Examen 2 (Histotechnologie) Flashcards
1
Q
A
2
Q
Quel est le prinipe des colorants amphotères:
A
Son comportement dépend du pH de la solution
3
Q
Quels sont les artéfacts d’enrobage:
A
- Tissu d’apparence molle
- Orientation incorrecte
- Contamination
- Tissus pas enrobés au même niveau
- Morceaux de tissu manquants
4
Q
Comment éviter l’artéfact Présence d’ondulations sur la coupe (washboarding)
A
- serrer le bloc ou la lame
- changer les pièces usées
- rentrer la manche du microtome
- réduire l’angle de dégagement
5
Q
Présence d’ondulations sur la coupe (washboarding) est quel type d’artéfact:
A
Microtomie
6
Q
Différents types de coupes:
A
- la coupe au hasard: la surface doit être 100%
- les niveaux: deux ou trois dépendant du pathologiste
- la coupe sérié: les sections doivent être placées en séquence et numéroter dans l’ordre de la coupe avec aucune section jetée
7
Q
Comment le pH de la solution influence les propriétés des colorants basiques:
A
- si la solution est trop acide, seulement les structures riches en hydrates de carbone sulfatés seront colorés
- si elle est neutre ou alcaline, tout sera coloré
8
Q
Est-ce que le colorant Safran est basique ou acide
A
Acide
9
Q
Qu’est ce qui cause la déparaffinage non complété:
A
eau ayant demeuré dans le tissu
séchage incomplet des coupes
séjour trop court dans les bains de xylène lors du déparaffinage
10
Q
Présence de stries est quel type d’artéfact:
A
Microtomie
11
Q
Les sections sont excessivement comprimées est quel type d’artéfact:
A
Microtomie
12
Q
Couleur de dépots de calcium (HE)
A
Bleu foncé
13
Q
Comment corriger le déparaffinage non complété:
A
Si un mauvais séchage des coupes est en cause, traiter les sections avec alcool absolu pour retirer l’eau et traiter de nouveau au xylène pour retirer la paraffine
Si les coupes ont été colorées, décolorer, traiter et recolorer
14
Q
Quels sont les auxochromes basiques:
A
Voir FC
15
Q
Quelle est la composition du noyau:
A
- groupements phsophate de ADN
- Histones
16
Q
Quelle est la couleur de la laque de l’Hématoxyline ferrique
A
Noir
17
Q
Est-ce que l’angle du biseau est controlable ou non
A
Non
18
Q
Synonyme d’enrobage:
A
Inclusion
19
Q
Quel est le prinipe du chromophore quinoide:
A
Les variations de couleur sont causées par d’autres groupes (chromophores) qui sont attachés à l’anneau quinone
20
Q
Deux méthodes d’étalement:
A
- sur eau chaude
- sur lame
21
Q
Quelle est la description de l’artéfact Tissu d’apparence molle
A
Le centre de la pièce a une texture molle car elle a été mal circulée
22
Q
Comment éviter l’artéfact Les sections alternent entre épaisses et minces, course à vide (section sautée)
A
- augmenter légèrement l’angle de dégagement
- vérifier le fonctionnement du mécanisme
23
Q
Correction de la colroation HE irrégulière:
A
Ne peut pas être corrigé
24
Q
Quelle est le différentiateur de l’Hématoxyline ferrique
A
Weigert : alcool-acide
Verhoeff : le mordant
25
Quelle est la cause de l'artéfact Contamination
Transfert de fragments de tissu d’un spécimen à l’autre
26
Quelle est la couleur du noyau de l'Hématoxyline aluminique
Bleu
27
Contamination est quel type d'artéfact:
Enrobage
28
Comment éviter l'artéfact Les sections s’envolent et se collent aux objets ou aux autres parties du microtome
- humidifier l’air en soufflant sur le bloc et sur le couteau lors de la coupe
- faire bouillir de l’eau près du microtome
- mise à terre du microtome
- ioniser l’air
29
Quelle est la description de l'angle de dégagement (en relation avec le bloc)
Formé par la facette inférieure du biseau et la surface du bloc à couper
30
Quel est le rôle du colorant Carmin
1. glycogène (pas besoin de mordant)
2. mucines
31
Quelle est l'angle de dégagement (en relation avec le bloc)
3-8o
32
Quelle est la formule chimique pour le groupe azo:
-N=N-
33
Prévention d'un précipité bleu-noir sur les sections en utilisant la coloration HE:
FIltrer l'hématoxyline tous les jours avant l'utilisation.
34
Différenciation par des acides:
Il y a bris du lien entre le mordant et le tissu
35
Les sections alternent entre épaisses et minces, course à vide (section sautée) est quel type d'artéfact:
Microtomie
36
Quelle est la description de l'artéfact Présence d'ondulations sur la coupe (washboarding)
Visible sur le bain d’étalement
37
Précipités bleu-noir sur les sections avec la coloration HE est causé par:
1. si la mince couche métallique qui se développe sur la plupart des hématoxyline a été ramassée par la lame lors de la coloration
2. prévention: filtrant l'hématoxyline avant l'utiliser
38
Coloration HE irrégulière:
1. présence d'eau ou de liquide fixateur dans la paraffine lors de l'imprégnation
2. contamination des réactifs dans un appareil à circulation de type fermée causé par un mauvais fonctionnement de l'équipement
3. contamination des réactifs causé par 'absorption d'eau présente dans l'atmosphère par les alcools servant à la déshydratation dans le cas d'un appareil à circulation de type ouvert.
4. si le niveau des solutions ne partient pas à recouvrir toute la surface de la lame
39
Comment éviter l'artéfact Tissus pas enrobés au même niveau
- appliquer pression fermement et uniformément sur le tissu
- garder la paraffine fondue dans le fond du moule
- travailler rapidement quand plusieurs fragments et refroidir juste assez pour faire adhérer tous les morceaux au fond du moule
40
Les lames chargées sont surtout utilisés pour:
1. immuno (peut pas utiliser d'adhésif)
2. Argent (basique)
3. Trichromique (acide)
41
Qu'est ce qu'un colorant:
Produit susceptible de teindre un élément ou une substance d'une manière durable.
42
Quel est le prinipe des colorants leuco:
Colorant dont on a détruit le chromophore par réduction (remplacement du chromophore par un atome d’hydrogène)
43
Adsorption:
Attraction des particules à la surface. Point de rencontre colorant-tissu, ce sont des liens chimiques de surface très fragile.
44
Déplacement du bloc ou tissu pour le Microtome à balancier
La cassette est mobile
45
Différents types de matériaux des lames:
* métal: lames jetables
* verre: coupe plastique et résine époxy
* diamnet: microscopie électronique
46
Comment faire le choix du type de paraffine utilisé:
Il doit être le même type que le média utilisé lors de l'imprégnation.
47
Comment éviter l'artéfact Le ruban de sections est incurvé
1. aligner les bords horizontaux du bloc pour qu’ils soient parallèles
2. s’assurer que le bas du bloc est parallèle avec le bord tranchant du couteau
3. enlever le surplus de paraffine
4. s’assurer que le bloc est uniformément refroidit
5. déplacer ou remplacer le couteau
48
Hématoxyline doit être oxydé par quoi pour devenir de l'hématéine:
Oxyde mercurique ou iodate de sodium
49
Méthodes de séchage:
1. étuve èa formaldéhyde
2. ventilateur a air chaud
3. plaque chauffante
4. séchage a température ambiante
50
Différentes formes des couteaux:
* Plano concave: pour tissu inclus dans celluoidine car elle aide à garder l'humidité
* biconcave: rarement utilisé et remplacé par le biplan
* biplan en coin: lames jetables, pour coupe à la paraffine, carbowax et congélation
51
Problème de coupe avec un tissu hématopoiétique (foie, rate):
Bloc a la température de la pièece et ensuite faire la coupe (en théorie)
Si le bloc est trop froid, le tissu se défait en petits fragments
52
Quels sont les épaisseurs de coupes du microtome à coupe ultramince:
500-1200 A
53
Quels sont les caractéristiques d'un paraffine avec un point de fusion élevé:
* meilleur support pour tissus durs
* plus facile à obtenir des sections minces
* fabrifcation de rubans plus difficile
54
Quel est l'utilité du Microtome à balancier
- peu utilisé
- petites pièces
55
Transformation de l'hématoxyline:
Hématoxyline -- oxydation --\> hématéine -- suroxydation --¨\> oxyhématéine
56
Quelle est la description de l'artéfact Orientation incorrecte
À la microscopie (parfois à la microtomie), structures essentielles difficiles ou impossible à visualiser
57
Hématoxyline:
* hématoxyline: produit brute
* hématéine: produit fonctionnel
* hématéine + mordant: colorant
58
Quels sont les raisons pourquoi les coupes se décollent de la lame lors de la coloration:
1. lames sales, grasses ou huileuses
2. bulles d'air emprisonnées sous le tissu
3. solutions colorantes alcaline (colorations argentiques) favorise le décollement
4. trop de kératine sur le tissu
5. tissu décalcifier est plus susceptible de se décoller
6. tissu est riche en sang ou en caillots
7. technique de coloration employée nécessite de nombreux lavages et incubations (ex: trichrome de mason)
8. circulation n'a pas été réalisée correctement
9. coupe trop épaisse
59
Est-ce que l'angle de structure est controlable ou non
Non
60
Quel est le role de l'accuenteur et accélérateur:
1. augmente le pouvoir du colorant
2. augmente la sélectivité de certains colorants par structure
61
Quel angle affecte la compression du couteau:
Angle de dégagement
62
Quel est l'utilité du Microtome-cryostat (cryotome)
- tissu congelé
- STAT, enzymes, fluorescence
- impossible de faire des rubans
63
Quel est le problème avec l'adsorption:
Le tissu résiste mal à la différenciation.
64
Quel est le but de l'enrobage:
1. fournir un support externe pendant et après la coupe au microtome
2. meilleure conservation du tissu à long terme
3. production de rubans lors de la coupe au microtome
65
le bout coupant des lames jetables sont recouverts de quoi:
Une couche de chrome ou de platine pour augmenter leur résistance et durabilité.
66
Comment longtemps prend le séchage au ventilateur a air chaud:
5-10 minutes
67
Quels sont les facteurs qui influencent la microtomie :
1. Position du bloc : les côtés du bloc doivent être parfaitement parallèles au tranchant du couteau
2. Vitesse de coupe : doit faire un mouvement lent et continu, si trop vite, les coupes seront comprimées
3. Température : température ambiante ne doit pas être plus que 22oC sinon, électricité statique
4. Rabotage : arrêter quand 100% du tissu exposé
5. Angles de dégagement et d’inclinaison
6. Confection de rubans : le frottement du couteau produit de la chaleur et fait fondre la paraffine qui forme le ruban
68
Différents agents de bleuissements:
1. eau courante froid ou tiède (avec un pH alcalin)
2. eau ammoniacale 0.1%
3. carbonate de lithium aqueux 1%
4. bicarbonate de sodium ou de potassium aqueux
5. eau de Scott
69
Effets d'un mauvais enrobage:
1. orientation du spécimen: doit refondre le bloc et ré-inclure
2. refroidissement du bloc trop lent:cristallisation irrégulière
3. refroidissement du bloc trop rapide:bloc à surface concave
4. tissu trop froid: formation d'un halo autour de la piece ou le tissu se détache de la paraffine pendant la coupe
5. épaisseur de paraffine: tissue découvre pendant le refroidissement
6. atttend trop longtemps avant de mettre le tissu dans le bloc: rabotage inutile
70
Quelle est la cause de l'artéfact Morceaux de tissu manquants
- manque d’attention
- erreur à la salle de coupe
71
Quelle est la cause de l'artéfact Présence de stries
1. couteau encoché à un endroit
2. particules dures dans le tissu ou dans la paraffine
72
Quel est l'oxydant utilisé pour l'Hématoxyline ferrique
L’oxydant est aussi le mordant
73
Éosine incorrectement différencié est causé par:
1. la fixation n'est pas complète
2. la déshydratation ou l'éclaircissement n'est pas complète
3. les sections venant d'être colorées à l'éosine demeurent dans des alcools ayant les plus faibles dilutions pour une différenciation approprié
4. le pH de l'éosine n'est pas adéquat
74
Quels colorants nucléaires cationqiues (+) sont adéquats lorsque utilisés seul ou en tant que contrecolorants dans d'autres méthodes:
1. bleu de toluidine O
2. rouge neutre
3. vert de méthyle
4. safranine O
75
Quelle est la couleur du colorant Safran
Jaune
76
Quelle est la couleur du noyau de l'Hématoxyline ferrique
Noir
77
Quelle est la couleur du colorant Carmin
Rouge
78
Quels sont les caractérisques d'un point de fusion bas:
* suppor pour tissus durs moins bon
* sections micnes plus difficiles à obtenir
* ruban plus facile à fabriquer
79
Quelle est l'origine du colorant Orcéine
Extrait de lichens
80
Quelle est l'angle du biseau
27-32o mais dépend du type de couteau
81
Quel est le prinipe des colorants fluorescents:
Possèdent des fluochromes qui absorbent les rayons UV. Une fois unis à une structure tissulaire, ils émettent une lumière visible
82
Un exemple d'une coloration par absorption:
Coloration des lipides
83
Quelle est la description de l'artéfact Morceaux de tissu manquants
Absence de morceaux, fragments
84
Auxochromes acides en ordre de force croissante:
1. phénolique
2. carboxylique
3. sulphonic
85
Le pH de la plupart des colorants nucléaires cationiques se situe à:
3-5.5
86
Orientation incorrecte est quel type d'artéfact:
Enrobage
87
Charges des protéines:
* a un pH de 6 et moins, la charge nette des protéines est positive et l'attraction est pour un colorant anionique (-)
* au-dela du point isoélectrique des protéines, la charge nette est négative et l'attraction est pour un colorant cationique (+)
88
Comment fonctionne le séchage a plaque chauffante:
60oC pour 10 minutes
89
Comment éviter l'artéfact Trous dans la section
1. attaquer le bloc plus doucement lors du rabotage ou trempé le bloc brièvement dans l’eau glacée peut parfois corriger ce problème
2. tremper le bloc (tissu exposé) brièvement dans un bain d’eau glacé
3. ré-imprégner le tissu
4. ré-imprégner ou re-circuler si le problème est trop sérieux
90
Quelle est l'origine du colorant Carmin
Provient d’un insecte (cochenille femelle)
91
Prévention d'un manque de détails nucléaires:
1. fixer les tissus complètement
2. déshydratation et éclaircissement complète du tissu avant imprégnation
3. chaleur seulement pour paraffine
4. ne pas laisser le tissu dans la paraffine fondue pour une période de temps prolongée
5. assécher les coupes à une température convenanble (
92
Couleur du cytoplasme, muscle, tissu conjonctif (HE)
DIfférentes tintes de rose
93
Quels sont les colorants nucléaires avec mordants:
1. hématoxyline aluminique
2. hématoxyline ferrique
94
Quels sont les types d'adhésifs:
1. Albumine-glycérol de Mayer
2. Gélatine (gélatine de chrome)
3. Lames chargées Lames chargées
4. Colle Lepage
95
Quelle est la cause de l'artéfact Tissus pas enrobés au même niveau
- fragment de tissu pas assez aplani uniformément dans le fond du moule
- plusieurs fragments enrobés à des niveaux différents
96
Quelle est la cause de l'artéfact Chatter microscopique ou microvibration dans la section
1. tissus trop déshydraté
2. manque d’humidité dans le tissu
3. couteau émoussé
4. angle de dégagement trop grand
5. coupe trop rapide
97
Quelle est la cause de l'artéfact Trous dans la section
1. attaque du bloc trop agressive
2. déshydratation excessive
3. air restant dans le tissu lors de l’imprégnation
4. imprégnation incomplète du tissu ou circulation
98
Quel est le rôle du colorant Safran
1. fibres de collagène
99
Prévention du cytoplasme coloré trop pâle dans la coloration HE:
1. rincer les coupes après l'agent de bleuissement
2. acidifier l'éosine
3. s'assurer d'une bonne épaisseur des coupes
4. s'assurer que le séjour dans les alcools à basse concentration suivant l'éosine ne soit pas trop long. Plus il y a d'eau dans ces solutions d'alcool, plus il y aura d'éosine d'enlevé
100
Qu'est ce qu'une laque d'hématéine:
Un complexe hématéine-mordant
101
Quel est le prinipe du chromophore azo
Il peut être azoïque, diazoïque ou triazoïque
102
Exemple d'une coloration directe:
Éosine (-) et tissu (+)
103
Couleur de cartilage (HE)
Mauve
104
Quel type de lame atteint la température ambiante plus rapidement:
Les lames jetables
105
Qu'est ce qu'une laque:
Le complexe colorant-mordant
106
Quels sont les mécanismes d'action de la coloration nucléaire:
1. coloration par un colorant cationique (+):
* peu probable
* le coloration cationique se lie au groupement phosphate de ADN
2. coloration par un complexe colorant-mordant:
* lien négatif-négatif fait par un chélate anionique
* moins probable
* car si on retire l'ADN par extraction, le noyau prend quand même la coloration
* laque hématéine qui se lie aux histones
* la plus probable
107
Prévention de noyaux colorés trop foncés dans la coloration HE:
1. s'assure de la bonne épaisseur de la section
2. s'assurer du bon temps dans l'hématoxyline
3. s'assurer du bon temps de différenciation
108
Quels sont les besoins additionnels du colorant Orcéine
-besoin être oxydé
109
Coloration par absorption:
Le colorant est absorbé dans le tissu par formation de liens chimiques (la plupart des colorants vont être absorbés).
110
Exemple d'un colorant à liaison chimique:
Éosine
111
Couleur des globules rouges (HE)
rose vif à orangé
112
Quelles sont les désavantages de l'adhésif Lames chargées
- cout élevé
- date d’expiration
113
quel est le but de la microtomie:
Effectuer des coupes minces de tissus.
114
Comment éviter l'artéfact Il ne se forme pas de ruban
1. déplacer ou changer le couteau
2. ré-inclure dans une paraffine ayant un point de fusion plus bas
3. ajuster l’angle de dégagement
4. ajuster la température de la pièce
5. nettoyer la lame avec un peu de xylène ou autre produit
115
Quelles sont les désavantages de l'adhésif Gélatine (gélatine de chrome)
- forme une pellicule insoluble dans l’eau et sur le tissu
- attention à contamination du bain par les bactéries
116
Quelle est la grosse différence entre Harris et Mayer:
Il n'y a pas utilisation d'alcool dans Mayer.
117
Quelle est la cause de l'artéfact Les sections alternent entre épaisses et minces, course à vide (section sautée)
1. angle de dégagement trop petit
2. défaut dans le mécanisme du microtome
118
Quel est le rôle du colorant Orcéine
1. fibres élastiques
2. chromosomes
119
Qu'est ce qui détermine la couleur qui sera vue:
1. la position de la résonance dans la molécule
2. présence de groupes modificateurs
120
Quelle est la cause de l'artéfact Les sections sont excessivement comprimées
1. couteau émoussé
2. couteau avec débris de paraffine
3. paraffine derrière le couteau ou le porte-couteau
4. angle de dégagement trop faible
5. coupe trop rapide
6. température ambiante trop élevée
121
Quelle est la couleur de la laque de l'Hématoxyline aluminique
Rouge en milieu acide
Bleu en milieu alcalin
122
Quelle est la description de l'artéfact Contamination
Vue à la microscopie
123
Quelle est l'angle d’inclinaison (angle d’attaque)
15o
124
Correction du cytoplasme coloré trop pâle:
Décolorer les coupes et recolorer en y apportant les corrections
125
Manque de détails nucléaires:
Lorsqu'il est pratiquement impossible d'observer les différents motifs de la chromatine dans le noyau, la coloration nucléaire est souvent surnommée brouillés ou boueuse.
126
Précaution lors de l'étalement: quantité d'adhésif:
Réduire au minimum quantité et concentration
adhésif = solution protéique donc peuvent retenir les colorants
127
Quel est le prinipe des colorants acides:
Anions colorés avec des auxochromes acides sulfoniques ou carboxyles
128
Quelle est la cause de l'artéfact Il ne se forme pas de ruban
1. couteau émoussé
2. paraffine trop dure
3. angle de dégagement trop grand
4. température de la pièce trop basse
5. débris sur le couteau
129
Prévention de noyau de couleur rouge ou rouge-brun pendant la coloration HE:
1. S'assurer d'un bon bleuissement des noyaux, il est impossible de trop bleuir
2. vérifier l'état d'oxydation de l'hématoxyline
130
Quel est le but de l'enrobage:
* Fournir en support exxterne pendant et après la coupe au microtme
* meilleure conservation du tissu à long terme
* production de rubans lors de la coupe au microtome
131
Différents procédés de coloration:
1. coloration directe
2. coloration indirecte
* mordant
* agent de rétention
3. accentuateur et accélérateur
4. coloration progressive et régressive
5. différenciation par excès de mordant
6. différenciation par des acides
132
Les sections s’envolent et se collent aux objets ou aux autres parties du microtome est quel type d'artéfact:
Microtomie
133
Comment éviter l'artéfact Chatter microscopique ou microvibration dans la section
1. vérifier la cédule de l’appareil à circulation
2. rétablir l’humidité du tissu en exposant la surface du bloc par rabotage et en le mettant sur une surface d’eau glacée ou de la glace
3. changer le couteau
4. réduire l’angle de dégagement
5. réduire la vitesse de coupe
134
Comment éviter l'artéfact Tissu d'apparence molle
- s’assurer que le tissu est coupé mince à la salle de coupe
- s’assurer que le tissu est bien fixé
- s’assurer qu’il n’y a pas de problème mécanique avec le circulateur
135
Les sections adhèrent au bloc lors de la remontée du bloc est quel type d'artéfact:
Microtomie
136
Quel est le pH de l'éosine:
Il est entièrement chargée à un pH de 7 mais étant donné que le PI des protéines est de 6, la coloration doit se faire à un pH plus bas que 6 afin de développer une charge nette positive sur les protéines.
137
Quelle est la cause de l'artéfact Les sections s’enroulent au lieu de rester à plat sur le couteau
1. couteau émoussé
2. angle de dégagement trop grand
3. épaisseur des sections trop grande pour le type de paraffine
138
Coloration progressive:
Quand on arrête la coloration à un temps voulue (quand la structure a la teinte voulue)
139
Qu'est ce qui cause le manque de détails nucléaires:
1. fixation incomplète
2. chaleur excessive lors de la circulation des tissus ou lors du séchage des coupes
140
Paraffine avec le point de fusion bas:
* support pour tissus durs moins bon
* sections minces plus difficiles à obtenir
* ruban plus facile à fabriquer
141
Quel est le désavantage de l'Hématoxyline aluminique
1. résiste mal à l’action de certains colorants acides ou à des colorations qui sont longues
2. la couleur pâlit avec le temps
142
Noyau de couleur rouge ou rouge-brun est causé par:
La solution d'hématoxyline est sur le point de ne plus être bonne ou l'étape de bleuissement des noyaux n'a pas été effectuée correctement.
143
Quels sont les besoins additionnels du colorant Hématoxyline
- doit être oxydé (hématéine)
- besoin d’un mordant
144
Quelle est la description de l'angle du biseau
Formé par les deux facettes tranchantes du biseau
145
Tissu d'apparence molle est quel type d'artéfact:
Enrobage
146
Résonance:
Altération rapide et continue des liaisons doubles et simples dans la molécule.
147
Quelle température doit être le bain d'eau chaude pour l'étalement:
46-48oC
148
Quels sont les principaux mordants de l'hématéine:
1. sel d'aluminium: rougeatre en milieu acide et bleu en milieu alcalin
2. sel de fer: laque est de marine à noir
3. sel de tungstène
4. sel de chrome
5. sel de molybdène
149
Comment éviter l'artéfact Orientation incorrecte
- marquer la surface à être enrobée vers le haut
- faire une légère marque (incision) sur la surface à être enrobée vers le haut
- instruction d’enrobage sur cassette ou feuille de travaille
- ouvrir les spécimens gastro-intestinaux pour qu’ils fixent ouverts (ils ne rouleront pas lors de l’enrobage)
150
Précaution lors de l'étalement: temps d'exposition avec l'eau du bain:
Limiter au minimum pour prévenir le gonflement du tissu (surtout collagène)
151
Principe de la liaison chimique:
Attirance de charges inverses.
152
Comment éviter l'artéfact Les sections adhèrent au bloc lors de la remontée du bloc
1. déplacer ou changer le couteau
2. augmenter l’angle de dégagement
3. ajuster la température de la pièce
4. utiliser une paraffine plus dure
153
Quel est l'avantage de l'Hématoxyline aluminique
Temps de coloration plus court
154
Quels sont les épaisseurs de tissus coupés:
* routine: 4um
* argent: 2um
* rouge congo: 6um
155
Comment fait on pour éviter une contamination dans les systèmes ouverts.
Utilier du toluène au lieu du xylène dans les zones où le taux d'humidité est élevé car le toluène est plus tolérant face à l'eau par rapport au xylène.
156
Cytoplasme coloré trop foncé est causé par:
Surtout avec le mélange éosine-phloxine
157
Quelle est le mode d'utilisation de l'Hématoxyline aluminique
Harris : régressif
Mayer : progressif
158
Quelle est l'angle de structure
15o mais dépend du type de couteau
159
Quels sont les auxochromes acides (négatifs):
Voir FC
160
Couleur de mucine:
peu ou pas coloré
161
Quelle est la vitesse de coupe acceptable:
1 révolution par seconde
162
Éosine est directe ou indirecte:
Directe car ne requiert pas de mordant, mais nécessite un accentuateur.
163
Si l'angle de dégagement est trop grand:
* grattage du bloc
* pas de ruban
* coupes s'enrouglent
* coupes se déchirent
* chattering
* ondulations
164
Problème de coupe avec de la kératine (ongles, peau cornées):
Ramolir avant la circulation avec du Neet, raboter et immerger dans l'eau
165
Déplacement du bloc ou tissu pour le Microtome rotatif
La cassette est mobile
166
Précaution lors de l'étalement: composition de l'adhésif:
Solutions protéqiues:
* se contaminent facilement (Gram)
* pas bon pour histochimie (PAS)
167
Quelle température doit être la lamje pour la méthode sur lame (étalement):
48oC
168
Quelle est l'origine du colorant Safran
Extrait d’une plante (crocus sativus)
169
Comment fonctionne le séchage a température ambiante:
Toute la nuit
170
Quel est un exemple de colorant basique:
Fuschine basique
171
Paraffine avec point de fusion élevé:
* meilleur support pour les tissus durs
* plus facile à obtenir des sections minces
* fabrication de ruban plus difficile
172
Déplacement du bloc ou tissu pour le Microtome-cryostat (cryotome)
Même principe que rotatif mais placé dans une enceinte à -20oC
173
Problème de coupe avec caillots, col utérin ou thyroide:
Souvent durcit
Raboter et tremper le bloc dans l'eau pour quelques heures
utiliser du chloroforme pour éclaircir
174
Quels sont les sites courants de liaisons de colorants non anioniques (non nucléaires):
1. arginine
2. histidine
3. lysine
175
Différenciation par excès de mordant:
On ajoute du mordant en excès donc il y a un effet de compétition.
176
Quelle est la cause de l'artéfact La surface du bloc n’est pas sectionnée également
Le porte-bloc ou le bloc lui-même n’est pas ajusté parallèlement au couteau, un coté du bloc se retrouve épuisé lorsque l’on essaie d’avoir accès à tout le tissu
177
Il ne se forme pas de ruban est quel type d'artéfact:
Microtomie
178
Quelle est la formule chimique du groupe qunoide
O= =O
179
Prévention des noyaux colorés trop pâle dans la coloration HE:
1. laisser les coupes suffisamment longtemps dans l'hématoxyline
2. attention à la suroxydation ou l'expiration de l'hématoxyline
3. respecter le temps de différenciation des noyaux
180
Quelle est la description de l'ahésif Colle Lepage
4-5 gouttes quand le bain est chaud
181
Morceaux de tissu manquants est quel type d'artéfact:
Enrobage
182
Quel sont des exemples de chromophore nitré:
Acide picrique
183
Noyaux colorés trop foncé dans la coloration HE est causé par:
1. séjour trop long dans la solution d'hématoxyline
2. sections trop épaisses
3. différenciation de l'hématoxyline insuffisante
184
Quels sont les mécaniesmes de la coloration:
1. physiques
* absorption
* adsoprtion (effet d'interface)
* porosité tissulaire
2. chimiques
* liaison chimique
* liaisons hydrogènes
* liaison covalente
* Van der Waals
185
L'éosine donne de meilleur résultat à un pH de:
4.6-5
186
Qu'est ce qui se passe lorsque le pH de l'éosine est abaissé sous 4:
La quantité de colorant chargé sera grandement diminuée car l'éosine sera transformé en acide libre. Cette solution peut s'attacher de facon non spécifique aux sections et donne une apparence boueuse.
187
Est-ce que l'angle d’inclinaison (angle d’attaque) est controlable ou non
Oui
188
Chatter microscopique ou microvibration dans la section est quel type d'artéfact:
Microtomie
189
Déplacement du bloc ou tissu pour le Microtome à glissière
Le couteau est mobile et se déplace horizontalement
190
Une molécule colorante possède deux parties:
1. chromogène: partie colorée de la molécule (responsable de l'absorption de lumière visible)
2. auxochrome: partie de la molécule qui s'attache au substrat
191
Correction de noyaux colorés trop foncé dans la coloration HE:
Si section pas trop épaisse, décolorer et recolorer en s'assurer ou ajustant les temps dans l'hématoxyline et de différenciation.
192
Synonyme du microtome rotatif:
Microtome de Minot
193
Agent de rétention:
Le colorant a déja un peu d'affinité pour le tissu et l'agent permet de retenir un colorant déja en place. Utilisé surtout pour empêcher la décoloration.
194
Problème de coupe avec des lipides dans le tissu:
Donne des blocs mous, bien refroidir avant de le couper.
195
Rôle de l'éosine:
Permet de faire la différence entre le cytoplasme, les fibres tissu conjonctif et les globules rouges en les colorant en différentes tintes de rose.
196
Tissus pas enrobés au même niveau est quel type d'artéfact:
Enrobage
197
Quel est le prinipe des colorants neutres:
Un mélange d’un colorant basique et d’un colorant acide
198
Problème de coupe avec une imprégnation insuffisante:
Blocs humides qui s'émiettent
Odeur de xylèene
199
Quel est l'utilité du Microtome à coupe ultramince
- microscopie électronique
- très petites pièces
200
Quels sont 3 facons d'utiliser un mordant:
1. dans un mélange fixateur
2. just avant la coloration
3. mélangé avec la coloration
201
Quelle est la description de l'artéfact Tissus pas enrobés au même niveau
On n’atteint pas toute la surface du tissu en même temps au microtome
202
L'éosine est acide ou basique:
Acide
203
Solutions de HE:
1. hématoxyline
2. eau
3. alcool acide 1%
4. eau
5. carbonate de lithium
6. eau
7. alcool 95%
8. éosine
9. alcool 95%
10. alcool 100%
11. alcool 100%
12. xylène
13. xylène
204
Comment se débarasser de l'artéfact Tissu d'apparence molle
Si fixation incomplète
1. fondre paraffine
2. mettre tissu dans circulateur
3. démarrer procédure de nettoyage du circulateur
4. passer manuellement dans alcool 95 et 70%
5. mettre dans formol
6. circuler avec prochaine batch
Si vu à la station d’enrobage
1. couper fragment plus mince, remettre dans la cassette et traiter
2. xylène pour enlever la paraffine
3. tétrahydrofurane (déshydrate/éclaircit)
4. paraffine (imprégnation)
5. enrober de nouveau
205
Un auxochrome est une chaine attaché au chromogène qui peut être:
* un groupement ionisant
* un groupement qui réagit pour former un lien covalent avec un substrat
* un arrangement d'atomes qui forment des liens avec un ion métallique (mordant)
206
Prévention d'une déparaffinage non complété:
1. bien assécher les sections avant le déparaffinage
2. laisser suffisamment longtemps dans le xylène lors du déparaffinage
3. éviter l'utilisation de xylène contaminé. changer la solution si nécessaire
207
De quoi est composé un colorant:
Sels complexes démontrant des tendances acides et/ou basiques.
208
Est-ce que le colorant Hématoxyline est basique ou acide
Acide
209
Quels tissus sont sensibles èa la formation de trous causé par une attaque trop agressive:
Foie, cerveau et nodules lymphatiques
210
Qu'est ce qu'on peut ajouter dans le bain d'eau chaude pour étalement:
1. solution adhésive (pas nécessaire pour H&E)
2. éthanol ou acétone pour diminuer la tension de surface et augmenter l'expansion du tissu
211
Les lames utilisés en cryostat sont recouverts de quoi:
Telfon pour diminuer la friction
212
Coloration indirecte:
Le colorant n'a pas d'affinité pour le tissue donc un mordant permet une combinaison chimique entre ces structures.
213
Est-ce que l'angle de dégagement (en relation avec le bloc) est controlable ou non
Oui
214
Un adhésif est nécessaire quand :
1. Exposition des tissus aux enzymes
2. Incubations longues
3. Acides et alcali (imprégnation métallique)
4. Séchage court (\< 60 minutes)
5. Fixateurs mercuriques
215
Couleur du noyau (HE)
Bleu
216
Quel est le but du séchage:
* évaporer l'eau du bain d'étalement plus rapidement
* éviter la contamination du tissu par microorganisme (si adhésif est de nature protéique)
217
Comment éviter l'artéfact Présence de stries
1. déplacer ou changer le couteau
2. décalcifier pour retirer le calcium du tissu
- enlever les autres particules avec un objet très pointu
- ré-inclure dans une paraffine filtrée
- effectuer une rotation du bloc dans le porte-objet
218
Comment éviter l'artéfact Contamination
- nettoyer les pinces entre chaque spécimen
- ouvrir une seule cassette à la fois
219
Quelle est la cause de l'artéfact Présence d'ondulations sur la coupe (washboarding)
1. couteau ou bloc pas serré
2. pièces du microtome trop usées
3. manche du microtome sortie à son maximum
4. angle de dégagement trop grand
220
Qu'est ce qui est la forme da plus simple d'un composé aromatique:
Le benzène
221
Quel est le but de l'étalement:
* aplanir le tissu avant de le mettre sur la lame
* étirer le tissu: la coupe au microtome cuase une compression sur le tissu
222
Quels sont les avantages d'utiliser la plaque chauffante pour sécher les lames:
Prévient le développement de bactéreis
223
Liaison covalente:
Partage d'électrons entre les sites réactifs tissulaires et auxochromes.
224
Quel est le prinipe du chromophore nitré
Caractère acide
225
Prévention d'une coloration HE irrégulière:
Utiliser du toluène au lieu du xylène
226
Quelle est la description de l'angle d’inclinaison (angle d’attaque)
Formé par la facette inférieure du couteau et la surface du bloc
227
Hématoxyline est régressive ou progressive:
Régressive
228
`Correction de l'éosine incorrectement différencié:
Décolorer et recolorer si possible
229
Quelle est la couleur du colorant Orcéine
Incolore mais devient bleu-violacé lorsque oxydé
230
Synonymes de liens chimiques:
1. électrostatique
2. liens sels
231
Est-ce que le colorant Carmin est basique ou acide
Amphotère
232
Quel est l'utilité du Microtome rotatif
- le plus populaire
- très bon pour coupes sériés
- pas bon pour la coupe de gros blocs
233
Quels sont les types de microtomes:
1. Microtome à glissière
2. Microtome rotatif
3. Microtome à balancier
4. Microtome à coupe ultramince
5. Microtome-cryostat (cryotome)
234
De quoi est composée l'eau de Scott:
1. bicarbonate de sodium ou potassium
2. sulfate de magnésium
235
Il y a trois types d'anions tissulaires (noyau):
1. groupements phosphates (acides nucléiques): -PO4 → -PO3-
2. groupements esters (sulfatés): -SO4 → -SO3-
3. groupements carboxyles (glucides): -COOH → -COO-
Coloration de tous les groupements à pH 4-5
236
Quelle est la cause de l'artéfact Les sections s’envolent et se collent aux objets ou aux autres parties du microtome
Électricité statique
237
Cytoplasme coloré trop pâle dans la coloration HE est causé par:
1. augmentation de pH de l'éosine au-dessus de 5 (causé par une contamination de l'éosine par l'agent de bleuissement ou par une éosine qui n'a pas été acidifié
2. sections trop minces
3. séjour dans les agents déshydratants ait été trop long (plus il y a d'eau, plus il y aura d'éosine d'enlevé)
238
Prévention de l'éosine incorrectement différencié:
1. s'assurer que la fixation est adéquate et complète
2. s'assurer que la déshydratation et éclaircissement sont adéquats lors de la circulation
3. les sections venant d'être colorées à l'éosine demeurent dans des alcools ayant les plus faibles dilutions pour une différenciation approprié. Un séjour adéquat dans l'alcool 70% donnera la meilleure différenciation de l'éosine.
4. le pH de l'éosine est adéquat
239
Est-ce qu'un lien hydrogène est solide ou fragile:
Fragile
240
Quel est le rôle de la résonance:
Absorption de certaines longueurs d'ondes d'où l'apparition de couleurs.
241
Le ruban de sections est incurvé est quel type d'artéfact:
Microtomie
242
Les sections s’enroulent au lieu de rester à plat sur le couteau est quel type d'artéfact:
Microtomie
243
Si l'angle de dégagemetn est trop petit:
* coupes comprimés
* coupes plissés
* coupes décollent du rasoir et adhèrent au bloc
* coupes d'épaisseur inégales
244
Quel est le colorant ou contrecolorant le plus utilisé:
Éosine
245
Quelles sont les désavantages de l'adhésif Albumine-glycérol de Mayer
Laisse des traces sur le pourtour des lames si pas bien dosé
246
Quelle est la cause de l'artéfact Tissu d'apparence molle
- sections trop épaisses à la salle de coupe
- compression entre le dessus et dessous de la cassette, les liquides ne pénètrent pas tout le tissu
247
Liaison Van der Waals:
Attraction électrostatique entre électrons d'une atome et le noyau de l'atome voisin. Très petites disatances et liens très faibles.
248
Comment faire le coix de paraffine utilisé:
1. même type de média utilisé lors de l'imprégnation
2. bon point de fusion
3. paraffine doit être refroidie rapidement pour une cristallisation uniforme
249
Quelle température doit être le bain pour des tissus délicats:
37oC
250
Quels sont les facons d'oxydation de l'hématoxyline:
1. oxydation naturelle
* en solution aqueuse ou alcoolique: réaction lente
* air ou au soleil: réaction plus vite
2. oxydation chimique
* très rapide
* surtout iodate de Na
251
Quels sont les besoins additionnels du colorant Carmin
-besoin d’un mordant
252
Noyaux colorés trop pâle peut être causé par:
1. un séjour trop court dans la solution d'hématoxyline
2. utiliser une solution d'hématoxyline suroxydée ou expirée
3. trop de différenciation de l'hématoxyline
4. si dans une section d'os, décalcification excessive
5. fixateur très acide (correction en augmentant le séjour dans l'hématoxyline ou en utilisant une méthode qui permet d'augmenter la basophilie du tissu)
253
Quelle est la description de l'ahésif Albumine-glycérol de Mayer
Doit être mis sur les lames
254
Exemple d'un agent de rétention:
Verhoeff pour les fibres élastiques
255
Deux facteurs qui entre en jeu pour la porosité tissulaire:
1. taille des molécules colorants
2. densité de la structure
256
Comment éviter l'artéfact Morceaux de tissu manquants
- noter le nombre de fragments sur cassette ou feuille de travaille
- vérifier l’intérieur du couvercle de la cassette avant de le jeter
- attention à l’utilisation du lens paper ou tea bag
257
Problème de coupe avec une fixation incomplète:
Tissus mous et friables pendant la coupe.
258
Coloration régressive:
Surcoloration (tous les éléments) et décolore lentement avec un solvant jusqu'à la teinte voulue.
259
Quelle est la cause de l'artéfact Le ruban de sections est incurvé
1. les bords horizontaux du bloc ne sont pas parallèles
2. bord du bas du bloc non parallèle au bord du couteau
3. surplus de paraffine sur un coté du bloc donc pression inéglae
4. consistance du tissu varie
5. couteau émoussé à un endroit
260
Quelle température doit être le bain pour immunohistochimie:
Pas plus de 40oC et aucun adhésif
261
Quels sont des exemples de chromophore azo:
1. tartrazine
2. rouge de méthyle
3. Berbiche écarlate
4. rouge congo
262
Quel est le désavantage de l'Hématoxyline ferrique
1. plusieurs solutions à préparer
2. temps de coloration plus long avec certaines hématéines ferriques
263
Quels sont des exemples du chromophore quinoide:
1. fuschine basique
2. fuschine acide
3. bleu d’aniline
4. éosine
5. hématéine
264
Quel est l'avantage de l'Hématoxyline ferrique
1. résiste bien à l’action des colorants acides
2. la couleur se conserve bien
3. peuvent servir à la coloration d’autres structures
265
Quel est l'avantage du séchage au ventilateur a air chaud:
La vitesse d'assèechement prévient le développement de bactéries.
266
Quelle est la nomenclature des colorants:
1. Origine du colorant : plus tellement utilisée
* Hématoxyline
* Carmin
* Orcéine
* Safran
2. Selon les méthodes d’applications (et le type d’auxochrome)
* Colorants basiques
* Colorants acides
* Colorants neutres
* Colorants amphotères
* Colorants leuco
* Colorants fluorescents
3. Selon le chromophore
* Groupe quinoïde
* Groupe azo
* Groupe nitré
267
eau et coupes d'aspect brumeux ou laiteux:
présence de xylène sur les coupes et dans le bain d'eau
268
Quelle est la formule chimique pour le groupe nitré:
-NO2
269
Comment fonctione le séchage avec l'étuve a formaldéhyde:
Il y a un bécher de formaldéhyde dans l'étuve et le tissu passe un séjour de 4-18 heures a 37oC
Ou 20-30 minutes a 55oC
270
Hématéine est-elle directe ou indirecte:
Indirecte
271
Problème de coupe avec un éclaircissement inadéquat:
Tissu difficile à couper, dur et cassant
272
L'ordre de la force d'aciditié des groupements acides normalement présents dans le tissu est:
sulphate \> phsophate ¨\> carboxyle \> phénolé (hydroxyle)
273
Quelle est l'origine du colorant Hématoxyline
Extrait du bois d’un arbre (campêche)
274
Coloration directe:
Le colorant a une affinité naturelle pour le tissu.
275
Comment se fait l'attraction du tissu et du colorant:
1. si une structure tissulaire est positive
* elle est basique
* elle aime les colorants acides (-)
* donc est acidophile
* cytoplasme, muscles, collagène, GR
2. si une structure tissulaire est négative
* elle est acide
* elle aime les colorants basiques (+)
* donc elle est basophile
* noyau
276
Déparaffinage non complété:
Taches ou zones blanches peuvent être observées dans les sections de tissus après l'étape de déparaffinage.
277
Quels sont les différents Hématoxyline ferrique
1. Weigert (en solution alcoolique)
2. Verhoeff (en solution alcoolique)
3. Heidenhain
278
Quelle est la cause de l'artéfact Orientation incorrecte
Mauvaise orientation du morceau de tissu
279
Quel est l'oxydant utilisé pour l'Hématoxyline aluminique
Iodate de Na
280
Comment éviter l'artéfact Les sections s’enroulent au lieu de rester à plat sur le couteau
1. déplacer ou changer le couteau
2. réduire l’inclinaison du couteau si l’angle de dégagement est excessif
3. réduire l’épaisseur des sections
281
Quel est l'utilité du Microtome à glissière
- tissus inclus dans la celluoïdine
- coupes à grande surfaces
- pas de coupes sériés
282
Trous dans la section est quel type d'artéfact:
Microtomie
283
Quels sont les synonymes d'enrobage:
inclusion, imprégnation
284
Quelle est la cause de l'artéfact Les sections adhèrent au bloc lors de la remontée du bloc
1. couteau émoussé
2. angle de dégagement trop faible
3. température de la pièce trop élevée
4. paraffine trop molle
285
Ordre de densité des structures:
1. globules rouges (le plus dense)
2. muscle
3. cytoplasme
4. collagène (le moins dense donc le plus poreux)
286
Comment éviter l'artéfact Les sections sont excessivement comprimées
1. déplacer ou changer le couteau
2. nettoyer le couteau
3. nettoyer le tout
4. augmenter l’angle de dégagement
5. plus lentement
6. diminuer la température
287
Quels sont les différents Hématoxyline aluminique
1. Harris (en solution alcoolique)
2. Mayer (en solution aqueuse)
3. Ehrlich
4. Delafield (oxydation naturelle)
288
Avantage du séchage a température ambiante:
Meilleure préservation de la morphologie
289
Quelles sont les avantages de l'adhésif Colle Lepage
- utilisés pour tous les colorants
- pas de faux positifs ni faux négatifs
290
Quelle est la description de l'ahésif Lames chargées
Lames recouvertes d’un enduit qui augmente les charges positives à leur surface
291
Problème de coupe si trop longtemps dans le fixateur intolérant:
Tiissu dur et le couteau vibre
292
Pourquoi les protéines sont dit amphotères:
Parce que les acides aminés contiennent des radicaux basiques chargés positif (NH3) et des radicaux acides chargés négatif (COO-).
293
Quel est le prinipe des colorants basiques:
Cations colorés qui s’attachent aux groupements anioniques du substrat par des forces électrostatiques
294
La coloration des éléments non nucléaires est due:
Aux protéines ou aux groupements chargés des chaines d'acides aminés constituants les protéines.
295
Matériel du couteau dans le microtome à coupe ultramince:
En verre ou en diament
296
Qu'est ce qu'on use comme mordant pour les laques d'hématéines:
Métaux comme aluminium et fer
297
Exemple de lien Van der Waals:
Élastine
298
Exemple d'une coloration indirecte:
Hématoxyline où on ajoute de l'aluminium.
299
La grande majorité des colorants non nucléaires sont positifs ou négatifs:
Chargés négativement (anionique).
300
Problème de coupe avec une déshydratation incomplète:
Tissu mou et coupes friables
Peut reprendre la déshydratation en faisant les étapes de la circulation en sens inverse
301
Quelle est la description de l'angle de structure
Angle structural, de forge, de fabrication de coin, formé par les deux facettes du couteau
302
Précaution lors de l'étalement: température de l'eau
* Si trop augmenté
* trop d'aplanissement de la coupe
* craquelage de la coupe dans l'étuve
* désintégration de la coupe
* Si trop diminué:
* aplanissement incomplet
303
La surface du bloc n’est pas sectionnée également est quel type d'artéfact:
Microtomie
304
Quelle est la grosse différence entre Weigert et Verhoeff:
Verhoeff est utilisé sans HCL donc il se liera aux groupements acides sans distinctions.
305
Qu'est ce qui est utilisé comme mordant:
Souvent des métaux (Al, Fe...)
306
Comment éviter l'artéfact La surface du bloc n’est pas sectionnée également
S’assurer que la surface du bloc est bien parallèle avec le couteau
307
Quelle est le différentiateur de l'Hématoxyline aluminique
Alcool-acide (rompt la liaison laque-tissu)
308
Quelle est le mode d'utilisation de l'Hématoxyline ferrique
Verhoeff : régressif
Weigert : progressif
309
L'aluminium a tendance à se lier avec:
Les fonctions phosphate des acides nucléiques et avec les groupes acides.
310
Quels sont les chromophores fréquents:
Voir FC
311
Quel est un exemple d'un colorant acide:
Éosine
312
Pourquoi on veut faire le bleuissement des noyaux pour l'hématéine alluminique:
Parce que la laque hématéine-mordant est rougeâtre et il n'y a pas assez de contraste avec l'éosine.
313
Quelle est la couleur du colorant Hématoxyline
Il n’est pas un colorant car il n’a pas de chromophore
314
Processing:
1. fixation
2. circulation
* déshydratation (alcool)
* éclaircissement (xylène)
* imprégnation (paraffine)
3. enrobage
4. microtomie
5. étalement et séchage
6. coloration
7. montage: recouvrement avec une lamelle
315
Étapes de déparaffinage:
1. xylène 1
2. xylène 2
3. alcool 100%
4. alcool 95%
5. alcool 70%
6. eau courante
316
Étapes de déshydratation:
1. alcool 95%
2. alcool 100%
3. alcool 100%
4. xylène 1
5. xylène 2
317
Étapes de la méthode HE:
1. hématoxyline de Harris (coloration)
2. eau courante
3. alcool-acide (différentiation)
4. eau courante
5. carbonate de Lithium 1% (bleuissement)
6. eau courante
7. alcool 95% (solvant de l'éosine)
8. éosine (contre coloration)
