Immunologisk metodik Flashcards
Vad menas med isotyp?
Immunoglobulinklasserna.
Vad menas med subklass?
Undergrupper av isotyperna.
Vad menas med allotyp?
Variationer hos den konstanta delen i en antikropp bland individer inom samma art.
Vad menas med idiotyp?
Variationer inom de variabla delarna hos en antikropp.
Vad är Fab?
Den antigenbindande delen.
Vad är Fc?
Den nedre halvan av antikroppen.
Vad menas med monoklonal?
En klon, så en B-cell ger upphov till kloner som är identiska.
Vad menas med oligoklonal?
Bara några få kloner (ca 2-4).
Vad menas med polyklonal?
Några kloner har dragit igång.
Hur kan antikroppar detektera antigen?
Via linjära epitoper eller via konformation.
Hur kan TcR detektera antigen?
Bara via linjära epitoper.
Hur kan en reaktion detekteras?
Genom att se vad som hänt – visuell metod – eller genom att detektera signalsubstanser.
Vad är Kd?
Dissociationskonstant.
Vad är KA?
Associationskonstant.
Hur räknas Kd ut?
(AK)(Ag) / (AkAg)
Hur räknas KA ut?
(AkAg) / (Ak)(Ag)
Vad är det KA och Kd räknar ut?
Bindningsstyrkan, men i olika skalor.
Vad innebär agglutination och varför är det relevant för den visuella metodiken?
Sammanklumpning av partiklar orsakat av antikropp-antigen-interaktion.
Vad innebär precipitation?
Antigen och antikroppar bildar immunkomplex och dessa kan också ses på visuella tester.
Vad är nefelometri?
Spridning av ljus p.g.a. antigen-antikropp-interaktion.
Vad är turbidimetri?
Mäter ljus som passerar grumlighet (som uppstår p.g.a. antigen-antikropp-interaktion).
Vad är grundprincipen för ELISA?
En antikropp eller antigen är kopplat till ett enzym och tillsammans kallas de konjugat.
Hur går direkt ELISA antigencoatad metod till?
96 brunnar coatas med antigen. Konjugatet tillsätts. Enzymet färgförändrar ett kvantifierbart substrat.
Hur går indirekt ELISA antigencoatad metod till?
Brunnarna coatas med antigen. Antikropp tillsätts utan enzym. Ett konjugat (antikropp + enzym) tillsätts. Enzymet färgförändrar ett substrat OM pat. har antikroppar mot antigenet.
Varför tvättar man mellan stegen i ELISA?
För att man inte ska mäta de antikroppar som inte bundit in till antigen.
Vad kan uppstå för problem med antigencoatad metod?
P.g.a. laddningsförhållanden kan antigenet binda in till plasten => negativt resultat.
Hur kvantifierar man med hjälp av ELISA?
Med spektrofotometri där man mäter absorbansvärde (hur mycket ljus som absorberas vid en viss våglängd).
Vad finns det mer för metoder med detektionsmarkör, än ELISA?
RIA, FEIA, CLIA.
Vilka 5 punkter tar man hänsyn till när man designar detektionssystem?
Sensitivitet, specificitet, pålitlighet, tidsåtgång och kostnad.
Hur kan man veta att man har 100 % specificitet?
Om man tar prover från individer som förväntas vara negativa och alla visar sig vara det.
Vad är grundprincipen för flödescytometri?
Man möter celler i ett flöde som man skickar ljus till av en viss våglängd mot flurokromet som sitter fäst på en antikropp och flurokromet skickar då iväg en längre våglängd som man kan se/mäta.
Vad är immunoblot?
Samma grundprincip som ELISA men antigenet har placerats ut på en pappersremsa.
Vad innebär Western blot?
Då man detekterar protein.
Vad innebär Southern blot?
Då man detekterar DNA.
Vad innebär Northern blot?
Då man detekterar RNA.
Vad bygger multiplexanalyser på?
Att man kan detektera många olika specificiteter hos antikroppar i ett och samma prov.
Vad är ALBIA?
Flödesbaserat dubbellasersystem för identifiering och kvantifiering av upp till 100 olika analyter i ett prov genom användning av polystyrenkulor.
