inmunotecnicas Flashcards
microscopia
inmunohistoquimica, inmunofluoresencia, cofocal de fluoresencia,
emsa puede considerarse una inmunotecnica
al emplarse un anticuerpo especifico contra la proteina de union al acido nucleico
antigeno
molecula que induce la formacion de al menos un anticuerpo especifico, tiene uno o mas epitopes
epitopes
region de la molecula del antigeno que es reconocida por el anticuerpo, formqda por aa
anticuerpo
proteina serica conocida como IG que reconoc especificamente a un epitope del antigeno
la region contaste del anticuerpo es
es especifica de especie
un anticuerpo monocional
es un anticuerpo producido por un solo clon de linfocitos b
los anticuerpos policionales son
una mezcla heterogenea de anticuerpos producidos por diferentes clones de celulas B
inmunohistoquimica
es una herramienta para identificar y localizar antigenos en una muestra de tejido
metodo directo de la inmunohistoquimica
anticuerpo primaria especifico para el antigeno que estamos tratando de identificar, acoplado a una enzima
metodo indirecto de la inmunohistoquimica
anticuerpo primaria de una especie en contra del antigeno que estamos tratando de identificar
anticuerpo secundario, contra la Fc la especie se obtuvo del anticuerpo primaria, acoplado a una enzima
metodologia de la inmunohistologia
- fijacion
- cortes: finos por microtomo
- incubacion con anticuerpos (directo o no)
- sistema de deteccion o visualizacion
- montaje
metodo de la inmunohistoquimica que une covalentemente las moleculas proteicas a sus vecinas
fijacion
HBcAg y HBsAg
indica repliacion activa del virus
microscopia de fluoresencia
detectar especificamente algunas proteinas u otras molecula en celulas y tejidos
fluorocromo
molecula flourescente, una parte de ella absorbe la luz de una determinada longitud de onda y emite luz de otra longitud de onda mas larga
metodo directo
anticuerpo primario especifico para el antigeno que estamos tratandod e identificar, acoplado a un fluorocromo
metodo indirecto
anticuerpo primario de una especie en contra del antigeno q se esta estudiando
anticuerpo secundario acoplado a un flurocromo, reconoce especificamente la region constante de la especie donde se obtuvo el anticuerpo primario
colocalizacion
superposicion espacial entre dos etiquetas fluorescentes
contratincion de la colocalizacion
visualizacion de diferentes moleculas al mismo tiempo en una preparacion
microscopio cofocal de fluoresencia
permite obtener una imagen de la arquitectura tridemensional de una celula o tejido
q utiliza la microscopia cofocal de fluoresencia
metodos electronicos que permite enfocar un plano de una muestra eliminado la luz que proviene de las zonas fuera de foco superiores e inferiores a este plano
citometria de flujo
se emplea en el recuento y clasificacion de celulas segun sus caracteristicas: morfologicas y presencia de biomarcadores
morfologicas
tamaño, granularidad
presencia de biomarcadores
marcadores especificamente mediante anticuerpos acoplados a fluorocromos
parametros medibles por citometria de flujo, marcaje con fluorescencia
se puede detectar cualquier molecula en la celula,
las celulas pueden contarse y incluso sepradas y recuperadas
ciometria de flujo
poblaciones leucocitarias
la baja cantidad de eosinofilos y basofilos hace que en general no se definan en base a FSC y SSC
PUREZA y viabilidad de poblaciones celulares
un compuesto como el ioduro de propidio atraviesa la membrana celular alterada en celulas muertas y las tiñe
las celulas vivas no presentan fluoresencia en ese canal
ELIS permite evaluar a una proteina de manera cuantitiva
directa, indirecta, tipo sandwich
westn blot
- electroforesis
- transferencia
- inmunodeteccion
transferencia
electrotransferencia y difusion simple o pasiva
permite la deteccion mediante un anticuerpo especifico de una proteina dentro de una muestra biologica
western blot
proteina de fusion con una etiqueta de epitopo
la proteina blanco esta inalterada y se asume que conserva su funcion y localizacion normal
la etiqueta es una secuencia proteica corta que es reconocida fuertemente por un anticuerpo comercial bien caracterizado
la proteina de fusion con una etiqueta de epitopo se puede emplear para
-inmunofloresencia
-inmunoprecipitacion
el anticuerpo esta unido a un flurocromo
inmunofluoresencia
permite identificar interacciones funcionales proteina-proteina con proteinas hasta ese momento desconocidas
inmunoprecipitacion
el complejo proteico puede estar formado por varias proteinas, las cuales seran en seguida estudiadas
inmunoprecipitacion
