LAB 13 NEUTRALIZACIÓN EN PLACA: DENGUE Flashcards
Porque es relevante el método de neutralización?
Se utiliza para evaluar la capacidad neutralizante de muestras séricas humanas frente a infecciones virales.
- Es una prueba de confirmación frente a otras técnicas.
- Para efectos de la vigilancia diagnóstica y confirmación, el Instituto Nacional de Salud (INS) ante la falta de una prueba de confirmación serológica y para estudios de investigación epidemiológica, se propone la estandarización de la prueba de neutralización por reducción en placas (PRNT) como método para el diagnóstico serológico específico.
En que consiste, que se mide y que se determina la neutralización?
Mezcla de suero diluido + suspensión viral se incuba con una monocapa confluente de células hospedadoras.
El resultado es la observación de regiones de células infectadas(placas)expresado en UFP/ml.
Dependiendo del virus se miden:
- unidades formadoras de placa por observación microscópica,
- anticuerpos fluorescentes
- colorantes específicos que reaccionan con las células infectadas
Se determina:
- el título viral
- punto final del 50% de reducción de placas.
- concentración de suero para reducir el número de placas en un 50% en comparación con el virus libre de suero da la medida de cuánto anticuerpo está presente o qué tan efectivo es.
Existe una problemática de la neutralización?
Asi como el correcto estado del medio y maduración del virión. Un correcto resultado depende enormemente del tipo de célula utilizada en el ensayo. Por lo tanto, si la línea celular incorrecta se podrá asumir cualquier resultado erróneo.
En Dengue, se utilizan diferentes sistemas celulares como: BSC-1, VERO, etc , líneas de mosquitos son mucho más sensibles a la infección por el virus con altos indice de ailsamiento y elevada especificidad que con los sistemas anteriores. En ocasiones es necesario realizar un pase por una línea de células de mamífero permisiva como son las células LLCMK2, Vero y las de mosquito.
Cuantas veces se incuba y que componentes son relevantes?
- Se incuba 4 veces
- El agar semisólido de carboximetilcelulosa sirve para fijar.
- Agregar colorante naftol blue black
De que manera se obtiene las lecturas y el porcentaje de reducción de placas?
Lectura de las placas Título viral:
Para conocer el título de un virus se aplica la siguiente fórmula:
Título UFP/mL = P x 10xV
P: Promedio del número de placas obtenido en la dilución en que se contaron las placas.
10
X x: Dilución en que se contaron las placas (Factor de dilución).
V: Volumen del inóculo expresado en mL
Nota: Siempre que se utilice un volumen de inóculo de 50 µL la fórmula queda de la siguiente forma: Título UFP/mL = P x 10x x 20
% de reducción= (1- P(Del virus mas suero)/P(Control del virus)) x 100 =
