Isolation de protéines Flashcards
Quelle est la première étape primordiale pour isoler des protéines?
Les dissoudre dans une phase liquide aka lyser les cellules afin de libérées les protéines
Citer 3 méthodes de DÉSINTÉGRATION MÉCHANIQUE afin de brisé les cellules des tissus
-Déchiquetage méchanique
-Broyage (sable, albumine)
-Homogénéisateur
-Cryolise
-French Press (haute pression)
-Sonifciation
Nommer une méthode “douce” qui permet de lyser les cellules animales et qui particilièrement efficace pour ce type de cellule. Décrivé elle consiste en quoi
La lyse osmotique
Plonger les cellules dans une solution hypotonique et la différence de concentration créera une pression osmotique dans la cellule ce qui cause son éclatement et la relache des protéines
Vrai ou Faux
Il est possible d’utiliser la lyse osmotique pour des cellules végétales et bactériennes?
Vrai, il faut lyser la paroi cellulaire d’abord!!!
Quelle enzyme est nécessaire pour dégrader la paroi cellulaire de différentes cellules
Lysozymes
Comment appelle t’on le mélange de débris cellulaire après une lyse avec l’utlisation de lysozymes
Le lysat
Expliquer qu’est ce que le SDS
(Sodium dodecyl sulfate)
Un détergent anionique solide qui peut
solubiliser les protéines et les lipides qui encadrent les membranes. Cela aidera les
membranes cellulaires à séparer et à exposer les chromosomes contenant l’ADN. SDS
libère l’ADN d’histones et d’autres protéines de liaison à l’ADN en les dénaturant.
Nommer une sérine protéase qui permet de digérer certaines protéines contaminantes lors d’une extraction d’ADN
Protéinase K
L’intégrité structurale des protéines et leur stabilité dépendent de 3 facteurs. Quels sont-ils?
pH
Température
Protéases
Pourquoi faut-il avoir une température froide (0 à 5°C) lors de l’extraction de protéine
Les protéines se dénature lentement à des températures pièces et se dénature rapidement a de hautes température.
Expliquer l’effet des protéases sur les protéines et comment peut-on limiter leur interaction avec les protéines lors de l’extraction de protéines
Les protéases peuvent hydrolyser les liens peptidiques des protéines et les dégrader. Nous pouvons utiliser des inihibiteurs de protéines pour limiter leur interaction
Quelles sont les propriétés physico-chimiques exploitées dans les différentes techniques de
séparation?
-Solubilité
-Charge ionique
-Taille moléculaire
-Propriétés d’absorption et liaisons avec d’autres molécules (spécificité)
Placé les différentes techniques de séparation avec les propriétés physico-chimiques correspondantes:
1. Ultracentrifigation
2. Précipitation
3. Chromatographie d’affinité
4. Chromatographie par échange d’ions
A.Spécificité
B.Taille moléculaire
C. Charge ionique
D. Solubilité
1.B
2.D
3.A
4.C
Expliquer “la couche d’hydration”
Interactions non-covalentes entre les molécules d’eau et les parties polaires/hydrophiles d’une macromolécule qui forme une couche.
Vrai ou faux
La couche d’hydratation augmente la solubilité d’une macromolécule
Vrai
Expliquer “l’effet hydrophobe”
Diminution de la surface de contact des surfaces hydrophobes pour minimiser les interactions avec l’eau
La solubilité des protéines dépend de 3 facteurs. Quels sont-ils?
- Interaction polaires avec le solvant aqueux
- Interaction ioniques avec les sels en solution
- forces électrostatiques répulsives entre molécules ou agrégats de charge similaire
La précipitation d’une protéine exige la formation d’….
agréats
Quelles sont les variations typiquement utilisées pour diminuer la solubilité d’une protéine
-pH
-Concentration saline
-Solvent organique
- ajout de polymère inerte
Choisiser les 2 énoncés incorrectes
A) Les sels augmentent les interactions avec l’eau
B) Les sels diminuent les interactions avec l’eau
C) Les sels augmentent la répulsion entre les protéines
D) Les sels diminuent la répulsion entre les protéines
B et D
Expliquer en détail la relation entre les concentrations en sels et la solubilté des protéines (Salting in, Salting out, interaction entres les ions et les protéines)
Ça fait sens???
Vrai ou Faux
Le dessalage (salting out) est largement en fonction de l’hydrophobicité de la protéine
Vrai, car l’excès de sels en solution interagis avec les molécules d’eau. Il y a moins de molécules d’eau autour des régions hydrophobes des protéines. Ils formeront des agréats par effect hydrophobe et se précipiteront.
Quelles sont les deux types de sels utilisés dans la précipitation des protéines.
Sels Chaotropiques et Kosmotropique
Quelle est le sel le plus utilisé pour la précipitation des protéines
(NH4)2SO2 Sulfate d’ammonium
Qu’est ce que le pH isoéléctrique
Un pH ou toutes les molécules ont une charge neutre
Vrai ou Faux
Au pH isoélèctrique les protéines sont solubles, car ils possèdent une charge similaire
Faux!!!
ca fait sens?
le pouvoir de l’eau de solubiliser une macromolécule chargée décroît avec la
concentration du solvant organique dans la solution. Pourquoi?
Car on réduit sa constante diélectrique: pouvoir de solvatation de l’eau pour des ions dissous
(comme les protéines)
