immunohistokemi

Question 1

varför fixeras vävnaden? vilka ämnen används vid denna process?

Answer 1

för att bevara/stabilisera vävnadens struktur/cellens morfologi
formalin (formaldehyd)-reagerar med amingrupper
alkohol-koagulerar

Question 2

vad görs efter fixeringen och hur görs det?

Answer 2

inbäddning: underlättar monteringen av vävnaden vid snittning
paraffin, fyller alla celler
direkt frysning

Question 3

vilka instrument används vid snittning?

Answer 3

mikrotom-paraffinbäddade vävnader
cryostat- snabbfrusna vävnader
vibratom- elektronmikroskop

Question 4

vad görs efter snittningen?

Answer 4

tvättning i PBS eller annan buffert
blockering av ospecifika bindningar
blockeras mha normal serum
peroxidasaktivitet i vävnader/vita bk hämmas med väteperoxidbehandling

Question 5

vad görs efter blockeringen av ospecifika bindningar?

Answer 5

inkubering med primär AK mot antigen

Question 6

vad finns det för olika typer av detektionssätt vid immunohistokemi

Answer 6

enzymatiska detektioner: HRP, horse radish peroxidase

immunokemiska detektioner: fluorescens

Question 7

vad finns det för typer av indirekta metoder vid immunohistokemi?

Answer 7

PAP: utöver primär och sekundär AK så binder en tredje ak (oftast kan ak) som gör att rekationen blir mycket starkare
avidin-biotin: avidin har mycket hög affinitet till biotin, biotin konjugeras med en ak, detekteras med HRP eller FITC