K4 Zentrifugation Flashcards
1
Q
Welche Parameter sind nach den Zellaufschluss für die Zentrifugation relevant?
A
- Hydrophobizität
- Viskosität
- Größe d. Bruchstücke
- Ladung (zeta potenzial)
- Löslichkeit
2
Q
Prinzipien Zentrifugation
A
Sedimentation
- niedrige Konzentration –> Partikel sind unabhängig voneinander Stokes gilt
- bei hoher Konz. Sedimentationsgeschw. abh. von gegenseitiger Beeinflussung
- bei sehr hoher Konz kommt es zur Agglomeration
Zentrifugation Parameter
- Radius
- Durchflussrate
- Rotationsgeschwindigkeit
- Differentialgeschw.
Beschleunigung vs. Festkörperbewegung
- es dauert bis Partikel aus der Ruhe heraus in Rotation gebracht werden können, bis dahin wirken SCherkräfte
3
Q
Design Zentrifuge
A
- Arten: Röhrenz, Platten./Tellerz., Dekanter, Schneckenz.
- Frage ob die Zellen eine plötzliche Rotation aushalten oder ob eine Vorrotation notwendig ist um SCherkräfte gering zu halten (Sanft Disc Inlet Besser: Hermetic inlet)
- Unterschied zw. Tangentialgeschw. und Partikelbewegung können zu Turbulenz führen, dadurch steigen SCherkräfte und es können kleinere Bruchstücke entstehen
- Messung der Scherkräfte mit Vorhandensein der DNA
- Wichtiger Messparameter: Viability = Überlebensrate
- tote Zellen stören den folgenden Prozessverlauf, man möchte nach der Zentrif. lebende Zellen haben
4
Q
Zentrifugen Typen
A
Turbular bowl
+ G hoch, gute Entfernung von WAsser, gute REinigung
- geringer FEststoffspeicher, SChaumbildung, batch Betrieb
chamber bowl
+ Wasserentfernungn, gute Klärung, Abkühlung
- Säuberung, recovery, batch
Teller Zentrifuge
+ kontin. Betrieb möglich, kein SChaum, geringe Kühlung
- schlechte Entfernung von WAsser, Säuberung
Dekanter
+ konti
- g niedrig
5
Q
Inclusion Bodies
A
- Aggregatkügelchen, die durch Überexpression entstehen
+ immer gleiche Prozesschritte > Plattformprozess
- aufwändige Aufreinigung, Proteine liegen ungefaltet vor und müssen wieder gefaltet werden
Ablauf
6
Q
Scherbelastung dokumentieren
A
- Trübungsmessung
- Viskosität, Dichte messen
- DNA messen
7
Q
Dekanter
A
8
Q
Inclusion Bodies abtrennen
A
Von Zellwand trennen
