LAB 12 CULTIVO CELULAR Flashcards
Para que el cultivo celular?
Si bien la detección de los ácidos nucleicos es vanguardia, el cultivo celular no solo nos permite realizar el diagnostico viral(detección de anticuerpos, detección de material genético vírico, inmunofluorecensia), su aplicación incluye la producción de vacunas virales, investigación en cáncer, estudios de toxicidad, producción de tejidos y piel para trasplantes.
- Tiene una especificidad máxima y sensibilidad generalmente adecuada dependiendo del virus.
- Estándar de oro que permite recuperar y realizar la replicación de las partículas virales a partir de muestras clínicas.
- Hay potenciadores como el método por centrifugación en tubos especiales Shell vial (SV) o en placas de cultivo permite acelerar la adherencia y la penetración del virus a la célula receptora, obteniendo el producto de aislamiento viral desde las 48 horas del periodo de incubación, posteriormente son tipificados por la prueba IFD y por IHA determinando virus Influenza y otros virus respiratorios.
Cuales son los tipos de cultivo celular?
A) Cultivos primarios: Mezcla de células recientemente aisladas generalmente riñón, pulmón o piel obtenido por disociación de células a partir de un órgano o tejido molido, es Cultivo finito.
Tejidos fetales, de adultos normales o tumorales
B) Cultivo de líneas celulares: subcultivo de manera repetida proveniente de un cultivo celular primario.
- Semicontinuas (Células diploides): subcultivos de células primarias de tejidos diploides normales.
- Hasta 50 generaciones, poseen el cariotipo diploide, se usa para producir vacunas.
*Continuas: son células aneuploides transformadas o de tejidos tumorales, in vitro por tiempo prolongado por medio de cultivos repetidos (propagación indefinida). No se usan para vacunas.
Componentes ,herramientas clasicas y consideraciones con el cultivo celular en el laboratorio?
Medio RPM1: contiene glutamina y otros aminoácidos, tambien el indicador rojo fenol indica el estado y la necesidad de recambio de los nutrientes.
Suero bovino fetal: El suero que menos posee anticuerpos facilitanto el crecimiento del cultivo.
El medio puede variar en componentes como iones y nutrientes dependiendo de el tipo de célula a cultivar.
Se debe considerar la confluencia ideal del tipo de célular e iniciar el recambio a un 75% de confluencia(las células hematopoyénicas no se les considera la confluencia por su suspención en el medio).
El micoplasma es el principal contaminante vivo.
La tinción trypan blue es ideal para usar en la cámara Neubauer, pero el azul de metileno tambien se puede considerar como otro recurso.
Ejemplos, uso principal y características de cultivos primarios para virología?
Riñón primario de mono
Riñón primario de conejo
Influenza,
parainfluenza,
algunos enterovirus
Herpes simple
Diploide, tipos de células mezclados, uno o dos pasajes
Ejemplos, uso principal y características de líneas celulares para virología?
Diploide, fibroblástica, pasajes limitados ( menor 50- 70)
Fibroblastos diploide humanos
Herpes simple,
citomegalovirus,
varicelo zóster,
rinovirus
Ejemplos, uso principal y características de líneas celulares ESTABLECIDAS para virología?
Heteroploide, pasaje continuo in vitro
HeLa,
HEp-2
A549
MDCK LLC-MK2 Vero, células ML Células RD Células BGM 293 células Adenovirus, VSR, Virus coxsackie B Herpes simple, adenovirus, varicela_zóster, algunos enterovirus. Virus de la influenza Herpes simple Algunos virus Coxackie A Adenovirus ent
Ejemplos, uso principal y características de líneas celulares MEZCLADAS para virología?
Combinaciones de líneas celulares establecidas
MRC5 + CV1
Células ML A549
RD + H292,
BGMK + A549
Herpes simple,
varicela_zóster
Virus respiratorios
Enterovirus
Ejemplos, uso principal y características de Líneas
celulares genéticamente modificadas para virología?
Introducción de un gen para producir un efecto visible después de la infección
Sistema inducido por virus ligados a enzimas
Herpes simple
