k2 Flashcards
Ποια η τεχνολογια του ανασυνδιασμενου DNA;
- Επιλογή του επιθυμητού τμήματος DNA
- Απομόνωση, χαρακτηρισμός και ανάλυση
τμήματος DNA ή cDNA - Επιλογή του φορέα κλωνοποίησης
- Δημιουργία ενός υβριδικού μορίου DNA
- Είσοδος του μορίου σε ένα κύτταροξενιστή προκειμένου να αναπαραχθεί η
ανασυνδυασμένη γενετική πληροφορία - Δημιουργία πολλαπλών αντιγράφων DNA ή
πρωτεΐνης
Τι ειναι η κλωνοποιηση;
Βασική αρχή της μοριακής κλωνοποίησης είναι η ένθεση ενός τμήματος DNA που μας
ενδιαφέρει σε έναν φορέα κλωνοποίησης που έχει την ιδιότητα να
αντιγράφεται μέσα σε ένα κύτταρο ξενιστή
Έτσι προκύπτει ένα ανασυνδυασμένο μόριο DNA το οποίο συνίσταται
από το φορέα κλωνοποίησης και το τμήμα DNA που έχει εντεθεί σε αυτόν
Κατά την κλωνοποίηση πραγματοποιείται ρήξη των φωσφοδιεστερικών δεσμών μεταξύ δύο
διαδοχικών νουκλεοτιδίων και στις δύο αλυσίδες του φορέα κλωνοποίησης
ποιος ειναι ο ρολος των περιοριστικων ενδονουκλεασων και τι ξερετε για τις πεοριστικες ενδονουκλεασες τυπου 2;
Παράγονται από τα βακτήρια
ως μηχανισμός άμυνας σε
εισερχόμενο DNA με σκοπό να
το περιορίσουν/καταστρέψουν!
Αναγνωρίζουν συμμετρικές νουκλεοτιδικές
αλληλουχίες (παλίνδρομα), μήκους 4, 5, 6, 8 ή 10
νουκλεοτίδια
- Αποτελούνται από μία μόνο υπομονάδα
- Απαιτούν για τη δράση τους Μg
2+
- Δεν απαιτούν ΑΤΡ για τη δράση τους
- Το σύστημα της τροποποίησης εξαρτάται από μια
ανεξάρτητη μεθυλάση
Οι ενδονουκλεάσες Τύπου II:
- Αναγνωρίζουν μια συγκεκριμένη αλληλουχία και κόβουν την αλυσίδα είτε μέσα είτε πολύ
κοντά στη αναγνώρισης
- Δημιουργούνται διακριτά τμήματα DNA, ορισμένου μεγέθους και αλληλουχίας των άκρων
- Το ένζυμο HindII είναι το πρώτο ένζυμο περιορισμού ομάδας τύπου ΙΙ που απομονώθηκε
- Από τότε έχουν μελετηθεί πάνω από 3000 ένζυμα και έχουν τεθεί εμπορικά διαθέσιμα
πάνω από 600
Οι περιοριστικές ενδονουκλεάσες Τύπου ΙΙ είναι τα ένζυμα που χρησιμοποιούνται ως επί το
πλείστον στη βιοτεχνολογία και τη μοριακή βιολογία
τι γνωριζετε για την μερικη και την τελεια πεψη;
Τέλεια πέψη:
Ο μεγαλύτερος αριθμός μορίων του υποστρώματος έχει κοπεί
Μερική πέψη:
Ένα μόνο ποσοστό των μορίων έχει κοπεί
