extraccion y cuantificacion de proteinas Flashcards
para q nos sirve extraer proteinas
secuanciacion para clonarla
expresar una proteina recombinante silvestre o con modificaciones especificas y estudiar su funcion
producir anticuerpos especificos
analisis estructurales
estudiar su funcion y refulacion
estudiar sus interacciones con otras moleculas
tipos de analisis estructurales
cristalografia de rayos x
espectroscopia de resonancia magnetica nuclear
disrupcion mecanica
de tejidos principalmnete, no necesaria si la muestra provienen de cultivo celular
disrupcion mecanica de muestra metodos
licuadora, homogenizador dounce, homogenizador de ultrasonidos, pulverizacion en nitrogeno liquido y perlas de vidrio
licuadora
la muestra se tritura mediante cuchillos rotatorios
homogenizador dounce
tubo de vidrio con piston ajustado moja las celulas por accion de corte
homogenizador de ultrasolidos
ondas de sonido emitidas por una sonda para romper la membranas celulares
pulverizacion en nitogeno liquido
la muestra se pulveriza utilizando un mortero y una almirez refrigerados
perlas de vidrio
la ruptura celular se produce por agitacion de las perlas de vidrio
biffer de lisis con
- inhibidores de proteasas
- detergente
- agentes estabilizadores
inhibidores de proteasas
cocketel de difernetes inhibidores cada uno con especificidad para diferentes protesas, evitando la degracacion global de las proteinas en el extracto
inhibidores proteasas
aprotinina, EDTA, EGTA, leupeptin, pepsitatina A y PMSF
centrifugacion de las proteinas
en el sobrenadante se encuentra todas la proteinas solubles de la celula y en el pellet las membranas y proteinas hidrofobicas de membrana
precipitacion de las proteinas solibre del sobrenadante
sulfato de amonio, no desnaturalizante
etanol y acetona
