Extraction d'ADN Flashcards
Quelles sont les propriétées physico-chimiques de l’ADN utilisable pour leur purification
-polymères dont la taille varie avec le nombre de nucléotides
- composés d’une forte charge négative
- adoptent une structure en double brins
Nommer 2 facteurs qui rendent l’ADN très soluble dans l’eau
-Molécule très chargée
-Possède peu de groupes hydrophobes
Quelle est la méthode la plus populaire de précipiter les protéine
Précipitation à l’éthanol ou au isopropanole
Expliquer un protocole typique pour précipiter un échantillon d’ADN
- l’ajout de 2.5 volumes d’éthanol et 0.25M d’acétate de sodium
à une solution contenant de l’ADN - la solution est ensuite mise à -20°C pendant au moins 30 minutes
et l’ADN est récupéré par centrifugation à 10,000 rpm pendant 10
minutes à 4°C dans une microcentrifugeuse - une certaine quantité de sels sera aussi précipité avec l’ADN. Des lavages
subséquents avec de 70% l’éthanol permettra de les enlever
Expliquer la méthode de partition de phase et quelle solution est utilisé dans cette méthode
La méthode à partition de phase consiste à utiliser du phénol pour séparer des protéines de l’ADN. Les protéines seront contenus dans la phase phénolique (moins soluble) et l’ADN plus sera dans la phase aqueuse (plus soluble)
Quel gel d’élèctrophorèse est utilisé pour la séparation de l’ADN
Gel d’agarose
Pourquoi est ce que le gel de polyacrylamide ne marchera pas pour une élèctrophorèse d’ADN
L’ADN est beaucoup trop long et ne peut passée par les pores de poryacrylamide.
Nommer les 3 cycles du PCR
1)Dénaturation de l’ADN
2) Hybridation des amorces
3)Polymérisation de l’ADN
De quoi dépend la température d’hybrydation des amorces. (2)
1) De leur longueur en nucléotides
2) Nombre de nucléotides C et G
De quoi dépend la température d’hybrydation des amorces. (2)
1) De leur longueur en nucléotides
2) Nombre de nucléotides C et G
Vrai ou Faux?
Il est possible d’utiliser une élèctrophorèse avec un gel polycacrylamide pour de l’ADN de quelques centaines de nucléotides ou moins
Vrai
La séparation de l’ADN dans une élèctrophorèse dépend de leur
Masse moléculaire
Plus lourd se déplace moins loin
Plus vite se déplace plus loin
Nommer un colorant utilisé pour visualiser les bandes d’ADN après une élèctrophorèse
Bromure d’éthidium
Quelle type d’échangeurs (anionique ou cationique) devrait être utiliser pour un chromatographie par échange d’ions pour une échantillon d’ADN
Échangeur anionique
Quel est le rôle de la chromatographie par gel filtration pour un échantillon d’ADN
Déssaller les oglionucléotides
