Activité enzymatique Flashcards
Comment un enzyme catalyse une réaction
Elle fait baisser l’énergie d’activation
Comment s’appelle l’endroit de l’enzyme ou le substrat se lie
Site actif
Qu’est ce que la cinétique enzymatique
L’étude des paramètres cinétiques d’une enzyme par le suivi de la réaction enzymatique
Parmi ces choix trouvé lui n’est pas un paramètre d’une enzyme
Vitesse maximal
Constante de Michealis-Menten
Température optimale
pH optimale
Vitesse initiale
Vitesse initiale
Nommer 4 paramètres cinétiques
Vmax
Km
pH optimales
Température optimale
L’activité enzymatique est influencée par 2 facteurs.
Quels sont-ils?
Propriétés spécifiques à l’enzyme (concentrations de substrats, activateurs et inhibiteurs)
Effets non-spécifiques (sels, tampons, pH, force ionique, température ou d’autes protéines)
Par quelle équation peut être décrite la vitesse de réaction
V=K2[ES]
Comment est appelé la constante K2
Constante catalytique (Kcat)
Que réprésente la constante catalytique (Kcat)
Nombre de molécule de substrat transformé par seconde par chaque enzyme
Qu’est ce que le Km représente et comment l’obtiens t’on?
Une mesure de l’affinité du substrat pour l’enzyme. Le Km est la concentration de substrat lorsqu’on a atteint la moitié de Vmax
Vrai ou faux plus le Km est élèvé plus l’enzyme a de l’affinité pour son substrat
Faux
Pourquoi une réaction atteint-elle un plateau (Vmax)
Lors de l’ajout d’une quantité saturante de substrat (EXCÈS) , la vitesse de réaction ne peut pas aller plus vite, car elle est limité par la quantité d’enzyme.
Expliquer la relation entre le Km et l’affinité du substrat
Un grand Km signifie qu’on a besoin d’une plus grande quantité de substrat pour staturé la moitié de la concentration enzymatique donc le substrat à moins d’affinité pour l’enzyme.
Un petit Km signifie qu’une petite quantité de substrat est nécessaire pour saturé la moitié de la concentration enzymatique. Donc plus d’affinité
À quoi sert d’étudier les paramètres enzymatiques d’une enzyme
À quantifier son efficacité enzymatique
Dans un laboratoire comment doit-on faire pour créer une courbe de michaelis-Menten
Faire plusieurs réaction enzymatique avec différentes concentration de substrat et mesurer le nombre de produits formé pour chaque réaction
Trouver la pente (ELLE DOIT ETRE LINÉAIRE) pour trouver la vitesse intiale de chaque réaction
Placer les [substrats] vs leur vitesse correspondante
Quels sont les trois types d’inhibiteurs
Compétitifs
Incompétitif
Non compétitif
Expliquer comment agis un inhibiteur compétitif sur l’activité enzymatique
compétition avec le substrat pour fixer le site actif de l’enzyme. Ils empêchent ainsi la liaison entre le substrat et l’enzyme.
Vmax inchangé
Km augmente
Expliquer comment agis une inhibiteur incompétitif sur l’activité enzymatique
lient au complexe Enzyme-Substrat (ES) mais pas àl’enzyme libre (E). Dans ce cas ils diminuent la vitesse de la réaction puisque les complexes ES sont inhibés. Toutefois, en bloquant la réaction, ils augmentent l’affinité
apparente du substrat pour l’enzyme.
Vmax diminue
Km diminue
Expliquer comment agis un inhibiteur non-compétitif sur l’activité enzymatique
lient à l’enzyme libre ainsi qu’au complexe Enzyme Substrat. Dans ce cas, la fixation entre le substrat et l’enzyme n’est pas affectée par la présence de l’inhibiteur
Vmax diminue
Km reste inchangé
Lors d’une inihibition incompétitive l’affinité du substrat pour son enzyme diminue
Vrai ou Faux
Faux
Kmax diminue lors d’une inihibition incompétitive donc l’affinté augmente
Lors d’une inhibition compétitive, l’affinité entre le substrat et l’enzyme diminue
Vrai
Comment se nomme le mécanisme où l’accumulation de produit peut compromettre la vitesse de réaction
Rétro-inhibition
Quelles sont les stratégies pour limiter la rétro inhibition lors d’un essai enzymatique
- Mesurer la réaction enzymatique pour une courte durée afin de minimiser l’accumulation du produit
- L’utilisation de hautes concentrations de substrat
- Utiliser des pH non physiologiques
- L’utilisation de méthodes très sensibles pour détecter le produit afin de minimiser sa
concentration
Vrai ou Faux
la valeur maximale de l’activité de certaines enzymes peut être très loin du pH
physiologique
Vrai
Le Vmax and Km sont influencés par 3 facteurs
pH, température et Force ionique
Nommer les 4 facteurs pour lesquels un tampon peut inhiber l’activté enzymatique
1) Tampon anionique peuvent compétitionner des substrats négatives pour l’enzyme
2)Concentration trop haute de tampon
3) Ions en solutions nécessaire pour l’enzyme peut être complexés par le tampon
4) Réduction de la force ionique optimale
Généralement, plus on augmente la température plus l’activité enzymatique augmente à un certain point
Vrai ou Faux
Vrai
Quelle est la température physiologique
37°C
Plus le temps d’activité enzymatique est court plus on peut augmenté la température maximale apparente
Vrai ou Faux
Vrai, à cause de la courte durée on peut accélérer la réaction enzymatique sans avoir assez de temps pour dénaturer l’enzyme.
Quelles sont les deux méthodes pour mesurer l’activité enzymatique
-des méthodes discontinues (flot arrêté)
-des méthodes continues
En quoi consite la méthode discontinue
Mesure l’activité enzymatique pendant un certain temps avec son substrat et arrêté la réaction.
À la fin de la réaction le produit est dosé
Quelle est la première chose à vérifier lors d’une méthode de mesure enzymatique discontinue
Vérifier l’évolution linéaire de la réaction
Pourquoi il est important de faire plusieurs mesures/plusieurs incubation d’enzyme pour trouver la vitesse initiale d’une réaction
Pour s’assurer de la linéarité de celle -ci. Une seul mesure peut sous-estimer la linéarité de celle-ci à des temps trop longs
Nommer 3 méthodes dénaturante pour arrêter un essai enzymatique
1) Précipitation avec acide trichloroacétique
2) Dénaturation thermique
3) Utilisation de SDS
Nommer 2 méthodes non-dénaturante pour arrêter un essai enzymatique
Changement de pH et ajout d’EDTA si ions métalliques nécessaires
Nommer une approche pour la détection de produit après une réaction enzymatique
Convertir un produit en un autre produit plus facile à détecter.
Nommer 2 techniques de détection du produits
1) Spectrophotométrie
2) Flurométrie
Expliquer la détection directe et indirecte
Détection directe: Un des produits de la réaction enzymatique absorbe la
lumière.
Détection indirecte: Ajoute une enzyme qui utilise le produit de la réaction pour former du NADH (qui absorbe la lumière) par couplage avec une autre réaction.
