Électrophorèse Flashcards
Définisser l’électrophorèse
La migration d’un ion dans un champ électrique
Pour qu’une molécule puisse migrer dans un gel il faut que la force de friction soit […] à la force électrique
Supérieur ou inférieur?
inférieur
Vrai ou faux
la migration électrophorétique de l’ion à travers la solution est opposée par une force de friction
Vrai
La force électrique dépend de 2 facteurs
Quels sont-ils?
La charge q et la force du champ électrique E
F=qE
La force de friction dépend de 2 facteurs
Quels sont-ils?
La vitesse de migration V et le coefficient de friction F
Quelle est la méthode d’électrophorèse la plus répandue
Électrophorèse en zones
Expliquer comment fonctionne l’électrophorèse en zones
Migration d’un échantillon contraint à se déplacer dans un phase solide (gel, cellulose our papier filtre)
Quels sont les 2 avantages de l’électrophorèse en zones
1) élimine largement l’agitation provoquée par la convection qui limite la résolution
2)requiert une quantité faible de matériel
Quels sont les 2 gels à usage commun pour l’électrophorèse?
1) Agarose
2) Polyacrylamide
L’électrophorèse sur gel utilise 2 principes
Quelles sont-ils?
La mobilité électrophorétique
Gel filtration
Quelle est la différence entre la chromatographie gel-filtration et le gel d’électrophorèse sur la vitesse de migration des particules de différentes tailles.
Chromatographie gel-filtration: Molécules plus grosses/lourdes migre plus vite que les petites
Gel électrophorèse: Molécules plus grosses/lourdes migre plus lentement que les petites
Vrai ou faux?
Plus la concentration en polyacrylamide est haute plus il y aura de pores (plus petits)
Vrai
La porosité d’un gel dépend de 2 concentrations de 2 différentes molécules
Concentration d’acrylamide
Concentration de méthylènebisacrylamide
Nommer les étapes (en ordre) pour effectuer une électrophorèse sur gel polyacrylamide.
1) Couler le mélange de polyacrylamide dans 2 plaques de verres pour être moulé
2) Placer les échantillons dans les puits moulés au préalable
3) Verser une solution tampon
4)Mettre un courant électrique de 100 à 200 Volts
Plus un gel est long […] est la résolution
Meilleure ou pire *
Meilleure
Pour quelle raison la plupart des gels d’électrophorèses utilisent un gel de concentration et un gel de séparation dans leur procédure?
Pour augmenté la résolution des bandes/résteindre les protéines dans des bandes plus minces
Expliquer le principe de l’utilisation du gel de concentration et du gel de sépration et du role des deux lors de l’électrophorèse.
Ça fait sens?
Pourquoi est ce que l’utilisation d’un gel de concentration et de séparation améliore la vitesse de migration?
Le gel de concentration possède un pH plus bas que celui du gel de séparation. Cette différence de pH fait en sorte que la glycine est neutre dans le gel de concentration et elle regagne sa charge dans le gel de séparation.
Il y une déficience en transport de charge et une plus haute résitance électrique se qui augmente le champ électrique.
Quel est l’effet du SDS sur les protéines
Le SDS peut dénaturé les protéines dans une conformation étendue et leur apporte une charge négative
Le gel SDS-PAGE possède deux grands avantages par rapport à l’électrophorèse
ordinaire.
Quels sont-ils
1) Le SDS dissout les agrégats et particules insolubles
2) Fait en sorte mobilité électrophorétique possède une relation directe avec le poids
moléculaire
Nommer 3 différentes méthodes pour visualiser les bandes de protéines
1) Bleu de coomasie
2) Nitrate d’argent
3) Autoradiographie
Si nous utilisons un Gel SDS-Page. La séparation dépendra uniquement de quel facteur?
la séparation électrophorétique du gel avec du SDS dépendra uniquement du phénomène de gel-filtration par les pores du gel
Nommer les différences entre le SDS-Page et une gel Page classique
SDS-Page
-Meilleure résolution
-Migration est linéaire avec log du poids
-Dénature les complexes protéiques
-Dénature les agrégats protéiques
Page
-Résolution faible
-Migration dépend de ratio charge/masse
-Ne dénature pas les complexes protéiques
-Ne dénature pas les agrégats protéiques
