Examen 1 (Histotechnologie) Flashcards
Qu’est ce qui se passe lorsqu’on place le tissu direct daanas l’éthanol 100%:
Il y aura rétraction du tissu
Quel est le premier bain de déshydratation faut-il utiliser avec un morceau de cerveau ou tissu embryonaire:
alcool 30%
Commen fait on pour vérifier si’l y a la présence d’eau dans les bains d’alcool 100%:
Devient bleu à la présence d’eau quand on ajoute un peu de sulfaate anhydre.
Le nombre de bains de paraffine et la durée du séjour dépendent de:
- grosseur des pièces
- types de tissus
- agent d’éclaircissement
- milieu d’imprégnation
- quantité de pièces
Quels sont les fixateurs
- formaldéhyde
- paraformaldéhyde
- glutaraldéhyde
- acide acétique
- chlorure mercurique
- tetroxyde d’osmium
- acide picrique
- bichromate de potassium
- éthanol
- méthanol
- sulfate de zinc
Quels sont les mélanges fixateurs:
- B5
- Bouin
- Gendre
- Hollande
- Zenker
- Helly (Zenker-formol)
- Formol-Zinc
Décalcifiants:
- Acide nitrique 5-10%
- acide formique 5-10% tamponné ou avec formol
- acide picrique
- résine échangeuse d’ions
- électrolyse
- agents chélateurs
Agents déshydratants:
- éthanol
- méthanol
- alcool isopropylique
- alcool butylique
- acétone
- dioxyde de diéthylène (Dioxane, solvant universel)
- Butanol tertiaire (solvant universel)
- tétrahydrofurane ou THF (solvant universel)
Agents éclaircissants:
- xylène
- toluène
- benzène
- chloroforme
- huile de cèdre
- Slidebrite
- Limonene
Agents d’imprégnation:
- paraffine
- paraplast
- carbowax
Comment la fixation préserve le tissu:
- prévenir l’autolyse: arrêt de l’activité enzymatique
- prévenir la putréfaction: arrêt de l’activité bactérienne
Quels sont les rôles de la fixation:
- préserve les tissus
- conserve un rapport aapproprié entre les cellules et les éléments extracellulaires
- rendre les constituants cellulaires insolubles grâce à une stabilisation des protéines
- faire ressortir les différences dans les indices de réfraction et dans les contrastes entre les différents éléments tissulaires
- rehausser les colorations
- facilite la manipulation et la sélection des fragments tissulaires
- prépare les tissus au traitement qui suive (résistance)
Comment de fixateur doit-on utiliser:
15-20 fois le volume de la pièce
Quelle est la meilleure méthode de fixation pour préserver les lipides:
La congélation
Quenching:
Congélation brusque avec isopentane et azote liquide
Quels sont les désavantages de la chaleur comme méthode de fixation:
- perte des lipides
- perte importante de l’état initial des éléments tissulaires
Pour qu’une fixation soit efficace, elle doit premièrement:
Stabiliser les protéines paar insolubilisation
Quelle solution est bon pour le postmordancage:
Le Bouin
Ordre de vitesse de pénétration des fixateurs (croissance)
- acide picrique
- tetroxide d’osmium
- alcool éthylique
- alcool méthylique
- chlorure mercurique
- acide acétique
- formaldéhyde
Ordre de vitesse de fixation des fixateurs (croissance):
- formaldéhyde
- acide acétique
- chlorure mercurique
- alcool méthylique
- alcool éthylique
- tetroxide d’osmium
- acide picrique
Quel doit être le pH du fixateur si on doit faire une microscopie électronique:
7.2-7.4 pour une bonne préservation des ultrastructures
Comment on entrepose les tissus si l’immunohistochimie est prévue:
Alcool 70% car il arrête le cross-linking
Quels sont les meilleurs fixateurs pour les acides nucléiques:
Alcool-acétique (augmente la basophilie donc meilleure coloration) et Carnoy
La fixation du noyau résulte:
L’emprisonnement de l’ADN/ARN par les protéines nucléaires fixées ou stabilisées.
Comment les phospholipides peuvent être insolubilisés:
Par fixation de la tête polaire
Quels sont les seuls fixateurs qui peuvent fixer les lipides pour pouvoir les conserver dans les étapes qui suivent:
Tetroxide d’osmium et acide chromique
Fixation des glucides:
- fixation des polysaccharides
- fixation des glycoprotéines et mucosubstances
Comment fonctionne l’attraction des charges:
- structure tissulaire négative
- donc acide
- aime les colorants basiques (+)
- donc basophile
- ex: noyau
- structure tissulaire positive
- donc basique (+)
- aime les colorants acides (-)
- donc acidophile
- ex: cytoplasme, muscles, collagène, GR…
Différents groupes de fixateurs:
- microanatomique: préserve les formes entre les groupes de cellules et les structures tissulaires
- cytologique:préserve certains éléments intracellulaires particuliers
- pour la fixation nucléaire: contient toujours de l’acide acétique glacial car il a une forte affinité avec la chromatine
- pour la fixation cytoplasmique: ne contient jamais d’acide acétique glacial, il y a destruction des mitochondries et de l’appareil de Golgi
- histochimique: préserve les constituants chimiques de la cellule et des tissus
- microscipie électronique: préserve l’ultraastructure de la cellule
Caractéristiques du formaldéhyde:
- gaz incolore
- 37-40% en solution aqueuse saturé donc considéré 100%
- le formol est 10% (formaline)
Le formol 40% est utilisé pour:
Imprégnation à l’argent
Comment fait-on pour empêcher la formation du paraformaldéhyde:
En ajoutant du méthanol au formaldéhyde.
Quel mélange fixateur est le mieux pour le glycogène:
Le Bouin
Pourquoi le formol-zinc n’est plus très utilisé:
Parce qu’il existe maintenant des kits de recouvrement d’antigène
Quel organe s’autolyse rapidement dans le fixateur:
- intestins s’autolyse rapidement
- le pancréas s’autolyse très rapidement
Quel est le meilleur fixateur pour la décalcification:
Formol 10% tamponné (pendant 2-5 jours)
Quelle est la grandeur idéale pour un spécimen de décalcification:
2-3mm d’épaisseur
Quels fixateurs peuvent décalcifier un peu:
Ceux contenant de l’acide
Quel est le fixateur de choix pour la décalcification:
Le Formol, il devient décalcifient à la longue par la formation d’acide formique
Quel est le fixateur de choix pour la décalcification de la moelle osseuse:
Helly
Comment fait-on pour neutraliser l’acide et le lavage du décalcifiant:
- thiosulfate de sodium ou lithium 5% pour 12 heures et lavage à eau courante
- deux bains d’éthanol 50%
Quelle est la formule de décalcification:
Carbonate de calcium dans les os (sous forme de sel) + acide fort du décalcifiant soluble dans leau ————-> Chlorure de calcium + CO2 + H2O
Quel est le décalcifiant de choix:
Acide formique
Quels sont les étapes du processus avec la résine échangeuse d’ions:
- mettre le tissu dans la solution décalcifiante
- ajouter une résine à la solution acide
- la résine captera et retiendra le calcium libéré par le tissu
Comment l’électrrolyse comme décalacifiant fonctionne:
Basée sur la migration du calcium par le courant électrique (retrait du calcium).
Fonctionnement d’un agent chélateur comme décalcifiaant:
EDTA + Ca ——-> EDTA-Calcium (non ionisé et soluble) + 2NA
Quels sont les méthodes pour vérifier laa fin de la décalcification:
- rayons X: zones blanchâtres contient du calcium; il faut éviter les fixateurs avec du chrolure mercurique car il rend les tissus radio-opaques
- torsion du tissu: si il plie, la décalcification est suffisante; risque de briser le tissu
- aiguille: si résistance, paas assez décalcifier
- coupe au bistouri: si résistance, pas assez décalcifié; permet d’éliminer la surface endommagé par une scie à dents
- chimique
Comment se fait le procédé chimique pour vérifier la décalcification:
- mettre le tissu dans une solution fraiche de liquide décalcifiant pour 3 heures minimum
- 5 ml de décalcifiant + 5 ml d’hydroxyde d’ammonium ou de sodium (rend le pH de la solution alcalin car les sels de Ca ne précipitent pas en milieu acide) + 1ml oxalate d’ammonium ou de sodium et laisser reposer 30 minutes
- si le liquide reste clair, la décalcification est terminé
quel est le but de la circulation:
Ensemble des étaapes de préparation du tissu fixé afin de pouvoir l’inclure dans un matériau rigide qui permettra d’en faire des coupes observables au microscope
- obtention de coupes de tissu suffisamment minces
- conservation de l’architecture normale des cellules et de ses éléments
Quel est le but de la déshydratation:
Retrait de l’eau et du fixateur
Pourquoi le premier baain de déshydratation est de l’alcool à 70%:
On veut éviter de stresser le tissu et la précipitation.
Est-ce que le premier bain d’alcool pendant la déshydratation est toujours 70%:
Non, il est recommadé que le premier bain pour les tissus embryonnaires et de cerveau est a 30%
Pourquoi on ajoute parfois du sulfate de Cu anhydre dans le dernier bain de déshydraatation:
- devient bleu à la présence d’eau
- accélération de la déshydratataion
- prolonge lao durée de l’alcool
Quel doit être le volume de l’agent déshydratant:
20-50 fois supérieure à celui de la pièce.
Quel est l’agent déshydraatant le plus courant:
L’éthanol
Quel agent déshydratant peut substituer l’éthanol:
Le méthanol
Quel est le meilleur subtitut à l’éthanol comme déshydratant:
Alcool isoproylique
Quel est le meileur solvant universel:
Tétrahydrofurane
quel est le but de l’éclaircissement:
Retirer l’agent déshydratant pour le remplacer par l’agent éclaircissement.
Qu’est ce qui est un agent d’éclaircissement universel:
Un agent qui est miscible avec l’eau et la paraffine
Quels sont les critères pour choisir un agent éclaircissant:
- retrait rapide de l’agent déshydratant
- faacilité à remplacer l’éclaircissant par la paraaffine fondue
- dommage minimal aux tissus
- inflammabilité
- toxicité
- cout
Si il reste de l’eau danas une solution xylène:
La solution a un aspect laiteux
Quel est le but de l’imprégnation:
Fournir un support interne au tissu
Retrait complet du xylène et remplacement par la paraffine
Quel doit être la température de la paraffine:
2-3o plus élevé que le point de fusion
Que doit-on faire si le tissu dans le bloc est maal déshydraté:
- fondre la paraffine avec xylène ou toluène
- éthanol 100% pour déshydrater complètement
- xylène ou toluène
- paraffine liquide
- imprégnation
La majorité des problèmes rencontrés dans la circulation sont du type:
- tissu sur traité (overprocessed)
- tissu sous traité (underprocessed)
Cheminement d’un spécimen:
- réception
- vérification de l’identificaiton
- préparation du matériel
- vérifier le niveau de fixateur par rapport au tissu
- examen macroscopique
- aspect, texture, couleur, particularités
- coupe de la pièce
- traitement
- circulation
- déshydratation
- éclaircissement
- imprégnation
- enrobage
- microtomie
- étalement et séchage
- coloration
- circulation
- montage: recouvrement avec une lamelle
- examen microscopique: fait par le pathologiste
Méthodes de fixation:
- Méthode chimique : utilisation d’agents chimiques pour fixer les tissus
- Méthodes physiques
- congélation : utilisation d’azote liquide ou autre composé pour fixer les tissus
- Déshydratation : dessiccation pour fixer les tissus
- Chaleur : coagulation des protéines par la chaleur; utilisé en recherche et pour faire des Gram
Propriétés des fixateurs:
- Additif : liaison du fixateur avec les protéines
- Non additif : la molécule perd son lien intime avec l’eau et devient moins réactive
- Coagulant : formation d’un réseau de fibres permettant aux solutions de pénétrer à l’intérieur du tissu
- Non coagulant : formation d’un gel. Il en résulte une mauvaise pénétration du tissu par les solutions et l’infiltration à la paraffine et moins efficace
- Tolérant : le tissu peut demeurer dans le fixateur pendant une longue période de temps sans causer de dommages au tissu
- Non tolérant : le tissu ne peut pas demeurer dans le fixateur plus longtemps que la période recommandé sinon, il y a durcissement excessif du tissu ou rétrécissement du tissu
La fixation secondaire sert à:
augmenter l’affinité du tissu pour le colorant et préserver certaines substances tissulaires particulières.
Postmordancage:
apporte au tissu des groupements chimiques qui ont une affinité pour le colorant et pour le tissu (ponts).
Facteurs qui influencent une bonne fixation :
- Température : une augmentation résulte à une augmentation du taux de fixation mais provoque une augmentation du taux d’autolyse et la diffusion des éléments cellulaires; la température de la pièce est idéale
- Grosseur de la pièce : en lien avec la vitesse de pénétration des solutions de traitement
- Volume de fixateur : doit être 20 fois plus grand que le volume de la pièce
- Temps : le tissu doit être placé dans le fixateur aussitôt après le prélèvement et la durée de fixation doit être assez longue pour permettre au fixateur de bien fixer
- Vitesse de pénétration : affecté par la chaleur et non la concentration du fixateur
- Entreposage du tissu : afin de permettre d’autres prélèvements subséquents si nécessaire
- pH : entre 6-8
- pression osmotique : il y a rétraction du tissu dans une solution hypertonique et gonflement du tissu dans une solution hypotonique
Dilution du formaldéhyde:
formol à 100% (formaldéhyde 37-40%) + 9 parties d’eau = formol 10% (formalédhyde 3.7-4.0%)
Quel est le seul agent fixateur non additif:
Éthanol
Quels sont les fixateurs coagulants:
- chlorure mercurique
- acide picrique
- bicrhomate de potassium (solution acide seulement)
- éthanol
- sulfate de zinc
Quel fixateur est intolérent:
Éthanol
Réaction de formaldéhyde comme fixateur:
- Protéines : réaction avec le groupe NH2
- Hydrates de carbone : ne fixe pas mais préservé par emprisonnement
- Lipides : préservé mais perte par le xylène et paraffine
- Nucléoprotéines : Ø
Réaction de paraformaldéhyde comme fixateur:
- Protéines : réaction avec le groupe NH2
- Hydrates de carbone : ne fixe pas mais préservé par emprisonnement
- Lipides : préservé mais perte par le xylène et paraffine
- Nucléoprotéines : Ø
Réaction de glutaraldéhyde comme fixateur:
- Protéines : réaction avec le groupe NH2
- Hydrates de carbone : ne fixe pas mais préservé par emprisonnement
- Lipides : préservé mais perte par le xylène et paraffine
- Nucléoprotéines : Ø
Réaction d’acide acétique comme fixateur:
- Protéines : Ø
- Hydrates de carbone : Ø
- Lipides : Ø
- Nucléoprotéines : coagule les nucléoprotéines et l’ADN
Réaction de chlorure mercurique comme fixateur:
Protéines : coagule les protéines
Réaction de tetroxyde d’osmium comme fixateur:
- Protéines : ?
- Lipides : fixe les lipides, les rends insolubles
Réaction d’acide picrique comme fixateur:
- Protéines : additif par l’ajout de picrates (mordant, ponts)
- Hydrates de carbone : Ø
- Lipides : Ø
- Nucléoprotéines : précipite et rends insolubles mais pas conseillé pour les noyaux car il hydrolyse l’ADN et l’ARN
Réaction de bichromate de potassium comme fixateur:
Lipides : préserve un peu
Réaction d’éthanol comme fixateur:
- Protéines : coagulant, non additif
- Hydrates de carbone : Ø, insolubilisation
- Lipides : Ø
- Nucléoprotéines : Ø
Réaction de méthanol comme fixateur:
- Protéines : précipite les protéines (dénaturation)
- Nucléoprotéines : bon préservateur de l’ARN
Réaction du sulfate de zinc comme fixateur:
- Protéines : coagulation, additif
- Hydrates de carbone : Ø
- Lipides : ?
- Nucléoprotéines : ?
Quel est l’action de la formaldéhyde comme fixateur:
Pénètre et s’additionne rapidement mais fixe lentement (24 heures)
Quel est l’action du glutaraldéhyde comme fixateur:
Fixe en même temps que la pénétration dans le tissu mais lent donc doit utiliser des petits morceaux
Quel est l’action de l’acide acétique comme fixateur:
- pénètre très rapidement
- gonfle les tissus
Quel est l’action du chlorure mercurique comme fixateur:
Cross linking au niveau du groupe –SH de la cystéine
Quel est l’action de l’acide picrique comme fixateur:
Ajout de mordant
Quel est l’action du bichromate de potassium comme fixateur:
Additif en cause du chrome
Quel est l’action du sulfate de zinc comme fixateur:
Insolubilise les phospholipides et mucopolysaccharides acide (présent dans l’intestin)
Quels sont les avantages du formaldéhyde comme fixateur:
- Moins de rétrécissement des tissus
- Durcit le plus (sauf l’éthanol et l’acétone)
- Peu couteux
- Versatile au niveau des colorations
Quels sont les avantages du glutaraldéhyde comme fixateur:
Microscopie électronique
Quels sont les avantages de l’acide acétique comme fixateur:
- noyaux : améliore la coloration des éléments nucléaires
- bon pour les mucines gastriques
Quels sont les avantages du chlorure mercurique comme fixateur:
- coloration plus belles, rend les tissus réceptifs au colorant
Quels sont les avantages du tetroxyde d’osmium comme fixateur:
- le meilleur pour la fixation des lipides
Quels sont les avantages de l’acide picrique comme fixateur:
- fixateur versatile : fixe, mordance, différencie, colore jaune
- il est le seul fixateur qui peut jouer ces 4 rôles
- avantageux de colorer les petits morceaux pour les repérer facilement avant la coloration
- décalcifie des petits montants
- bonne coloration avec des colorants acides et trichromiques
Quels sont les avantages du bichromate de potassium comme fixateur:
- peu couteux
- conserve bien les phospholipides
Quels sont les avantages de l’éthanol comme fixateur:
- ne laisse pas de traces car il ne s’additionne pas
- augmente la vitesse de pénétration si ajouté à autres fixateurs
Quels sont les avantages du méthanol comme fixateur:
- préservation de l’ARN
Quels sont les avantages du sulfate de zinc comme fixateur:
- bon détails de la membrane nucléaire et cytoplasmique
- étude immunoenzymatique
- bon pour la coloration trichromique
- pourrait remplacer le mercure dans certains mélanges
Quels sont les désavantages du formaldéhyde comme fixateur:
Coloration des éléments non nucléaires
Quels sont les désavantages du glutaraldéhyde comme fixateur:
- Tendance à être intolérant
- Pénètre pas bien
- Instable
Quels sont les désavantages de l’acide acétique comme fixateur:
- gonflement des tissus
- globules rouges et hémosidérine (réserve de fer ferrique) lysés donc la technique de Pearl’s est inutile