La structure du génome Flashcards
1
Q
Que sont les acides aminés? Qu’est-ce qui les compose?
A
Les acides aminés (a. a.) sont des modules de construction pour la structure primaire des protéines.
Un acide aminé: le cœur est un carbone asymétrique (carbone-α) qui se lie à un groupement amine (NH2), un groupement carboxyle (COOH), un atome d’hydrogène (H) et une chaîne latérale (R) qui varie selon le type d’acide aminé (spécifique).
2
Q
Quel groupement est au début de la protéine? Et à la fin?
A
Une protéine moyenne comporte 1000 a.a., commence par le ‘N’ (le début de la protéine est un gr. Amine) et finit par le ‘C’ (la fin est un gr. Carboxyle).
3
Q
Quels sont les liens que l’on retrouve entre les acides aminés?
A
Unis par des liens peptidiques (liaisons covalentes entre le groupe carboxyle d’un a.a. et le groupe
amine du suivant).
4
Q
Quels sont les 3 types d’acides aminés?
A
- Acides aminés à chaîne latérale non polaire (squelette carbone)
- Acides aminés à chaîne latérale polaire (avec un groupement polaire : OH, NH2, SH)
- Acides aminés ionisés (avec une charge)
5
Q
Quels sont les acides aminés à chaîne latérale non polaire (9)?
A
- Glycine,Gly (G)
- Alanine, Ala (A)
- Valine, Val (V)
- Leucine, Leu (L)
- Isoleucine , Ile (I)
- Proline, Pro (P)
- Phénylalanine, Phe (F)
- Tryptophane, Trp (W)
- Méthionine, Met (M)
6
Q
Quels sont les acides aminés à chaîne latérale polaire (6)?
A
- Sérine, Ser (S)
- Thréonine, Thr (T)
- Tyrosine, Tyr (Y)
- Asparagine, Asn (N)
- Cystéine, Cys (C)
- Glutamine, Gln (Q)
7
Q
Quels sont les acides aminés ionisés (5)?
A
Basiques (chargés positivement)
- Arginine, Arg (R)
- Lysine, Lys (K)
- Histidine, His (H)
Acides (chargés négativement)
- Acide aspartique, Asp (D)
- Acide glutamique, Glu (E)
8
Q
Quel(s) type(s) d’acides aminés peuvent faire la liaison peptidique?
A
Les a.a. peuvent faire les liaisons chimiques similaires avec leurs cœurs (la partie noire est presque toujours la même).
—> tous peuvent faire la liaison peptidique.
9
Q
Vrai ou faux : Chaque a.a. a le potentiel de faire des liens qui lui sont propres grâce à son R (la quantité et type des liens sont importants).
A
Vrai : la lysine peut faire un lien ionique avec son R, mais pas la glycine.
10
Q
En quoi se replie la structure primaire?
A
La structure primaire se replie en structures secondaires qui sont les modules de construction de la structure tertiaire.
11
Q
Comment se forment les structures secondaires? Quels sont les 2 types de structures secondaires?
A
Les structures secondaires se forment spontanément dans l’eau grâce aux liens H au niveau des «cœurs» des acides aminés:
—>l’hélice α(un cylindre ayant les chaines R à l’extérieur) ou
—> le feuillet β (une surface plane ayant les chaines R en haut et en bas).
12
Q
Qu’est-ce qui se forme lors de la liaison peptidique entre 2 a.a.?
A
Une molécule d’eau est relâchée
13
Q
Qu’est-ce que la structure tertiaire d’une protéine?
A
La structure tertiaire d’une protéine est un agencement d’hélices et/ou de feuillets. Elle possède les domaines fonctionnels (régions ayant des activités enzymatiques et/ou des sites de liaisons pour d’autres molécules).
14
Q
Vrai ou faux : Deux domaines qui n’ont pas la même forme peuvent avoir la même fonction dans une protéine.
A
Un domaine donné se replie toujours de la même façon, peu importe le contexte dans lequel il se trouve. C’est la forme qui détermine la fonction.
15
Q
Vrai ou faux : Un même domaine peut faire partie de plusieurs protéines (exemples : kinase, SH2, SH3) et la fonction de la protéine peut être interprétée par ses domaines.
A
Vrai
16
Q
Vrai ou faux : Toutes les protéines possèdent une structure quaternaire.
A
Faux : Certaines protéines (pas toutes) possèdent une structure quaternaire. Il s’agit de l’interaction entre plusieurs chaînes peptidiques pour former une protéine fonctionnelle.
17
Q
Qu’est-ce qui forme le cytosquelette des protéines?
A
Le filament d’actine qui forme le cytosquelette est composée de plusieurs monomères d’actine.
18
Q
Qu’est-ce qui compose l’hémoglobine.
A
hémoglobine est composé de 4 chaînes peptidiques, 2α et 2β (on dit qu’il est hétérotetramère)
19
Q
Résumer ce que représente chaque structure des protéines.
A
La structure primaire = la séquence d’acides aminés
La structure secondaire = l’hélice ou le feuillet
La structure tertiaire = la protéine repliée correctement
La structure quaternaire = plusieurs chaînes protéiques
20
Q
Des séquences spécifiques se replient pour former des structures ____________ avec des fonctions ___________.
A
- spécifiques
-spécifiques
21
Q
Vrai ou faux : L’ensemble de l’ADN génomique d’un organisme est réparti sur un seul chromosome.
A
Faux : L’ensemble de l’ADN génomique d’un organisme est réparti sur un ou plusieurs chromosomes.
22
Q
Combien et comment est le(s) chromosome(s) des bactéries?
A
Les bactéries (procaryotes) possèdent généralement un seul chromosome circulaire
23
Q
Comment et combien de chromosomes chez les eucaryotes?
A
Les eucaryotes possèdent plusieurs chromosomes. Souvent un ensemble de chromosomes différents est présent 2 fois (les organismes diploïdes).
—> 23 pairs de chromosomes chez l’humain
24
Q
Quelles sont les caractéristiques du génome des bactéries (3)?
A
Les bactéries ont un génome beaucoup plus petit que les eucaryotes.
—> Forme une structure appelée nucléoïde
—> Situé directement dans le cytoplasme.
—> Des petites protéines aident à l’organisation spatiale de l’ADN, rôle similaire aux histones eucaryotes.
25
Comment est le nucléoide chez les procaryotes?
Le nucléoïde est dynamique: les interactions alternatives entre l’ADN et les protéines en vert et ovales défont les interactions entre l’ADN et les H-NS.
26
Quels sont les éléments qui permettent le compactage de l’ADN chez les procaryotes (3)?
o H-NS (histone-like nucleoid-structuring) : recouvrement de l’ADN(coating) ou formation d’un pont(bridging)
o Protéine d’enroulement d’ADN (envert)
o Protéine pliant l’ADN (ovale bleue)
27
Vrai ou faux : L’état de l’ADN est le même durant tout le cycle cellulaire de la cellule chez les eucaryotes.
Faux : L’état de l’ADN dépend à quelle phase du cycle cellulaire se trouve la cellule.
28
Quels sont les 2 niveaux de condensation de l’ADN chez les eucaryotes?
Chromosome mitotique : ADN très condensé
Chromatine : ADN moins condensé
* Plus condensé ≡ moins accessible pour les protéines de transcription, réplication, réparation et recombinaison.
29
Comment est l’ADN à l’interphase?
À l’interphase (la vie normale d’une cellule)
—> L’ADN dans le noyau, sous forme de longs filaments appelés la chromatine.
30
Comment est l’ADN à la mitose?
À la mitose (division cellulaire)
Le noyau disparait et l’ADN condensé en chromosomes mitotiques
—> les protéines représentent la moitié de la masse moléculaire d’un chromosome.
31
Qu’est-ce que la chromatine (qu’est-ce qui la compose)?
La chromatine ≡ un ensemble d’ADN + protéines associées.
—> La majorité de ses protéines sont des histones (protéines de condensation).
—> Les protéines non-histones, ont des rôles durant la transcription, réplication, réparation et recombinaison de l’ADN.
32
Quels sont les 2 niveaux de compaction de la chromatine?
Hétérochromatine : Région non transcrite. Fibres condensées de ≥ 30 nm
Euchromatine : Région active pour la transcription. Fibres étendues ~ 11 nm
33
Que permettent les histones?
Les histones contrôlent le passage d’une forme à l’autre (hétérochromatine en euchromatine) grâce à des complexes remodelants et une 5ème histone (H1)
34
Définir nucléosome
Le nucléosome: Structure de base de la chromatine et le premier niveau de compaction.
35
Qu’est- ce qui compose le noyau du nucléosome?
L’ADN + 8 histones
Le noyau du nucléosome («core») est constitué de 8 histones (octamère). L’ADN s’enroule 1,65 fois autour de chaque noyau et cela représente ~146 pb(«coreADN»).
36
Qu’est-ce qui relie les noyaux de nucléosome et comment est-ce que ça s’appelle?
L’ADN reliant 2 noyaux mesure entre 20 et 60 pb et est appelé intercalaire («linker»).
37
Quelles sont les histones participantes dans le noyau du nucléosome et combien y en a-t-il dans le nucléosome? Sur le noyau du nucléosome?
Dans le noyau du nucléosome :
- H2A (2/nucléosome)
- H2B (2/nucléosome)
- H3 (2/nucléosome)
- H4 (2/nucléosome)
Sur le noyau du nucléosome :
- H1 (1/nucléosome)
38
Quel ADN n’est plus accessible aux enzymes?
L’ADN compacté à + de 30nm n’est plus accessible aux enzymes. (Hétérochromatine)
39
Comment est l’affinité des histones avec l’ADN?
Grande affinité non spécifique à la séquence de bases.
40
Les histones riches en lysines et arginines (20%) chargées _________.
Interaction avec la charpente d’ADN chargée __________ (gr.phosphate) au niveau du sillon _________.
De plus, les séquences riches en _______ ont tendance à se courber naturellement.
- positivement
- négativement
- mineur
- A : T
41
Quel est l’effet de la liaison des histones à l’ADN?
La liaison des histones à l’ADN déforme la double hélice et la replie autour du noyau d’histones.
42
Quelle est la composition du nucléosome?
2 dimères H2A-H2B et d’un tétramèreH3-H4 pour un total de 8 histones (2 de chaque type).
43
Histone :
Partie N ______ = Permet _______
Partie C ______ = Permet _______
- variable, régulation
- conservée, assemblage du nucléosome
44
Vrai ou faux : Il existe une autocomplémentarité entre les histones.
Vrai : Plusieurs liaisons faibles grâce aux domaines conservés en C-terminal
45
Qui sont les intermédiaires du nucléosome (2)? Dans quelle forme sont-ils en absence d’ADN disponible? Que permettent leur configuration?
Les dimères et les tétramères sont des intermédiaires du nucléosome.
Ils sont en solution en absence d’ADN disponible.
—> Les 2 intermédiaires ont une configuration permettant de garder les queues N-terminales à l’extérieur.
46
Vrai ou faux : Le noyau du nucléosome ne peut s’agencer qu’en présence d’ADN.
Vrai
47
Quel tétramère d’histone se lie en premier à l’ADN?
Le tétramère H3-H4 se lie à l’ADN en premier plie l’ADN et l’enroule.
o Les deux dimères H2A-H2B se joignent ensuite au complexe et le stabilisent.
48
Que permettent les queues N-terminale des histones?
Chacune des 8 histones du noyau a une longue queue N-terminale qui ressort du nucléosome.
—> Elles stabilisent davantage l’ADN autour du noyau et permettent des interactions entre les nucléosomes.
49
Combien y a-t-il de points de contact ADN-histone à l’intérieur d’un nucléosome?
Au total, 14 points de contact ADN-histone à l’intérieur d’un nucléosome, un pour chaque fois que le sillon mineur fait face au noyau.
* 40 liens hydrogène sont formés, la plupart impliquant les «O» de la charpente de l’ADN. Seulement 7 liaisons impliquent les bases du sillon mineur.
50
Vrai ou faux : Les queues ‘N’ d’histones, sortent du nucléosome et peuvent être modifiés par des enzymes.
Vrai
51
Où sont situées les queues des H2B et H3 vs les queues des H4 et H2A?
Les queues des H2B et H3 émergent entre les 2 brins d’ADN, où 2 sillons mineurs se font face,
créant une brèche juste assez grande pour la chaîne peptidique.
Les queues des H4 et H2A émergent en haut et en bas de deux hélices.
52
Définir acétylation.
Acétylation : cache la charge ‘+’ sur les lysines des histones et donc il y a une perte d’interaction avec l’ADN chargé ‘-‘ (=perte des liens ioniques) = l’ADN se détache et donc moins condensé
*Réversible
53
Définir phosphorylation sur l’histone.
Phosphorylation: le P ajouté sur les sérines et il va neutraliser une charge ‘+’ voisine de la lysine ou d’arginine. Le P peut aussi augmenter l’effet de répulsion de l’ADN (en ajoutant plus de charges ‘-‘).
*Réversible
54
Définir méthylation et ubiquitination sur l’histone.
Méthylation et ubiquitination : L’ajout de ces groupements rend l’histone compatible à d’autres protéines (plateforme de recrutement pour les autres; = permettent les changements de configuration de la queue N la rendant complémentaire à d’autres protéines ... ou d’autres possibilités avec interaction protéine-protéine)
*Réversible
55
Quelle enzyme permet de passer à l’hétérochromatine à l’euchromatine? Et pour l’inverse?
Hétérochromatine (pas de transcription) —> HAT (histone acétyle transférase) —> Euchromatine (transcription)
Euchromatine (transcription) —> HDAC (histone désacétylase) —> Hétérochromatine (pas de transcription)
56
Quel est le « code » des queues N des histones?
Le “code” de queues N des histones
o Ajout d’un groupement acetyl ou CH3 sur une lysine
o Ajout d’un CH3 sur une arginine
o Ajout d’un P sur une sérine
57
Quels sont les a.a. qu’on retrouve en majorité dans les queues N-terminale des histones (2)?
Lysine (K) et arginine (R)
58
Les interactions avec l’ADN sont ___________ et _________ à des séquences.
- dynamique
- non-spécifique
59
Définir inhibition du positionnement du nucléosome.
Inhibition du positionnement:
—> des protéines lient l’ADN à des intervalles inférieurs à 150 pb.
—> ADN facilement accessible.
60
Définir assemblage préférentiel du nucléosome.
Assemblage préférentiel:
—> des protéines se lient aux nucléosomes existants et aident au recrutement d’autres nucléosomes dans la région
61
Pour quoi le nucléosome est-il essentiel?
Nucléosome essentiel au maintien des niveaux de compaction supérieurs.
62
Quelle est l’étape suivante après la condensation de l’ADN?
La condensation de l’ADN continue et les étapes suivantes impliquent l’organisation spatiale des nucléosomes construits.
63
Expliquer les interactions de l’euchromatine.
Euchromatine : constituée de fibres étendues de 11 nm d’épaisseur.
—> L’histone H1 interagit avec l’ADN intercalaire (linker) entre les nucléosomes et avec une partie de l’ADN autour du nucléosome : permet effet de resserrer les nucléosomes entre eux et d’enrouler 20 pb de plus.
64
Que forme la condensation de l’euchromatine?
Condensation de l’euchromatine peut en une fibre plus épaisse de 30nm = hétérochromatine
Les queues-N des histones des nucléosomes adjacents forment de nombreuses interactions : permet aux nucléosomes de se rapprocher davantage: 2 modèles possibles, le solénoïde et le zigzag.
65
Quelle histone permet le passage de l’euchromatine en hétérochromatine?
Remarque : Avec ou sans H1 = 11nm
Mais l’ajout de H1 est la première étape pour aller vers 30 nm
66
Comment l’hétérochromatie fait pour se plier sur elle-même?
L’hétérochromatine peut s’organiser en boucles (“DNA loops”) de 40-90 kb. Les protéines Sir se lient sur les nucléosomes des fibres 30 nm. Ces protéines sont auto-complémentaires(se lient entre elles).
—> La fibre 30 nm se plie donc sur elle-même.
67
Comment les boucles formées par les protéines Sir sont stabilisées?
La base de chaque boucle formée par les protéines Sir, est stabilisée par des agrégats protéiques appelés « nuclear scaffold » (échafaudage nucléaire).
68
Quelles sont les protéines de l’échafaudage nucléaire (2 types)?
Les protéines de l’échafaudage nucléaire:
o les topoisomérases II : participent dans le maintien de la structure et s’assurent que les boucles demeurent séparées l’une de l’autre
o les protéines SMC ou condensines : pinces auto-complémentaires (les protéines similaires, cohésines, sont impliquées dans l’agencement de 2 chromatides sœurs en 1 chromosome mitotique)
69
Quel est le rôle du chromosome mitotique?
Assure la transmission efficace des gènes aux cellules filles lors de la division: structure stable, taille compacte, protection de l’information.
70
Qu’est-ce qui est nécessaire pour l’intégrité et la transmission des chromosomes (3)?
- télomère
- origine de réplication
- centromère
71
Définir génome.
ensemble des informations contenues dans l’ADN dont les séquences sont nécessaires pour coder tous les ARN et toutes les protéines de l’organisme. Le génome est distribué sur 1 ou plusieurs chromosomes
72
Quelles sont les fonctions d’un chromosome (4)?
Les fonctions d’un chromosome:
o Compacter l’ADN pour qu’il puisse être contenu dans la cellule ou noyau.
o Protéger l’ADN (l’association à des protéines donne plus de stabilité)
o Organiser l’ADN (expression génique et recombinaison)
o Transmettre l’ADN durant la mitose.
73
Que permet le fait de pouvoir aligner les séquences d’ADN?
Il est possible d’aligner les séquences d’ADN (en nucléotides) de plusieurs espèces différentes : faire un BLAST (Basic Local Alignment SearchTool, un logiciel d’alignement). Un BLAST peut même se faire avec une séquence spécifique et toutes celles qui sont connues (séquences déposées dans GenBank).
74
Vrai ou faux : Il est impossible d’aligner les séquences des protéines de plusieurs espèces.
Faux : Il est aussi possible d’aligner les séquences des protéines (en acides aminés) connues chez plusieurs espèces.
75
Définir ploïdie (n).
nombre de copies de chaque chromosome.
76
Quelle est la ploïdie des bactéries? Des eucaryotes?
Les bactéries ont un seul chromosome haploïde (n) circulaire dans le nucléoïde.
Les eucaryotes ont plusieurs chromosomes linéaires dans le noyau.
—> Plusieurs organismes eucaryotes sont diploïdes (2n) au niveau de cellules somatiques et haploïde (n) pour les gamètes.
*Certaines cellules sont polyploïdes(#n).
—> Il s’agit d’une amplification globale du génome = une production accrue d’ARN et
77
Chez qui la polyploïdie est assez courante?
Certains organismes sont entièrement polyploïdes(un phénomène assez courant chez les plantes).
Leur gamète sont la moitié du n total : Par exemple, siles cellules somatiques sont 4n, les gamètes seront 2n.
78
Définir plasmide. Chez qui le retrouve-t-on?
Chez les procaryotes : les plasmides sont de petites molécules d’ADN circulaires généralement indépendantes du chromosome et susceptibles d’être transmises d’un individu à un autre.
79
À quoi sert les plasmides?
Les plasmides sont capables de réplication autonome et sont non essentiels à la survie de la cellule, mais apporte un avantage à la survie.
80
Deux organites eucaryotes ont leur propre génome, quels sont-ils?
les mitochondries et les chloroplastes.
81
Quels sont les ponts communs entre les mitochondries et les chloroplastes (5)?
Points communs :
o Existent en plusieurs copies par organite,
o Réplication indépendante du reste de la cellule
o Transmission non mendélienne
o Génomes circulaires
o Séquences ressemblant aux génomes bactériens.
82
Définir gène.
Un caractère transmissible (héréditaire) porté par l’ADN.
—> Un ensemble de segments d’acides nucléiques contenant l’information nécessaire pour produire un ARN fonctionnel de façon contrôlée (ARNm sont traduits en protéines).
83
Comment sont les gènes bactériens?
généralement organisés en opérons et donnent des transcrits d’ARN polycistroniques (contenant l’information pour plusieurs protéines).
84
Comment sont les gènes eucaryotes?
Plus longs et discontinus (présence des introns).
L’ARNm code pour une seule protéine (avec nuance, les transcrits peuvent être modifiés par l’épissage alternatif)
85
Définir la densité génique.
nombre de gènes/ Mb d’ADN
86
Comment est la densité génique chez les bactéries vs chez les eucaryotes?
Les bactéries : haute densité génique(1000 gènes/Mb).
—> Leur génome constitué majoritairement de séquences codantes.
—> Peu de séquences non-codantes régulatrices de l’expression génique
—> Une séquence d’origine de réplication.
Les eucaryotes: corrélation négative entre la densité génique et la complexité de l’organisme (plus complexe ≡ moins de gènes par Mb).
—> La densité génique chez l’humain est de 10 gènes/Mb.
87
Vrai ou faux : Chez l’humain, un seul facteur influence la régulation de l’expression des gènes.
Faux : Plusieurs facteurs influenceront cette régulation de l’expression.
88
La densité génique (le nombre de gènes par mégabase (Mb) d’ADN) est ________ chez les organismes plus complexes.
- faible : plus grand génome, mais pas plus de gènes.
89
Définir introns.
portion non-codante d’ADN située dans un gène, transcrite puis éliminée par épissage dans les ARN matures.
90
Quel est le pourcentage d’intronisation chez les humains vs chez la levure?
Chez les humains, la longueur moyenne d’ADN transcrit en ARN est de 27 kb/gène, mais seulement 1.3 kb code en fait pour une protéine(95% représente les introns!).
o Chez la levure, seulement 3% de gènes ont des introns...
91
Que sont les séquences uniques (4)?
o Les séquences régulatrices de l’expression génique*.
o Les “fossiles” de l’évolution : pseudo gènes et fragments de gènes. Entre 12600 et 19700 pseudo gènes dans le génome humain!
—> Produit par duplication, incorporation de gènes viraux, mutations (insertion/délétion)...
o ARN régulateurs : long ARN (lncRNA) et petit ARN (microARN ou snARN) non traduits impliqués dans la régulation.
o Les origines de réplication
92
Que sont les séquences répétées (3)?
Les séquences répétées
o Les microsatellites
o Les télomères
o Les transposons
93
Expliquer la relation dynamique entre les histones et l’ADN.
Les protéines liant une séquence spécifique de l’ADN ne peuvent la trouver que si cette section est «déroulée». La chromatine doit être constamment remodelée pour permettre réplication, réparation, transcription...
94
Ce dynamisme (histone-ADN) requiert des facteurs protéiques qui peuvent le favoriser ou non, quels sont-ils (2)?
o Les complexes remodelant de la chromatine (ATP- dépendants)
o Complexes de modifications post-traductionnelles des queues d’histones
95
Vrai ou faux : Toutes les régions d’ADN sont dynamiques.
Faux : Les régions d’ADN utilisées sont dynamiques, et les régions d’ADN non utilisées par la cellule, ne sont pas dynamiques(“transcriptionnal silencing”).
96
Caractéristiques des complexes remodelant de la chromatine (ATP-dépendant) (3).
o Peuvent être recrutés par les facteurs de transcription ou par les queues N du nucléosome.
o Ont besoin de l’ATP : L’énergie est utilisée pour permettre une redistribution des liens entre l’ADN et les histones.
o Les nucléosomes sont tenus par des liens non- covalents(surtout liens H) et peuvent être « déplacés » ou leur ADN est déroulé légèrement par “glissement”.
97
Quelles sont les grandes sous-familles de complexes remodelant de la chromatine (ATP-dépendants) (4)?
Quelle famille permet le glissement de l’ADN et des nucléosomes, l’éjection des nucléosomes et l’échange d’histone?
Quatre grandes sous-familles de complexes remodelant:
- SW1/SNF
- ISW1
- CHD
- INO80
—> Tous permettent le glissement de l'ADN et des nucléosomes,
—> mais seulement SW1/SNF est connu pour permettre l'éjection des nucléosomes.
—> Les complexes de la sous-famille INO80 permettent l'échange d'histone.
98
Que sont les variants d’histones? Quel est leur rôle?
Ce sont des nucléosomes positionnés.
Les variants sont spécifiques à certaines espèces, types cellulaires ou phases cellulaires. Leur séquence protéique diffère de celle des histones conventionnelles sur quelques acides aminés seulement, mais cela modifie grandement leurs propriétés !
Ils sont positionnés de manière spécifique à la séquence et régulent ainsi la transcription.
99
Définir transgenèse.
l’introduction d’un gène étranger dans un génome d’intérêt.
100
Quelles sont les différentes méthodes pour modifier le génome d’un organisme (3)?
Sélection classique
- Croisement
- Mutagenèse
Modification génétique
- Transgenèse
101
Expliquer la transgenèse chez les plantes (6 étapes).
1. Sélection du gène étranger (ou gène d’intérêt) et
2. Clonage dans le plasmide Ti.
3. Transformation bactérienne pour distribuer le plasmide avec le gène d’intérêt à la cellule végétale.
4. Incorporation de l’ADN étranger dans le génome de la plante
5. Sélection des cellules transformées et croissance de plantules.
6. Les plantes obtenues seront totalement transgéniques : toutes leurs cellules possèderont le gène d’intérêt (ADN étranger).
102
Expliquer la transgenèse chez les animaux (6 étapes).
1. Culture de cellules souches embryonnaires via la culture de blastocytes
2. Construction. Le vecteur contient des pièces d’ADN qui sont homologues à l’ADN cible (dans le génome), en plus du gène à perturber et un gène de sélection
3. Transfection de cellules embryonnaires. Par recombinaison homologue, la séquence du génome est échangée par celle du vecteur
4. Prolifération des cellules transformée et sélection
5. Injection des cellules trasnformées dans un blastocyte
6. Développement d’une souris mutante après quelques générations
