Lab 3er parcial Flashcards
____ es la inserción de ADN nuevo, por ejemplo, un plásmido, en una célula u organismo. Esta puede ser natural o inducida. Da lugar a la recombinación genética
La transformación celular
Ej. maíz transgénico, soya, frutas transgénicas.
Todavía es un tema controversial
Aplicaciones en organismos eucariontes de la transformación celular:
Se le conoce como transfección
En celulas eucariones
es el proceso mediante el cual los elementos genéticos contenidos en el genóma de diferentes individuos se combina
Transferencia de genes entre bacterias
Esto permite que el individuo origine alguna nueva función que pueda dar como resultado____
una adaptación a los cambios en el medio ambiente
Originalmente las bacterias utilizan esta estrategia como adaptacion
PARA ADQUIRIR LA CAPACIDAD PARA ADAPTARSE A AMBIENTES CON ANTIBIOTICOS, o grandes contenido de sales, agua, etc. Esto les ha permitido colonizar varios espacio.
Los biologos moleculares empezaron a observar y a utilizar estos mecanismos para realizar la tecnologia del _____ para producir proteínas o productos que benefician a los seres humanos.
ADN recombinante
Utilizamos un kit: que contiene una acción didactica de la recombinación del ADN
Nos dan un plásmido (pGLO) y éste ya contiene un ADN que nos interesa producir. este ADN es un gen de una proteína (GFP) que se utiliza en medusas. entonces cuando está en oscuridad, emite florecencia gracias a ésta proteína.
Este gen se insertó en el plásmido pGLO.
Éste mismo kit contiene una muestra de E coli, entonces realizamos el procedimiento que implica que el e coli reciba el plásmido pGLO que ya trae la proteína GFP. una vez esto la e coli crece, se multiplica y empieza a expresar GFP y brillan. La tecnología utiliza un vector que le permite recibir un ADN extraño utilizando ENZIMAS DE RESTRICCIÓN.
Transformación de E. coli en el laboratorio
- plasmido (pGLO) que ya contiene un ADN
- se agrega: GFP, proteína que permite la florecencia.
- El kit contiene una E. coli, entonces, se realiza el procedimiento para que la E. coli acepte el plasmido pGLO mediante un vector utilizando enzimas de restricción
- una vez esto la bacteria crece y se multiplica, si acepto el plásmido entonces, GRACIAS A LA PROTEÍNA DENTRO DEL PLASMIDO BRILLA
detonó el desarrollo de la ingenieria genética. 10 años más tarde en un sistema recombinante realizaron la producción de la insulina.
Realizaron una Enzima para que les permitiera cortar el plásmido y entonces pusieron en contacto al plasmido abierto con el gen del ARN ribosomal de una rana.
Se va a pegar el llamado inserto en el vector, este inserto contiene el gen de interes.
en 1992-1993
Se refiere a la técnica que permite la introducción de un DNA extraño en un organismo y consigue que se exprese como si fuera propio
TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE
Preparación del inserto: Digestión del ADN de interés en posiciones precisas con endonucleasas de restricción
PASO 1 de la transformación de bacterias
se tiene que conocer la secuencia de interés. seleccionas las enzimas de restricción para cortar el segmento (dentro de la secuencia debe estar el gen de interés)
Seleccionar el vector de clonación (pequeña molécula de ADN capaz de autoreplicarse)
PASO 2 de la transformación de bacterias
poner nuestro ADN recortado en un vector de clonación, debe tener un sitio de restricción, se corta y se generan los extremos pegajosos
Insertar los fragmentos de interés en el vector de clonación (en presencia de ADN ligasa)
Las moléculas de ADN que están compuestas de materiales genético de diferentes fuentes se denominan ADNs recombinantes
PASO 3 de la transformación de bacterias
pongo en contacto los fragmentos de interés con el vector abierto y pongo una ligasa (VECTOR RECOMBINANTE)
Preparar células competentes para que reciban el vector recombinantes
PASO 4 de la transformación de bacterias
preparar a la e coli (hacerla competente: generar en su membrana y su pared celular la formación de poros, para que por medio de esos poros el vector pueda entrar)
Transformación: insertar los vectores de clonación a células específicas que contienen toda la maquinaria genética para la expresión de la información contenida en el vector
PASO 5 de la transformación de bacterias
Pongo el vector recombinante en contacto con la E coli y sucede la TRANSFORMACIÓN
Seleccionar o identificar a las células que contienen al ADN recombinante
PASO 6 de la transformación de bacterias
Consentir a la e coli para que crezca y se multiplique, y al hacer esto, expresar lo que el vector contenía
en laboratorio sólo se hacen los pasos:
4
5
6
molecula de adn capaz de recibir otro adn exógeno
vector
origen de la replicación para que cuando la e coli se duplique también duplique la info de interés
ori
codifica para la beta lactamasa reconoce el anillo de lactama (es una estructura que comparten varios antiboticos) el cual rompe al antibiotico y ya no va a inhibir el crecimiento de la bacteria. Entonces decimos que es un GEN REPORTERO porque nos reporta cuando la bacteria recibió al plásmido, porque si le pongo ampicilina LA BACTERIA va a crecer entonces quiere decir que ya recibió el plásmido
gen bla
b-lactamasa-resistencia a la ampicilina
gen que nos interesa, proteína verde florecente
GFP
es un gen regulador de la expresión
(si no le pongo este gen la bacteria no brilla, es un gen que nos permite identificar si el inserto que le puse al vector es el inserto correcto)
araC- regulador de arabinosa
REGULA LA EXPRESIÓN DE GFP
sirve para que inicie su proceso de replicación
promotor
estos dos en conjunto hacen un swich de encendido
araC y promotor