Examen 1 (Histotechnologie) Flashcards
1
Q
A
2
Q
Qu’est ce qui se passe lorsqu’on place le tissu direct daanas l’éthanol 100%:
A
Il y aura rétraction du tissu
3
Q
Quel est le premier bain de déshydratation faut-il utiliser avec un morceau de cerveau ou tissu embryonaire:
A
alcool 30%
4
Q
Commen fait on pour vérifier si’l y a la présence d’eau dans les bains d’alcool 100%:
A
Devient bleu à la présence d’eau quand on ajoute un peu de sulfaate anhydre.
5
Q
Le nombre de bains de paraffine et la durée du séjour dépendent de:
A
- grosseur des pièces
- types de tissus
- agent d’éclaircissement
- milieu d’imprégnation
- quantité de pièces
6
Q
Quels sont les fixateurs
A
- formaldéhyde
- paraformaldéhyde
- glutaraldéhyde
- acide acétique
- chlorure mercurique
- tetroxyde d’osmium
- acide picrique
- bichromate de potassium
- éthanol
- méthanol
- sulfate de zinc
7
Q
Quels sont les mélanges fixateurs:
A
- B5
- Bouin
- Gendre
- Hollande
- Zenker
- Helly (Zenker-formol)
- Formol-Zinc
8
Q
Décalcifiants:
A
- Acide nitrique 5-10%
- acide formique 5-10% tamponné ou avec formol
- acide picrique
- résine échangeuse d’ions
- électrolyse
- agents chélateurs
9
Q
Agents déshydratants:
A
- éthanol
- méthanol
- alcool isopropylique
- alcool butylique
- acétone
- dioxyde de diéthylène (Dioxane, solvant universel)
- Butanol tertiaire (solvant universel)
- tétrahydrofurane ou THF (solvant universel)
10
Q
Agents éclaircissants:
A
- xylène
- toluène
- benzène
- chloroforme
- huile de cèdre
- Slidebrite
- Limonene
11
Q
Agents d’imprégnation:
A
- paraffine
- paraplast
- carbowax
12
Q
Comment la fixation préserve le tissu:
A
- prévenir l’autolyse: arrêt de l’activité enzymatique
- prévenir la putréfaction: arrêt de l’activité bactérienne
13
Q
Quels sont les rôles de la fixation:
A
- préserve les tissus
- conserve un rapport aapproprié entre les cellules et les éléments extracellulaires
- rendre les constituants cellulaires insolubles grâce à une stabilisation des protéines
- faire ressortir les différences dans les indices de réfraction et dans les contrastes entre les différents éléments tissulaires
- rehausser les colorations
- facilite la manipulation et la sélection des fragments tissulaires
- prépare les tissus au traitement qui suive (résistance)
14
Q
Comment de fixateur doit-on utiliser:
A
15-20 fois le volume de la pièce
15
Q
Quelle est la meilleure méthode de fixation pour préserver les lipides:
A
La congélation
16
Q
Quenching:
A
Congélation brusque avec isopentane et azote liquide
17
Q
Quels sont les désavantages de la chaleur comme méthode de fixation:
A
- perte des lipides
- perte importante de l’état initial des éléments tissulaires
18
Q
Pour qu’une fixation soit efficace, elle doit premièrement:
A
Stabiliser les protéines paar insolubilisation
19
Q
Quelle solution est bon pour le postmordancage:
A
Le Bouin
20
Q
Ordre de vitesse de pénétration des fixateurs (croissance)
A
- acide picrique
- tetroxide d’osmium
- alcool éthylique
- alcool méthylique
- chlorure mercurique
- acide acétique
- formaldéhyde
21
Q
Ordre de vitesse de fixation des fixateurs (croissance):
A
- formaldéhyde
- acide acétique
- chlorure mercurique
- alcool méthylique
- alcool éthylique
- tetroxide d’osmium
- acide picrique
22
Q
Quel doit être le pH du fixateur si on doit faire une microscopie électronique:
A
7.2-7.4 pour une bonne préservation des ultrastructures
23
Q
Comment on entrepose les tissus si l’immunohistochimie est prévue:
A
Alcool 70% car il arrête le cross-linking
24
Q
Quels sont les meilleurs fixateurs pour les acides nucléiques:
A
Alcool-acétique (augmente la basophilie donc meilleure coloration) et Carnoy
25
La fixation du noyau résulte:
L'emprisonnement de l'ADN/ARN par les protéines nucléaires fixées ou stabilisées.
26
Comment les phospholipides peuvent être insolubilisés:
Par fixation de la tête polaire
27
Quels sont les seuls fixateurs qui peuvent fixer les lipides pour pouvoir les conserver dans les étapes qui suivent:
Tetroxide d'osmium et acide chromique
28
Fixation des glucides:
1. fixation des polysaccharides
2. fixation des glycoprotéines et mucosubstances
29
Comment fonctionne l'attraction des charges:
* structure tissulaire négative
* donc acide
* aime les colorants basiques (+)
* donc basophile
* ex: noyau
* structure tissulaire positive
* donc basique (+)
* aime les colorants acides (-)
* donc acidophile
* ex: cytoplasme, muscles, collagène, GR...
30
Différents groupes de fixateurs:
1. microanatomique: préserve les formes entre les groupes de cellules et les structures tissulaires
2. cytologique:préserve certains éléments intracellulaires particuliers
* pour la fixation nucléaire: contient toujours de l'acide acétique glacial car il a une forte affinité avec la chromatine
* pour la fixation cytoplasmique: ne contient jamais d'acide acétique glacial, il y a destruction des mitochondries et de l'appareil de Golgi
3. histochimique: préserve les constituants chimiques de la cellule et des tissus
4. microscipie électronique: préserve l'ultraastructure de la cellule
31
Caractéristiques du formaldéhyde:
* gaz incolore
* 37-40% en solution aqueuse saturé donc considéré 100%
* le formol est 10% (formaline)
32
Le formol 40% est utilisé pour:
Imprégnation à l'argent
33
Comment fait-on pour empêcher la formation du paraformaldéhyde:
En ajoutant du méthanol au formaldéhyde.
34
Quel mélange fixateur est le mieux pour le glycogène:
Le Bouin
35
Pourquoi le formol-zinc n'est plus très utilisé:
Parce qu'il existe maintenant des kits de recouvrement d'antigène
36
Quel organe s'autolyse rapidement dans le fixateur:
* intestins s'autolyse rapidement
* le pancréas s'autolyse très rapidement
37
Quel est le meilleur fixateur pour la décalcification:
Formol 10% tamponné (pendant 2-5 jours)
38
Quelle est la grandeur idéale pour un spécimen de décalcification:
2-3mm d'épaisseur
39
Quels fixateurs peuvent décalcifier un peu:
Ceux contenant de l'acide
40
Quel est le fixateur de choix pour la décalcification:
Le Formol, il devient décalcifient à la longue par la formation d'acide formique
41
Quel est le fixateur de choix pour la décalcification de la moelle osseuse:
Helly
42
Comment fait-on pour neutraliser l'acide et le lavage du décalcifiant:
* thiosulfate de sodium ou lithium 5% pour 12 heures et lavage à eau courante
* deux bains d'éthanol 50%
43
Quelle est la formule de décalcification:
Carbonate de calcium dans les os (sous forme de sel) + acide fort du décalcifiant soluble dans leau -------------\> Chlorure de calcium + CO2 + H2O
44
Quel est le décalcifiant de choix:
Acide formique
45
Quels sont les étapes du processus avec la résine échangeuse d'ions:
1. mettre le tissu dans la solution décalcifiante
2. ajouter une résine à la solution acide
3. la résine captera et retiendra le calcium libéré par le tissu
46
Comment l'électrrolyse comme décalacifiant fonctionne:
Basée sur la migration du calcium par le courant électrique (retrait du calcium).
47
Fonctionnement d'un agent chélateur comme décalcifiaant:
EDTA + Ca -------\> EDTA-Calcium (non ionisé et soluble) + 2NA
48
Quels sont les méthodes pour vérifier laa fin de la décalcification:
1. rayons X: zones blanchâtres contient du calcium; il faut éviter les fixateurs avec du chrolure mercurique car il rend les tissus radio-opaques
2. torsion du tissu: si il plie, la décalcification est suffisante; risque de briser le tissu
3. aiguille: si résistance, paas assez décalcifier
4. coupe au bistouri: si résistance, pas assez décalcifié; permet d'éliminer la surface endommagé par une scie à dents
5. chimique
49
Comment se fait le procédé chimique pour vérifier la décalcification:
1. mettre le tissu dans une solution fraiche de liquide décalcifiant pour 3 heures minimum
2. 5 ml de décalcifiant + 5 ml d'hydroxyde d'ammonium ou de sodium (rend le pH de la solution alcalin car les sels de Ca ne précipitent pas en milieu acide) + 1ml oxalate d'ammonium ou de sodium et laisser reposer 30 minutes
3. si le liquide reste clair, la décalcification est terminé
50
quel est le but de la circulation:
Ensemble des étaapes de préparation du tissu fixé afin de pouvoir l'inclure dans un matériau rigide qui permettra d'en faire des coupes observables au microscope
* obtention de coupes de tissu suffisamment minces
* conservation de l'architecture normale des cellules et de ses éléments
51
Quel est le but de la déshydratation:
Retrait de l'eau et du fixateur
52
Pourquoi le premier baain de déshydratation est de l'alcool à 70%:
On veut éviter de stresser le tissu et la précipitation.
53
Est-ce que le premier bain d'alcool pendant la déshydratation est toujours 70%:
Non, il est recommadé que le premier bain pour les tissus embryonnaires et de cerveau est a 30%
54
Pourquoi on ajoute parfois du sulfate de Cu anhydre dans le dernier bain de déshydraatation:
1. devient bleu à la présence d'eau
2. accélération de la déshydratataion
3. prolonge lao durée de l'alcool
55
Quel doit être le volume de l'agent déshydratant:
20-50 fois supérieure à celui de la pièce.
56
Quel est l'agent déshydraatant le plus courant:
L'éthanol
57
Quel agent déshydratant peut substituer l'éthanol:
Le méthanol
58
Quel est le meilleur subtitut à l'éthanol comme déshydratant:
Alcool isoproylique
59
Quel est le meileur solvant universel:
Tétrahydrofurane
60
quel est le but de l'éclaircissement:
Retirer l'agent déshydratant pour le remplacer par l'agent éclaircissement.
61
Qu'est ce qui est un agent d'éclaircissement universel:
Un agent qui est miscible avec l'eau et la paraffine
62
Quels sont les critères pour choisir un agent éclaircissant:
1. retrait rapide de l'agent déshydratant
2. faacilité à remplacer l'éclaircissant par la paraaffine fondue
3. dommage minimal aux tissus
4. inflammabilité
5. toxicité
6. cout
63
Si il reste de l'eau danas une solution xylène:
La solution a un aspect laiteux
64
Quel est le but de l'imprégnation:
Fournir un support interne au tissu
Retrait complet du xylène et remplacement par la paraffine
65
Quel doit être la température de la paraffine:
2-3o plus élevé que le point de fusion
66
Que doit-on faire si le tissu dans le bloc est maal déshydraté:
1. fondre la paraffine avec xylène ou toluène
2. éthanol 100% pour déshydrater complètement
3. xylène ou toluène
4. paraffine liquide
5. imprégnation
67
La majorité des problèmes rencontrés dans la circulation sont du type:
1. tissu sur traité (overprocessed)
2. tissu sous traité (underprocessed)
68
Cheminement d'un spécimen:
1. réception
* vérification de l'identificaiton
* préparation du matériel
* vérifier le niveau de fixateur par rapport au tissu
2. examen macroscopique
* aspect, texture, couleur, particularités
* coupe de la pièce
3. traitement
* circulation
* déshydratation
* éclaircissement
* imprégnation
* enrobage
* microtomie
* étalement et séchage
* coloration
4. montage: recouvrement avec une lamelle
5. examen microscopique: fait par le pathologiste
69
Méthodes de fixation:
1. Méthode chimique : utilisation d’agents chimiques pour fixer les tissus
2. Méthodes physiques
* congélation : utilisation d’azote liquide ou autre composé pour fixer les tissus
* Déshydratation : dessiccation pour fixer les tissus
* Chaleur : coagulation des protéines par la chaleur; utilisé en recherche et pour faire des Gram
70
Propriétés des fixateurs:
1. Additif : liaison du fixateur avec les protéines
2. Non additif : la molécule perd son lien intime avec l’eau et devient moins réactive
3. Coagulant : formation d’un réseau de fibres permettant aux solutions de pénétrer à l’intérieur du tissu
4. Non coagulant : formation d’un gel. Il en résulte une mauvaise pénétration du tissu par les solutions et l’infiltration à la paraffine et moins efficace
5. Tolérant : le tissu peut demeurer dans le fixateur pendant une longue période de temps sans causer de dommages au tissu
6. Non tolérant : le tissu ne peut pas demeurer dans le fixateur plus longtemps que la période recommandé sinon, il y a durcissement excessif du tissu ou rétrécissement du tissu
71
La fixation secondaire sert à:
augmenter l’affinité du tissu pour le colorant et préserver certaines substances tissulaires particulières.
72
Postmordancage:
apporte au tissu des groupements chimiques qui ont une affinité pour le colorant et pour le tissu (ponts).
73
Facteurs qui influencent une bonne fixation :
1. Température : une augmentation résulte à une augmentation du taux de fixation mais provoque une augmentation du taux d’autolyse et la diffusion des éléments cellulaires; la température de la pièce est idéale
2. Grosseur de la pièce : en lien avec la vitesse de pénétration des solutions de traitement
3. Volume de fixateur : doit être 20 fois plus grand que le volume de la pièce
4. Temps : le tissu doit être placé dans le fixateur aussitôt après le prélèvement et la durée de fixation doit être assez longue pour permettre au fixateur de bien fixer
5. Vitesse de pénétration : affecté par la chaleur et non la concentration du fixateur
6. Entreposage du tissu : afin de permettre d’autres prélèvements subséquents si nécessaire
7. pH : entre 6-8
8. pression osmotique : il y a rétraction du tissu dans une solution hypertonique et gonflement du tissu dans une solution hypotonique
74
Dilution du formaldéhyde:
formol à 100% (formaldéhyde 37-40%) + 9 parties d'eau = formol 10% (formalédhyde 3.7-4.0%)
75
Quel est le seul agent fixateur non additif:
Éthanol
76
Quels sont les fixateurs coagulants:
1. chlorure mercurique
2. acide picrique
3. bicrhomate de potassium (solution acide seulement)
4. éthanol
5. sulfate de zinc
77
Quel fixateur est intolérent:
Éthanol
78
Réaction de formaldéhyde comme fixateur:
* Protéines : réaction avec le groupe NH2
* Hydrates de carbone : ne fixe pas mais préservé par emprisonnement
* Lipides : préservé mais perte par le xylène et paraffine
* Nucléoprotéines : Ø
79
Réaction de paraformaldéhyde comme fixateur:
* Protéines : réaction avec le groupe NH2
* Hydrates de carbone : ne fixe pas mais préservé par emprisonnement
* Lipides : préservé mais perte par le xylène et paraffine
* Nucléoprotéines : Ø
80
Réaction de glutaraldéhyde comme fixateur:
* Protéines : réaction avec le groupe NH2
* Hydrates de carbone : ne fixe pas mais préservé par emprisonnement
* Lipides : préservé mais perte par le xylène et paraffine
* Nucléoprotéines : Ø
81
Réaction d'acide acétique comme fixateur:
* Protéines : Ø
* Hydrates de carbone : Ø
* Lipides : Ø
* Nucléoprotéines : coagule les nucléoprotéines et l’ADN
82
Réaction de chlorure mercurique comme fixateur:
Protéines : coagule les protéines
83
Réaction de tetroxyde d'osmium comme fixateur:
* Protéines : ?
* Lipides : fixe les lipides, les rends insolubles
84
Réaction d'acide picrique comme fixateur:
* Protéines : additif par l’ajout de picrates (mordant, ponts)
* Hydrates de carbone : Ø
* Lipides : Ø
* Nucléoprotéines : précipite et rends insolubles mais pas conseillé pour les noyaux car il hydrolyse l’ADN et l’ARN
85
Réaction de bichromate de potassium comme fixateur:
Lipides : préserve un peu
86
Réaction d'éthanol comme fixateur:
* Protéines : coagulant, non additif
* Hydrates de carbone : Ø, insolubilisation
* Lipides : Ø
* Nucléoprotéines : Ø
87
Réaction de méthanol comme fixateur:
* Protéines : précipite les protéines (dénaturation)
* Nucléoprotéines : bon préservateur de l’ARN
88
Réaction du sulfate de zinc comme fixateur:
* Protéines : coagulation, additif
* Hydrates de carbone : Ø
* Lipides : ?
* Nucléoprotéines : ?
89
Quel est l'action de la formaldéhyde comme fixateur:
Pénètre et s’additionne rapidement mais fixe lentement (24 heures)
90
Quel est l'action du glutaraldéhyde comme fixateur:
Fixe en même temps que la pénétration dans le tissu mais lent donc doit utiliser des petits morceaux
91
Quel est l'action de l'acide acétique comme fixateur:
- pénètre très rapidement
- gonfle les tissus
92
Quel est l'action du chlorure mercurique comme fixateur:
Cross linking au niveau du groupe –SH de la cystéine
93
Quel est l'action de l'acide picrique comme fixateur:
Ajout de mordant
94
Quel est l'action du bichromate de potassium comme fixateur:
Additif en cause du chrome
95
Quel est l'action du sulfate de zinc comme fixateur:
Insolubilise les phospholipides et mucopolysaccharides acide (présent dans l’intestin)
96
Quels sont les avantages du formaldéhyde comme fixateur:
1. Moins de rétrécissement des tissus
2. Durcit le plus (sauf l’éthanol et l’acétone)
3. Peu couteux
4. Versatile au niveau des colorations
97
Quels sont les avantages du glutaraldéhyde comme fixateur:
Microscopie électronique
98
Quels sont les avantages de l'acide acétique comme fixateur:
1. noyaux : améliore la coloration des éléments nucléaires
2. bon pour les mucines gastriques
99
Quels sont les avantages du chlorure mercurique comme fixateur:
1. coloration plus belles, rend les tissus réceptifs au colorant
100
Quels sont les avantages du tetroxyde d'osmium comme fixateur:
1. le meilleur pour la fixation des lipides
101
Quels sont les avantages de l'acide picrique comme fixateur:
1. fixateur versatile : fixe, mordance, différencie, colore jaune
2. il est le seul fixateur qui peut jouer ces 4 rôles
3. avantageux de colorer les petits morceaux pour les repérer facilement avant la coloration
4. décalcifie des petits montants
5. bonne coloration avec des colorants acides et trichromiques
102
Quels sont les avantages du bichromate de potassium comme fixateur:
1. peu couteux
2. conserve bien les phospholipides
103
Quels sont les avantages de l'éthanol comme fixateur:
1. ne laisse pas de traces car il ne s’additionne pas
2. augmente la vitesse de pénétration si ajouté à autres fixateurs
104
Quels sont les avantages du méthanol comme fixateur:
1. préservation de l’ARN
105
Quels sont les avantages du sulfate de zinc comme fixateur:
1. bon détails de la membrane nucléaire et cytoplasmique
2. étude immunoenzymatique
3. bon pour la coloration trichromique
4. pourrait remplacer le mercure dans certains mélanges
106
Quels sont les désavantages du formaldéhyde comme fixateur:
Coloration des éléments non nucléaires
107
Quels sont les désavantages du glutaraldéhyde comme fixateur:
1. Tendance à être intolérant
2. Pénètre pas bien
3. Instable
108
Quels sont les désavantages de l'acide acétique comme fixateur:
1. gonflement des tissus
2. globules rouges et hémosidérine (réserve de fer ferrique) lysés donc la technique de Pearl’s est inutile
109
Quels sont les désavantages du chlorure mercurique comme fixateur:
1. toxique
2. lente pénétration
3. cause du rétrécissement
4. cause du durcissement
5. donne un pigment de mercure, pas évitable mais retirable (p.15)
110
Quels sont les désavantages du tetroxyde d'osmium comme fixateur:
1. très couteux
2. pas bon pour la santé, vapeurs toxiques
111
Quels sont les désavantages de l'acide picrique comme fixateur:
1. pas bon pour ADN et ARN
2. tendance à rétrécir
3. gonfle les globules rouges
4. diminue l’hémosidérine (Pearl’s à éviter)
5. doit éviter les organes hématopoïétiques et hémorragiques
6. fixe mal le rein
7. artéfact : couleur jaune qu’on doit enlever avec du carbonate de lithium ou alcool 50-70%
112
Quels sont les désavantages du bichromate de potassium comme fixateur:
1. ulcération des mains
2. destruction des membranes muqueuses (vapeurs)
3. noircissement des solutions avec le temps
4. artéfact : pigment de chrome, évitable (doit rincer à l’eau courante pour 24 heures entre la fixation et l’alcool) mais pas retirable
113
Quels sont les désavantages de l'éthanol comme fixateur:
1. durcit et distorsion des tissus
2. tendance à dissoudre les lipides
3. incompatibilité avec autres ingrédients (chrome et osmium)
114
Quels sont les désavantages du méthanol comme fixateur:
1. toxique
2. durcissement trop
3. lipides dissout en partie
115
Quels sont les désavantages du sulfate de zinc comme fixateur:
1. dépôts et précipités : sels de phosphates si zinc entre en contact avec des phosphates
116
Quels sont les indications pour glutaraldéhyde comme fixateur:
- microscopie électronique
- préserve bien les ultrastructures
117
Quels sont les indications pour acide acétique comme fixateur:
- jamais utilisé seul
- contrecarrer les effets de rétrécissement de d’autres ingrédients
118
Quels sont les indications pour tetroxyde d'osmium comme fixateur:
- très peu fréquent, surtout en recherche
- microscopie électronique surtout, utilisé comme post fixateur car la 1e fixation est fait avec un aldéhyde
- prend des sections minces car pénètre très peu en profondeur
119
Quels sont les indications pour l'acide picrique comme fixateur:
- jamais seul
- ingrédient dans le Bouin, Allen, Hollande (picroformol), Dubosq Brasil (Bouin alcoolique)
120
Quels sont les indications pour éthanol comme fixateru:
- jamais seul comme fixateur
- surtout avec des méthodes d’immunofluorescences et immunochimie
- retrouvé surtout dans la circulation (étape de déshydratation)
- ingrédient dans : Carnoy (acides nucléiques) et Dubosq Brasil
121
Quels sont les indications pour méthanol comme fixateur:
- jamais utilisé seul
- surtout en hématologie (frottis)
122
Quels sont les indications comme sulfate de zinc comme fixateur:
- en remplacement du mercure
- ingrédient dans le formol-zinc
123
Synonyme pour Hollande:
Picroformol
124
Synonyme pour Dubosq Brasil:
Bouin alcoolique
125
Quel est l'aspect du B5
Clair
126
Quel est l'aspect du Bouin:
Jaune
127
Quel est l'aspect du Gendre:
Jaune
128
Quel est l'aspect de Hollande:
Jaune
129
Quel est l'aspect de Zenker:
Jaune
130
quel est l'aspect de Helly:
Orangé
131
Synonyme pour Helly:
Zenker-formol
132
Ingrédients du B5:
1. chlorure mercurique (HgCl2)
2. formaldéhyde (ajouté juste avant l’utilisation sinon il y aura de la détérioration)
3. acétate de sodium (équilibre la pression osmotique entre le tissu et le fixateur)
133
Ingrédients du Bouin:
1. acide picrique
2. formol 40%
3. acide acétique glacial
134
Ingrédients du Gendre:
1. acide picrique (sous forme alcool 95% saturé avec de l’acide picrique)
2. formol 40%
3. acide acétique glacial
135
Ingrédients de Hollande:
1. acétate de cuivre
2. formol 40%
3. acide acétique glacial
4. acide picrique
136
Ingrédients de Zenker:
1. bichromate de potassium
2. chlorure mercurique
3. dans l’eau
4. + acide acétique
137
Ingrédients de Helly:
1. bichromate de potassium (orange)
2. chlorure mercurique
3. dans l’eau
4. + formol 40% ajouté juste avant l’emploie
138
Ingrédients de Formol-zinc:
1. sulfate ou chlorure de zinc
2. formol 40%
3. avec ou sans tampon
139
Indications du B5:
-organes hématopoïétiques (ex : ganglions lymphatiques)
140
Indications du Bouin:
1. colorations trichromiques
2. préserve la structure des tissus délicats
3. biopsies du tractus gastro-intestinales, très beaux noyaux
4. excellent pour le système endocrinien
141
Indications de Hollande:
Biopsies du tractus gastro-intestinal (mieux que Bouin)
142
Indications de zenker:
Excellent pour le foie, rate, tissue de soutient, noyaux
143
Indications de Helly:
1. glande hypophyse
2. moelle osseuse, rate, pancréas, organes lymphoïdes et hématopoïétiques
144
Indications de Formol-Zinc:
1. tous les tissus
145
Quels sont les avantages du B5:
1. rapide (4-5h)
2. excellent pour immuno (ag-Ac)
3. excellent pour la coloration nucléaire
146
Quels sont les avantages du Bouin:
1. peu de distorsion sauf pour le rein
2. bon pour le glycogène (le mieux)
3. très belle coloration
4. utile pour les petits fragments
147
Quels sont les avantages du Gendre:
1. démonstration du glycogène
148
Quels sont les avantages de Hollande:
1. acétate de cuivre stabilise la membrane des globules rouges, les granules des éosinophiles et la membrane des cellules endocrines, donc moins de lyse que le Bouin
2. un peu décalcifient (petits fragments)
149
Quels sont les avantages de Zenker:
1. colorations trichromiques sont belles
2. solution mère et de travail sont stables
150
Quels sont les avantages de Helly:
Colorations trichromiques
151
Quels sont les avantages de Formol-Zinc:
1. excellent pour conserver les tissus (immunohistologie)
2. préserve bien les antigènes car il n’y a pas de cross-linking, les macromolécules restent dans la même conformation d’origine
3. le zinc peut remplacer le chlorure mercurique
152
Quels sont les désavantages de B5:
1. toxique
2. intolérant si plus de 24 heures, on doit le mettre dans l’alcool 70%
3. ruban difficile, stries et déchirures
4. artéfacts (mercure)
5. danger de décollement des coupes (ajout de colle dans le bain, de gélatine ou utilisation de lames chargés)
153
Quels sont les désavantages de Bouin:
1. globules rouges sont lysés
2. fer et mitochondries sont dissous
3. pas bon pour la microscopie électronique et le rein (trop de distorsion)
4. doit retirer la coloration jaune
5. entreposage des tissus, si plus que 24 heures, doit le placer dans l’alcool 70-80% sinon, trop de distorsion
154
Quels sont les désavantages de Gendre:
1. couleur jaune
2. globules rouges sont lysés
3. fer dissout
155
Quels sont les désavantages du Hollande:
1. couleur jaune
2. doit retirer le fixateur par le lavage avant de mettre les pièces dans le formol tamponnée sinon, il y aura formation de précipités dans la solution
156
Quels sont les désavantages de Zenker:
1. GR sont lysés (donc pas bon pour les organes hématopoïétiques)
2. fer est dissout
3. fixateur intolérant si plus de 24 heures
4. formation de pigments de chrome et pigments de mercure
5. pas bon pour imprégnation à l’argent
157
Quels sont les désavantages de Helly:
1. intolérant si plus que 24 heures
2. solution instable avec ajout de formol
3. pas bon pour glycogène et imprégnation à l’argent
158
Quels sont les désavantages de Formol-Zinc:
Le zinc n’est pas très soluble dans l’alcool 70% (1er bain de circulation) donc précipitation dans le circulateur et les tissus (microtomie difficile), surtout avec le formol non tamponnée
159
Quel mélange fixateur est le mieux pour le glycogène:
Bouin
160
Quel est le meilleure remplacement pour le formol tamponné:
Formol acétate
161
Pourquoi est utilisé le formol bromure d'ammonium:
Tissus du SNC, solution très acide et lyse les GR, les noyaux devient APS positifs
162
Pourquoi est utilisé le formol calcium:
surtout pour fixer et préserver les phospholipides
163
Quels sont les critères essentiels à une bonne décalcification :
1. Retrait complet du calcium
2. Distorsion minimale du tissu en utilisant une bonne concentration du décalcifiant et restreindre le temps d’action au maximum
3. Préservation des structures nucléaires (perte de basophilie si trop longtemps)
4. Colorations subséquentes
5. Vitesse de décalcification raisonnable (temps de décalcification vs besoins du laboratoire)
164
Étapes de la décalcification :
1. Sélection du spécimen
2. Fixation du tissu
3. Décalcification
4. Fin de la décalcification
5. Neutralisation de l’acide et lavage (pour empêcher le gonflement des fibres de collagène par l’acide du décalcifient)
165
Quel est le type du décalcifiant acide nitrique:
Acide fort (inorganique)
166
Quel est le type du décalcifiant acide formique:
Acide faible (organique)
167
Quel est le type du décalcifiant acide picrique:
Acide faible (organique)
168
Quel décalcifiant utiliserait-on pour des biopsies urgentes:
Acide nitrique
169
Quelle méthode de décalcification utiliserait-on pour des petites pièces:
Agent chélateur
170
Quels sont les avantages de l'acide nitrique comme décalcifiant:
Très rapide
171
Quels sont les avantages de l'acide formique comme décalciufiant:
- tolérant
- conservent mieux les structures cellulaires et affinités tinctoriales
- si à 25%, aussi rapide que l’acide nitrique mais la solution devient trouble
172
Quels sont les avantages de l'acide picrique comme décalcifiant:
-conservent mieux les structures cellulaires et affinités tinctoriales
173
Quels sont les avantages de la résine échangeuse d'ions comme décalcifiant:
- liquide décalcifiant est toujours libre de calcium donc pas nécessaire de le changer
- meilleur pour préserver les détails cellulaires
- meilleur résultat décalcifiant
174
Quels sont les avantages de l'électrolyse comme décalcifiant:
-rapide (2-6 heures)
175
Quels sont les avantages des agents chélateurs comme décalcification:
- aucune distorsion du tissu
- tolérant
- bon pour les colorations
176
Quels sont les désavantages de l'acide nitrique comme décalcifiant:
- intolérant
- on doit arrêter la décalcification à temps, sinon il altère les colorations
- déconseillé pour la coloration Giemsa
- doit ajouter de l’urée 0.1% ou formaldéhyde 10% pour éviter la formation d’acide nitreux
177
Quels sont les désavantages de l'acide formique comme décalcifiant:
- besoin un grand volume de liquide et un changement de la solution toutes les 24-48 heures
- lent (jusqu’à 15 jours)
178
Quels sont les désavantages de l'acide picrique comme décalcifiant:
- lent (jusqu’à 15 jours)
- pour les petites pièces
- coloration jaune des tissus qui doit être enlevé par blanchissement à l’étape de la coloration (avec carbonate de Lithium 1%)
179
Quels sont les désavantages de la résine échangeuse d'ions comme décalcifiant:
- lent (jusqu’à 20 jours)
- impossible de vérifier la fin de la décalcification avec test chimique (le calcium reste dans la résine)
180
Quels sont les désavantages de l'électrolyse comme décalcifiant
-doit rincer les tissus dans l’eau alcaline à la fin pour neutraliser les acides
181
Quels sont les désavantages des agents chélateurs comme décalcifiant:
-lente
182
Quels sont les facteurs qui influencent la décalcification :
1. Fixation : les tissus doivent être bien fixés avant la décalcification sinon, il y aura altération des structures
2. Concentration : plus le liquide décalcifiant est concentré, plus la vitesse est grande et plus il y a de risques d’abimer les tissus
3. Volume de liquide : volume recommandé 20 pour 1
4. Température : accélère la vitesse de décalcification mais peut causer un gonflement et une hydrolyse du tissu conjonctif (25oC)
5. Agitation : ne modifie pas vraiment mais facilite un meilleur accès de l’acide vers le tissu
6. Vide : accélère la réaction et enlève les bulles d’air dans les cavités des os
7. Durée : recommandé de ne pas laisser les tissus plus longtemps qu’il ne faut dans le liquide décalcifiant
183
Quels sont les désavantages de l'éthanol comme déshydratant:
1. inflammable
2. précipitation des sels de phosphate dans le tissu si le 1e bain alcool est plus concentré que 70%
184
Quels sont les désavantages du méthanol comme déshydratant:
1. toxique
2. inflammable
185
Quels sont les désavantages de l'alccol isopropylique comme déshydratant:
1. ne peut pas être utilisé pour la préparation de solution d’éosine
2. pas bon pour inclusions avec celluoïdine (substance d’enrobage)
3. irritation aux yeux, nez et gorge
4. toxique
5. inflammable à 10% et plus
186
Quels sont les désavantages de l'alcool butylique comme déshydratant:
1. capacité déshydratante faible
2. pénètre lentement le tissu
3. odeur forte
187
Quels sont les désavantages de l'acétone comme déshydratant:
1. pénètre lentement
2. très volatile
3. retrait des lipides
4. tissus deviennent friables et rétractés si trop longtemps
5. inflammable
6. flash point de -17oC
188
Quels sont les désavantages du dioxyde de diéthylène comme déshydratant:
1. distorsion des tissus avec des cavités
2. prix très élevé
3. très toxique et toxicité cumulative
4. odeur forte
5. très inflammable
189
Quels sont les désavantages du butanol tertiaire comme déshydratant:
1. odeur forte
2. couteux
3. tendance à se solidifier à la température de la pièce
4. le premier bain doit être moitié/moitié avec la paraffine
190
Quels sont les désavantages du tétrahydrofurane comme déhsydratant:
1. très volatile
2. flash point de -14.5oC
3. odeur forte
4. dommage au foie et au rein avec exposition prolongée
191
Quels sont les avantages de l'éthanol comme déhysdratant:
1. non toxique
2. miscible à l’eau
3. action rapide
192
Quels sont les avantages du méthanol comme déshydratant:
1. miscible à l’eau
2. action rapide
193
Quels sont les avantages de l'alcool isopropylique comme déshydratant:
1. rétracte et durcit moins que l’éthanol
194
Quels sont les avantages de l'alcool butylique comme déshydratant:
1. bon pour tissus ayant besoin déshydratation longue comme les tissus délicats
2. moins de rétraction et de durcissement que l’éthanol
3. miscible à la paraffine donc pas besoin d’éclaircissement
195
Quels sont les avantages de l'acétone comme déshydratant:
1. rapide, déshydrate vite
196
Quels sont les avantages du dioxyde diéthylène comme déshydratant:
1. solvant universel : miscible avec l’eau, l’éthanol et la paraffine donc déshydrate et éclaircit en même temps
2. plus rapide qu’éthanol mais besoin d’une très grande quantité
197
Quels sont les avantages du butanol tertiaire comme déshydratant:
1. solvant universel : miscible avec l’eau, le xylène, le toluène et la paraffine fondue
198
Quels sont les avantages du tétrahydrofurane comme déhysdratant:
1. solvant universel : miscible avec l’eau, le xylène, le toluène et la paraffine fondue
2. moins toxique que le Dioxane
3. rapide
4. tolérant
5. rétrécit peu les tissus
6. très utile pour les tissus où on doit reprendre la déshydratation et l’éclaircissement
199
Quels sont les facteurs qui influencent la déshydratation :
1. Concentration : bains croissants avec les trois derniers à 100%
2. Volume : 20-50 fois supérieur du tissu et on renouvelle la solution
3. Agitation : augmente la vitesse de déshydratation
4. Durée : assez longtemps pour tout retirer l’eau mais pas trop longtemps pour causer du durcissement et rétrécissement
5. Température : augmente la vitesse de déshydratation
6. Vide partiel : augmente la vitesse de déshydratation car il fait sortir l’air et l’eau des tissus
7. Présence de sulfate de cuivre : augmente la vitesse de déshydratation
8. Taille/consistance du tissu : gros, fibreux ou dense diminue la vitesse de déshydratation
200
Quels sont les désavantages du xylène comme éclaircissant:
1. intolérant
2. durcit le tissu fibreux, musculaire, SNC et cartilage
3. rétracte les tissus
4. inflammable et volatile
201
Quels sont les désvantages du toluène comme éclaircissant:
1. vapeur toxiques et narcotiques
202
Quels sont les désavantages du benzène comme éclaircissant:
1. durcit les tendons, muscles et utérus
2. hautement cancérigène et toxique (cause anémie aplasique)
203
Quels sont les désavantages du chloroforme comme éclaircissant:
1. plus lent que xylène
2. difficile à enlever par la paraffine
204
Quels sont les désavantages de l'huile de cèdre comme éclaircissant:
1. odeur intense
2. doit être enlevé par le xylène
3. dispendieux
4. lent
5. visqueux donc imprégnation à la paraffine très lente
205
Quels sont les désavantages du Slidebrite comme éclaicissant:
1. très lent pour enlever la paraffine
2. se contamine facilement par l’eau
206
Quels sont les désavantages du Limonene comme éclaircissant:
1. irritant
2. odeur forte et citronnée
3. difficile à utiliser dans les colorations (décollement)
4. doit changer la paraffine souvent (contamination par Limonene)
207
Quels sont les avantages du xylène comme éclairicssant:
1. excellent, rend les tissus translucides
2. rapide (5mm d’épaisseur en 30-60 minutes)
3. très miscible à la paraffine
208
Quels sont les avantages du toluène comme éclaircissant:
1. durcit moins que le xylène
2. tolérant (over night sans trop de durcissement)
209
Quels sont les avantages du benzène comme éclaircissant:
1. rapide
2. pas de durcissement excessif comme le xylène
3. s’évapore rapidement au bain de paraffine donc pas besoin de faire une rotation des bains de paraffine
210
Quels sont les avantages du chloroforme comme éclaircissant:
1. rend tissus moins cassants que le xylène
2. mieux pour utérus, muscle et tendon que le xylène
3. rétracte très peu
4. les pièces flottent lorsqu’elles sont éclaircies
211
Quels sont les avantages de l'huile de cèdre comme éclaircissant:
1. tolérant (peut rester indéfiniment dans la solution)
2. ne cause pas de rétrécissement
3. peu d’évaporation
4. bon pour les tissus durs : peau, muscles, utérus, tendons
212
Quels sont les avantages du Slidebrite comme éclaircissant:
1. plus sécuritaire que le xylène
2. pas d’évaporation
3. peut être neutralisé pour en disposer
213
Quels sont les avantages du Limonene comme éclaircissant:
1. moins de durcissement que le xylène
2. plus sécuritaire que le xylène
214
Quels sont les facteurs qui influencent l’éclaircissement :
1. Concentration : bains croissants avec les trois derniers à 100%
2. Volume/nombre de bains : 10 fois plus que le volume total des pièces
3. Agitation : augmente la vitesse d’éclaircissement
4. Durée : dépend du type d’agent
5. Température : augmente la vitesse mais durcit et rétracte donc mieux sans chaleur
6. Vide partiel : retire l’air emprisonné mais ne change pas grand-chose
7. Taille/consistance des pièces : gros, fibreux ou dense diminue la vitesse d’éclaircissement
215
Composition de la paraffine:
Mélange d’hydrocarbures solides (substances organiques)
216
Composition du paraplast:
Paraffine pure + polymère de plastique
217
Composition du carbowax:
Polyéthylène-glycol
218
Quels sont les désvantages de la paraffine:
1. rétraction du tissu de 10% quand la paraffine refroidie
2. si pure, il y a assèchement de blocs, coupe difficile
3. pas utilisé pure, doit être mélangés avec de la cire d’abeille, plastique, caoutchouc ou lard
219
Quels sont les avantages du paraplast:
1. donne des blocs plus uniformes
2. coupes plus faciles, moins de craquelures
220
Quels sont les désavantages du carbowax:
1. ne pas exposer à l’humidité donc ne peut pas étaler les coupes sur un bain d’eau
2. entreposage des blocs dans milieu absolument sec
221
Quels sont les avantages du carbowax:
1. peut imprégner directement après la fixation, pas besoin de déshydratation ou d’éclaircissement
2. meilleur support que la paraffine
3. lipides sont conservés
222
Les facteurs qui influencent l’imprégnation :
1. Taille/consistance des pièces : plus long pour les tissus denses, gros ou durs
2. Agent éclaircissant utilisé : miscibilité avec la paraffine, plus vite si miscible
3. Volume total de paraffine/nombre de bains : mieux si plusieurs bains (3)
4. Température : 57-60oC
5. Agitation : plus efficace
6. Vide partiel : évacue les bulles d’air des tissus permet à la paraffine de mieux entrer
223
Quels sont les artéfacts de fixation:
1. rétrécissement ou gonflement du tissu
2. desquamation
3. cytolyse et autolyse
4. polarisation du glycogène ou effet de fuite
5. fixation par couche
6. perte de structures ou de détails
224
Quels sont les artéfacts de pigments:
1. Pigment de formol
2. pigment de mercure
3. pigment de chrome
4. pigment d'acide picrique
5. pigment de carbone
225
Quels sont les artéfacts de circulation:
1. précipité dans la chambre dces tubulures du circulateur
2. déshydratation excessive
3. circulation inadéquate
4. artéfact d'éponge
5. dessication accidentel du tissu
226
Description de l'artéfact: desquamation
Perte de cellule à la périphérie d’un tissu
227
Description de l'artéfact: polarisation du glycogène ou effet de fuite
Migration du glycogène du cytoplasme vers un pôle de la cellule ou même à l’extérieur
228
Description de l'artéfact: pigment de formol
Pigment brun à noir, biréfringent
229
Description de l'artéfact: pigment de mercure
Brun, noir ou brun-noir, non biréfringent
230
Description de l'artéfact: pigment de chrome:
Rouille, orange, brun, noir
231
Description de l'artéfact: pigment d'acide picrique
Jaune
232
Description de l'artéfact: pigment de carbone
Brun-noir, non réfringent
233
Description de l'artéfact: déshydratation excessive
Sous forme de microchatter sur les bords du tissu
234
Description de l'artéfact: circulation inadéquate
Coloration nucléaire pauvre ou absence de coloration de certains noyaux (surtout dans HE)
235
Description de l'artéfact: artéfact d'éponge
Séparation du tissue de l’éponge
236
Description de l'artéfact: dessication accidentel du tissu
Visible lors de l’enrobage et sous forme de bloc (microtomie)
237
Quelle est la cause de l'artéfact: rétrécissement ou gonflement du tissu
Lors de l’utilisation d’un fixateur intolérant pendant une période de temps trop longue
238
Quelle est la cause de l'artéfact: cytolyse et autolyse
Nécrose du tissu si la fixation a débuté tardivement
239
Quelle est la cause de l'artéfact: fixation par couche
Ralentissement de la vitesse de pénétration du liquide fixateur dans le tissu, le centre du tissu est donc mal ou pas fixé
240
Quelle est la cause de l'artéfact: Perte de structures ou de détails
Fixation trop courte du tissu, les éléments non fixés seront abimés lors de la circulation et lors des manipulations suivantes
241
Quelle est la cause de l'artéfact: pigment de formol
L’acide formique non tamponné + hémoglobine
242
Quelle est la cause de l'artéfact: pigment de mercure
Apparait avec tous les fixateurs ayant du mercure
243
Quelle est la cause de l'artéfact: pigment de chrome
Chrome + alcool (du bain) donne un oxyde insoluble
244
Quelle est la cause de l'artéfact: pigment d'acide picrique
Fixation avec Bouin (acide picrique)
245
Quelle est la cause de l'artéfact: pigment de carbone
Retrouvé dans les poumons des citadins ou causé par des tattoo
246
Quelle est la cause de l'artéfact: précipité dans la chambre et les tubulures du circulateur
- utilisation de formol-zinc ou formol tamponné avec phosphate et déshydratation débutée avec alcool plus de 70%
- pH formol-zinc plus de 7
247
Quelle est la cause de l'artéfact: déshydratation excessive
Trop longtemps dans les bains de déshydratation (biopsies surtout)
248
Quelle est la cause de l'artéfact: circulation inadéquate
- reste de l’eau dans les tissus quand il va dans l’éclaircissement
- présence d’agent éclaircissement dans paraffine (odeur xylène)
- utilisation trop de chaleur pendant le cycle
- problèmes mécaniques avec le circulateur
249
Quelle est la cause de l'artéfact: artéfact d'éponge
Utilisation des éponges donc trop de pression entre les éponges
250
Quelle est la cause de l'artéfact: dessication accidentel du tissu
-tissu laissé à l’air libre pendant la circulation
251
Quelle est la location de l'artéfact: pigment de formol
- surtout sur organes hématopoïétiques
- intra et extracellulaire
252
Quelle est la location de l'artéfact: pigment de carbone
surtout dans les poumons
253
Comment éviter l'artéfact: rétrécissement ou gonflement du tissu
- ne pas dépasser la période de temps idéale de la fixation
- choisir un fixateur tolérant
- choisir un fixateur composé ayant un ingrédient qui contrecarre l’intolérance
254
Comment éviter l'artéfact:Cytolyse et autolyse
- plonger le tissu dans le fixateur aussitôt que possible après le prélèvement
- s’assurer que le liquide fixateur est en contact avec toute la surface du tissu
255
Comment éviter l'artéfact:Polarisation du glycogène ou effet de fuite
-utiliser un fixateur adéquat pour le glycogène lorsque celui-ci doit être bien préservé
256
Comment éviter l'artéfact:Fixation par couche
- utiliser un fixateur à pénétration plus rapide
- utiliser des pièces de tissu très minces
257
Comment éviter l'artéfact: Perte de structures ou de détails
- allonger la période de fixation en tenant compte de la grosseur du tissu
- s’assurer que le tissu congèle le plus rapidement possible car une congélation trop lente cause la formation de cristaux de glace (qui agit comme des rasoirs)
258
Comment éviter l'artéfact: Pigment de formol
Utiliser du formaldéhyde tamponné
259
Comment éviter l'artéfact: pigment de mercure
Éviter les fixateurs ayant du mercure
260
Comment éviter l'artéfact:Pigment de chrome
-éviter les fixateurs à base de chrome
261
Comment éviter l'artéfact: Pigment d’acide picrique
-éviter l’utilisation de l’acide picrique
262
Comment éviter l'artéfact: Précipité dans la chambre et les tubulures du circulateur
- débuter la déshydratation avec alcool 70%
- pH formol-zinc doit demeurer sous 7
263
Comment éviter l'artéfact: Déshydratation excessive
- circuler la biopsie séparément
- diminuer le temps de déshydratation
264
Comment éviter l'artéfact: Circulation inadéquate
- s’assurer d’aucune condensation dans le circulateur
- s’assurer que l’alcool du dernier bain est 100% pur
- s’assurer qu’il n’y a pas de problèmes mécanique
- s’assurer d’une cédule adéquate
- chaleur seulement pour la paraffine
265
Comment éviter l'artéfact: Artéfact d’éponge
S’assurer de tremper les éponges dans le fixateur avant de mettre le fragment
266
Comment retirer l'artéfact: Pigment de formol
Laver la lame dans une solution alcoolique saturée d’acide picrique
267
Comment retirer l'artéfact: pigment de mercure
Iode alcoolique (enleveur) + thiosulfate de sodium (enlève iode)
268
Comment retirer l'artéfact: Pigment de chrome
- lavage du tissu à l’eau courante (pendant la nuit)
- passer les coupes dans un bain d’alcool-acide au moment de la coloration
269
Comment retirer l'artéfact: Pigment d’acide picrique
- blanchissement du tissu avec du thiosulfate de sodium 2.5%
- blanchissement du tissu avec du carbonate de lithium 1%
270
Comment retirer l'artéfact: Précipité dans la chambre et les tubulures du circulateur
Retrait du précipité en rinçant la chambre et tubulures avec acide acétique 5%
271
Comment retirer l'artéfact: Dessiccation accidentel du tissu
- enlever le plus de paraffine possible (blot off)
- placer le tissu dans une solution réhydratante : eau, alcool 100, carbonate sodium aqueux
