Isolation de protéines

Question 1

Quelle est la première étape primordiale pour isoler des protéines?

Answer 1

Les dissoudre dans une phase liquide aka lyser les cellules afin de libérées les protéines

Question 2

Citer 3 méthodes de DÉSINTÉGRATION MÉCHANIQUE afin de brisé les cellules des tissus

Answer 2

-Déchiquetage méchanique
-Broyage (sable, albumine)
-Homogénéisateur
-Cryolise
-French Press (haute pression)
-Sonifciation

Question 3

Nommer une méthode “douce” qui permet de lyser les cellules animales et qui particilièrement efficace pour ce type de cellule. Décrivé elle consiste en quoi

Answer 3

La lyse osmotique

Plonger les cellules dans une solution hypotonique et la différence de concentration créera une pression osmotique dans la cellule ce qui cause son éclatement et la relache des protéines

Question 4

Vrai ou Faux
Il est possible d’utiliser la lyse osmotique pour des cellules végétales et bactériennes?

Answer 4

Vrai, il faut lyser la paroi cellulaire d’abord!!!

Question 5

Quelle enzyme est nécessaire pour dégrader la paroi cellulaire de différentes cellules

Answer 5

Lysozymes

Question 6

Comment appelle t’on le mélange de débris cellulaire après une lyse avec l’utlisation de lysozymes

Answer 6

Le lysat

Question 7

Expliquer qu’est ce que le SDS
(Sodium dodecyl sulfate)

Answer 7

Un détergent anionique solide qui peut
solubiliser les protéines et les lipides qui encadrent les membranes. Cela aidera les
membranes cellulaires à séparer et à exposer les chromosomes contenant l’ADN. SDS
libère l’ADN d’histones et d’autres protéines de liaison à l’ADN en les dénaturant.

Question 8

Nommer une sérine protéase qui permet de digérer certaines protéines contaminantes lors d’une extraction d’ADN

Answer 8

Protéinase K

Question 9

L’intégrité structurale des protéines et leur stabilité dépendent de 3 facteurs. Quels sont-ils?

Answer 9

pH
Température
Protéases

Question 10

Pourquoi faut-il avoir une température froide (0 à 5°C) lors de l’extraction de protéine

Answer 10

Les protéines se dénature lentement à des températures pièces et se dénature rapidement a de hautes température.

Question 11

Expliquer l’effet des protéases sur les protéines et comment peut-on limiter leur interaction avec les protéines lors de l’extraction de protéines

Answer 11

Les protéases peuvent hydrolyser les liens peptidiques des protéines et les dégrader. Nous pouvons utiliser des inihibiteurs de protéines pour limiter leur interaction

Question 12

Quelles sont les propriétés physico-chimiques exploitées dans les différentes techniques de
séparation?

Answer 12

-Solubilité
-Charge ionique
-Taille moléculaire
-Propriétés d’absorption et liaisons avec d’autres molécules (spécificité)

Question 13

Placé les différentes techniques de séparation avec les propriétés physico-chimiques correspondantes:
1. Ultracentrifigation
2. Précipitation
3. Chromatographie d’affinité
4. Chromatographie par échange d’ions

A.Spécificité
B.Taille moléculaire
C. Charge ionique
D. Solubilité

Answer 13

1.B
2.D
3.A
4.C

Question 14

Expliquer “la couche d’hydration”

Answer 14

Interactions non-covalentes entre les molécules d’eau et les parties polaires/hydrophiles d’une macromolécule qui forme une couche.

Question 15

Vrai ou faux
La couche d’hydratation augmente la solubilité d’une macromolécule

Answer 15

Vrai

Question 16

Expliquer “l’effet hydrophobe”

Answer 16

Diminution de la surface de contact des surfaces hydrophobes pour minimiser les interactions avec l’eau

Question 17

La solubilité des protéines dépend de 3 facteurs. Quels sont-ils?

Answer 17

1. Interaction polaires avec le solvant aqueux
2. Interaction ioniques avec les sels en solution
3. forces électrostatiques répulsives entre molécules ou agrégats de charge similaire

Question 18

La précipitation d’une protéine exige la formation d’….

Answer 18

agréats

Question 19

Quelles sont les variations typiquement utilisées pour diminuer la solubilité d’une protéine

Answer 19

-pH
-Concentration saline
-Solvent organique
- ajout de polymère inerte

Question 20

Choisiser les 2 énoncés incorrectes
A) Les sels augmentent les interactions avec l’eau
B) Les sels diminuent les interactions avec l’eau
C) Les sels augmentent la répulsion entre les protéines
D) Les sels diminuent la répulsion entre les protéines

Answer 20

B et D

Question 21

Expliquer en détail la relation entre les concentrations en sels et la solubilté des protéines (Salting in, Salting out, interaction entres les ions et les protéines)

Answer 21

Ça fait sens???

Question 22

Vrai ou Faux

Le dessalage (salting out) est largement en fonction de l’hydrophobicité de la protéine

Answer 22

Vrai, car l’excès de sels en solution interagis avec les molécules d’eau. Il y a moins de molécules d’eau autour des régions hydrophobes des protéines. Ils formeront des agréats par effect hydrophobe et se précipiteront.

Question 23

Quelles sont les deux types de sels utilisés dans la précipitation des protéines.

Answer 23

Sels Chaotropiques et Kosmotropique

Question 24

Quelle est le sel le plus utilisé pour la précipitation des protéines

Answer 24

(NH4)2SO2 Sulfate d’ammonium

Question 25

Qu’est ce que le pH isoéléctrique

Answer 25

Un pH ou toutes les molécules ont une charge neutre

Question 26

Vrai ou Faux
Au pH isoélèctrique les protéines sont solubles, car ils possèdent une charge similaire

Answer 26

Faux!!!
ca fait sens?

Question 27

le pouvoir de l’eau de solubiliser une macromolécule chargée décroît avec la
concentration du solvant organique dans la solution. Pourquoi?

Answer 27

Car on réduit sa constante diélectrique: pouvoir de solvatation de l’eau pour des ions dissous
(comme les protéines)