome à coupe ultramince:
500-1200 A
Quels sont les caractéristiques d’un paraffine avec un point de fusion élevé:
- meilleur support pour tissus durs
- plus facile à obtenir des sections minces
- fabrifcation de rubans plus difficile
Quel est l’utilité du Microtome à balancier
- peu utilisé
- petites pièces
Transformation de l’hématoxyline:
Hématoxyline – oxydation –> hématéine – suroxydation –¨> oxyhématéine
Quelle est la description de l’artéfact Orientation incorrecte
À la microscopie (parfois à la microtomie), structures essentielles difficiles ou impossible à visualiser
Hématoxyline:
- hématoxyline: produit brute
- hématéine: produit fonctionnel
- hématéine + mordant: colorant
Quels sont les raisons pourquoi les coupes se décollent de la lame lors de la coloration:
- lames sales, grasses ou huileuses
- bulles d’air emprisonnées sous le tissu
- solutions colorantes alcaline (colorations argentiques) favorise le décollement
- trop de kératine sur le tissu
- tissu décalcifier est plus susceptible de se décoller
- tissu est riche en sang ou en caillots
- technique de coloration employée nécessite de nombreux lavages et incubations (ex: trichrome de mason)
- circulation n’a pas été réalisée correctement
- coupe trop épaisse
Est-ce que l’angle de structure est controlable ou non
Non
Quel est le role de l’accuenteur et accélérateur:
- augmente le pouvoir du colorant
- augmente la sélectivité de certains colorants par structure
Quel angle affecte la compression du couteau:
Angle de dégagement
Quel est l’utilité du Microtome-cryostat (cryotome)
- tissu congelé
- STAT, enzymes, fluorescence
- impossible de faire des rubans
Quel est le problème avec l’adsorption:
Le tissu résiste mal à la différenciation.
Quel est le but de l’enrobage:
- fournir un support externe pendant et après la coupe au microtome
- meilleure conservation du tissu à long terme
- production de rubans lors de la coupe au microtome
le bout coupant des lames jetables sont recouverts de quoi:
Une couche de chrome ou de platine pour augmenter leur résistance et durabilité.
Comment longtemps prend le séchage au ventilateur a air chaud:
5-10 minutes
Quels sont les facteurs qui influencent la microtomie :
- Position du bloc : les côtés du bloc doivent être parfaitement parallèles au tranchant du couteau
- Vitesse de coupe : doit faire un mouvement lent et continu, si trop vite, les coupes seront comprimées
- Température : température ambiante ne doit pas être plus que 22oC sinon, électricité statique
- Rabotage : arrêter quand 100% du tissu exposé
- Angles de dégagement et d’inclinaison
- Confection de rubans : le frottement du couteau produit de la chaleur et fait fondre la paraffine qui forme le ruban
Différents agents de bleuissements:
- eau courante froid ou tiède (avec un pH alcalin)
- eau ammoniacale 0.1%
- carbonate de lithium aqueux 1%
- bicarbonate de sodium ou de potassium aqueux
- eau de Scott
Effets d’un mauvais enrobage:
- orientation du spécimen: doit refondre le bloc et ré-inclure
- refroidissement du bloc trop lent:cristallisation irrégulière
- refroidissement du bloc trop rapide:bloc à surface concave
- tissu trop froid: formation d’un halo autour de la piece ou le tissu se détache de la paraffine pendant la coupe
- épaisseur de paraffine: tissue découvre pendant le refroidissement
- atttend trop longtemps avant de mettre le tissu dans le bloc: rabotage inutile
Quelle est la cause de l’artéfact Morceaux de tissu manquants
- manque d’attention
- erreur à la salle de coupe
Quelle est la cause de l’artéfact Présence de stries
- couteau encoché à un endroit
- particules dures dans le tissu ou dans la paraffine
Quel est l’oxydant utilisé pour l’Hématoxyline ferrique
L’oxydant est aussi le mordant
Éosine incorrectement différencié est causé par:
- la fixation n’est pas complète
- la déshydratation ou l’éclaircissement n’est pas complète
- les sections venant d’être colorées à l’éosine demeurent dans des alcools ayant les plus faibles dilutions pour une différenciation approprié
- le pH de l’éosine n’est pas adéquat
Quels colorants nucléaires cationqiues (+) sont adéquats lorsque utilisés seul ou en tant que contrecolorants dans d’autres méthodes:
- bleu de toluidine O
- rouge neutre
- vert de méthyle
- safranine O
Quelle est la couleur du colorant Safran
Jaune
Quelle est la couleur du noyau de l’Hématoxyline ferrique
Noir
Quelle est la couleur du colorant Carmin
Rouge
Quels sont les caractérisques d’un point de fusion bas:
- suppor pour tissus durs moins bon
- sections micnes plus difficiles à obtenir
- ruban plus facile à fabriquer
Quelle est l’origine du colorant Orcéine
Extrait de lichens
Quelle est l’angle du biseau
27-32o mais dépend du type de couteau
Quel est le prinipe des colorants fluorescents:
Possèdent des fluochromes qui absorbent les rayons UV. Une fois unis à une structure tissulaire, ils émettent une lumière visible
Un exemple d’une coloration par absorption:
Coloration des lipides
Quelle est la description de l’artéfact Morceaux de tissu manquants
Absence de morceaux, fragments
Auxochromes acides en ordre de force croissante:
- phénolique
- carboxylique
- sulphonic
Le pH de la plupart des colorants nucléaires cationiques se situe à:
3-5.5
Orientation incorrecte est quel type d’artéfact:
Enrobage
Charges des protéines:
- a un pH de 6 et moins, la charge nette des protéines est positive et l’attraction est pour un colorant anionique (-)
- au-dela du point isoélectrique des protéines, la charge nette est négative et l’attraction est pour un colorant cationique (+)
Comment fonctionne le séchage a plaque chauffante:
60oC pour 10 minutes
Comment éviter l’artéfact Trous dans la section
- attaquer le bloc plus doucement lors du rabotage ou trempé le bloc brièvement dans l’eau glacée peut parfois corriger ce problème
- tremper le bloc (tissu exposé) brièvement dans un bain d’eau glacé
- ré-imprégner le tissu
- ré-imprégner ou re-circuler si le problème est trop sérieux
Quelle est l’origine du colorant Carmin
Provient d’un insecte (cochenille femelle)
Prévention d’un manque de détails nucléaires:
- fixer les tissus complètement
- déshydratation et éclaircissement complète du tissu avant imprégnation
- chaleur seulement pour paraffine
- ne pas laisser le tissu dans la paraffine fondue pour une période de temps prolongée
- assécher les coupes à une température convenanble (
Couleur du cytoplasme, muscle, tissu conjonctif (HE)
DIfférentes tintes de rose
Quels sont les colorants nucléaires avec mordants:
- hématoxyline aluminique
- hématoxyline ferrique
Quels sont les types d’adhésifs:
- Albumine-glycérol de Mayer
- Gélatine (gélatine de chrome)
- Lames chargées Lames chargées
- Colle Lepage
Quelle est la cause de l’artéfact Tissus pas enrobés au même niveau
- fragment de tissu pas assez aplani uniformément dans le fond du moule
- plusieurs fragments enrobés à des niveaux différents
Quelle est la cause de l’artéfact Chatter microscopique ou microvibration dans la section
- tissus trop déshydraté
- manque d’humidité dans le tissu
- couteau émoussé
- angle de dégagement trop grand
- coupe trop rapide
Quelle est la cause de l’artéfact Trous dans la section
- attaque du bloc trop agressive
- déshydratation excessive
- air restant dans le tissu lors de l’imprégnation
- imprégnation incomplète du tissu ou circulation
Quel est le rôle du colorant Safran
- fibres de collagène
Prévention du cytoplasme coloré trop pâle dans la coloration HE:
- rincer les coupes après l’agent de bleuissement
- acidifier l’éosine
- s’assurer d’une bonne épaisseur des coupes
- s’assurer que le séjour dans les alcools à basse concentration suivant l’éosine ne soit pas trop long. Plus il y a d’eau dans ces solutions d’alcool, plus il y aura d’éosine d’enlevé
Qu’est ce qu’une laque d’hématéine:
Un complexe hématéine-mordant
Quel est le prinipe du chromophore azo
Il peut être azoïque, diazoïque ou triazoïque
Exemple d’une coloration directe:
Éosine (-) et tissu (+)
Couleur de cartilage (HE)
Mauve
Quel type de lame atteint la température ambiante plus rapidement:
Les lames jetables
Qu’est ce qu’une laque:
Le complexe colorant-mordant
Quels sont les mécanismes d’action de la coloration nucléaire:
- coloration par un colorant cationique (+):
- peu probable
- le coloration cationique se lie au groupement phosphate de ADN
- coloration par un complexe colorant-mordant:
- lien négatif-négatif fait par un chélate anionique
- moins probable
- car si on retire l’ADN par extraction, le noyau prend quand même la coloration
- laque hématéine qui se lie aux histones
- la plus probable
- lien négatif-négatif fait par un chélate anionique
Prévention de noyaux colorés trop foncés dans la coloration HE:
- s’assure de la bonne épaisseur de la section
- s’assurer du bon temps dans l’hématoxyline
- s’assurer du bon temps de différenciation
Quels sont les besoins additionnels du colorant Orcéine
-besoin être oxydé
Coloration par absorption:
Le colorant est absorbé dans le tissu par formation de liens chimiques (la plupart des colorants vont être absorbés).
Exemple d’un colorant à liaison chimique:
Éosine
Couleur des globules rouges (HE)
rose vif à orangé
Quelles sont les désavantages de l’adhésif Lames chargées
- cout élevé
- date d’expiration
quel est le but de la microtomie:
Effectuer des coupes minces de tissus.
Comment éviter l’artéfact Il ne se forme pas de ruban
- déplacer ou changer le couteau
- ré-inclure dans une paraffine ayant un point de fusion plus bas
- ajuster l’angle de dégagement
- ajuster la température de la pièce
- nettoyer la lame avec un peu de xylène ou autre produit
Quelles sont les désavantages de l’adhésif Gélatine (gélatine de chrome)
- forme une pellicule insoluble dans l’eau et sur le tissu
- attention à contamination du bain par les bactéries
Quelle est la grosse différence entre Harris et Mayer:
Il n’y a pas utilisation d’alcool dans Mayer.
Quelle est la cause de l’artéfact Les sections alternent entre épaisses et minces, course à vide (section sautée)
- angle de dégagement trop petit
- défaut dans le mécanisme du microtome
Quel est le rôle du colorant Orcéine
- fibres élastiques
- chromosomes
Qu’est ce qui détermine la couleur qui sera vue:
- la position de la résonance dans la molécule
- présence de groupes modificateurs
Quelle est la cause de l’artéfact Les sections sont excessivement comprimées
- couteau émoussé
- couteau avec débris de paraffine
- paraffine derrière le couteau ou le porte-couteau
- angle de dégagement trop faible
- coupe trop rapide
- température ambiante trop élevée
Quelle est la couleur de la laque de l’Hématoxyline aluminique
Rouge en milieu acide
Bleu en milieu alcalin
Quelle est la description de l’artéfact Contamination
Vue à la microscopie
Quelle est l’angle d’inclinaison (angle d’attaque)
15o
Correction du cytoplasme coloré trop pâle:
Décolorer les coupes et recolorer en y apportant les corrections
Manque de détails nucléaires:
Lorsqu’il est pratiquement impossible d’observer les différents motifs de la chromatine dans le noyau, la coloration nucléaire est souvent surnommée brouillés ou boueuse.
Précaution lors de l’étalement: quantité d’adhésif:
Réduire au minimum quantité et concentration
adhésif = solution protéique donc peuvent retenir les colorants