Chromatographie Flashcards
(42 cards)
l’affinité avec laquelle une protéine se lie à un échangeur d’ions dépend de 2 facteurs.
Quels sont-ils?
pH de la solution
Concentration d’ions en solutions
Les échangeurs utilisés en chromatographie des protéines dépendent de 2 caractéristiques
Lesquelles sont-elles
La nature de leur matrice
Le type de groupement fonctionnel utilisé pour lié les protéines.
Quelles sont les 3 propriétés communément utilisées pour effectuer un fractionnement cellulaire?
Interactions ioniques
Taille
Spécificité
Lier toutes ces types de technique chromatographique selon la propriété correspondante.
1.Chromatographie par gel-filtration
2.Chromatographie d’affinité
3.Chromatographie par échange d’ions
A. Taille
B. Charge ionique
C. Spécificité
1.A
2.C
3.B
Nommer et expliquer en quoi consiste la phase stationnaire et la phase mobile.
Phase stationnaire = Substance ou le mélange est séparé
Phase mobile = Mélange qui doit être séparé
Placé ses cations en ordre qui favorisent le moins la précipitations à ceux qui favorisent le plus la précipitations.
Mg 2+, N(CH3)4+, K+
N(CH3)4+ > K+ > Mg2+
De quoi sont fait les matrices utilisées en chromatographie
Polymères insolubles sous forme de billes (Cellulose, Polyacrylamide, agarose) ils sont appelés résines
Vrai ou faux
Chromatographie par échange d’ions utilise la charge net d’une protéine à son point isoélectrique.
Faux, la protéine possède une charge en dessous ou au dessus de son point isoélectrique
Quelle type d’interaction est exploité lors d’un chromatographie par échange d’ions
Attraction élèctrostatique
Quelles sont les 2 classes d’échangeurs et quelles charges (postive ou négative) portent-ils?
Échangeur anionique avec Charge +
Échangeur Cationique avec Charge -
Vrai ou faux?
Un échangeur FORT reste pleinement chargé dans une gamme (Range) de pH beucoup plus important alors qu’un échangeur FAIBLE reste pleinement chargé dans un gamme de pH plus restreint.
Vrai
Nommer 4 types de groupements chimique utilisés dans les matrices de chromatographie
Dites s’ils sont anionique ou cationique et faible ou fort
QAE (Amine quaternaire) = Anionique Fort
sulfonate= Cationique fort
DEAE (amine tertiaire)= Anionique faible
CM (Carboxyméthyle)= cationique faible
Nommer les 3 principes d’opérations de la chromatographie
1) Liaison à la colonne
2) Lavage
3) Élution
Expliquer la relation négative des contre-ions sur les protéines lors d’une chromatographie d’échange d’ions
Les protéines lors d’une chromoatographie sont déstabilisés par des contre-ions qui peuvent se liés à la portéine ou la matrice.
Il faut modifier le pH et les concentrations pour faire en sorte que les protéines ont plus d’affinité pour l’échangeur que les contre-ions
Vrai ou Faux?
Plus l’affinité de liaison d’une
protéine pour l’échangeur est forte,
plus la migration sera retardée
Vrai
En quoi consiste le lavage
Laver le mélange de protéine avec solution tampon. Les protéines avec moins d’affinité se déplaceront plus rapidement alors que ceux qui on plus d’affinité seront retardés dans la colonne.
En quoi consiste l’élution
Nettoyer la colonne avec un tampon de concentration saline supérieur au tampon de lavage en utilisant des gradients de sels. Les ions de sels en excès se lieront aux charges de la matrice et bloqueront l’attachement de la protéine
Quelles sont les 2 types d’élution utilisés pour la chromatographie
Fractionnée et par gradients
Expliquer les types d’élutions fractionnée et par gradients
Fractionnée = ajout de tampon avec concentration de sels plus élèvés que le tampon de lavage
Gradient = Ajout de tampon avec concentration saline qui varie de façon linéaire en fonction du volume traversant la colonne.
Quells sels sont utilisés majoritairement pour faire des gradients
KCl et NaCl
Expliqué dans vos mots le principe de chromatographie par gel filtration ou tamis moléculaire (comment sont séparés les protéines)
Le tamis moléculaire est un agencement de petites billes qui possède des pores qui laisse rentré quelques petites molécules jusqu’a un certains poids (limite d’exclusion). Ces molécules traversent la colonne plus lentement. Les molécules de plus grande taille traverseront plus rapidement dans le front du tampon par les petits espaces formés par les billes.
La chromatographie par gel filtration sépare les molécules selon 2 choses. Nommer les
Taille et forme
De quoi est consititué le phase stationnaire pour la chromatographie par gel-filtration
Réseau de polymères réticulé possédant des pores laissant passé certaines molécules plus petites
Qu’est ce que la limite d’exclusion
La taille maximal dans lequel les protéines peuvent passés à travers les pores
