Flödescytometri Flashcards
vad kan mätas med flödescytometri?
cellstorlek cytoplasmatisk granularitet DNA/RNA mängd antigen på cellens yta DNA cellcykel cytoplasmatisk Ig genexpression
beskriv instrumentuppbyggnad för flödescytometer
celler passerar ett kapillärrör
sprutas vidare mha en bärarvätska (sheat fluid)
celler passerar en och en förbi mätpunkten (hydrodynamisk fokusering)
optik:
när cellen träffas av laserljuset då emitteras ett ljus som kommer att samlas /fokuseras av en lins
ljuset passerar vidare genom flera linser/filter
specifika våglängder som passerar de olika filtrerna detekteras med en optisk detektor
beskriv fuorescens
elektron träffas av ljus-> excitation till högre energinivå-> elektron hoppar tillbaka till grundnivå-> foton med högre energinivå emitteras= fluorescens
vad visar forward scatter?
magnituden av FC är överlag proportionellt mot cellstroleken
diffraktion (böjning av ljus)
konverterar intensiteten av ljuset till volt
voltpulsen konverteras till små punkter i en plot
vad visar side scatter?
visar cellens komplexicitet och granularitet, beror på laserns refraktion (brytning vid övergång av brytningsindex) eller reflektion
identifikation av granula och nukleus
vad är en scatter plot?
histogram
två-dimensionell dotplot
vad görs vid överlappning av våglängder?
spektralt överlapp->falskt positiv signal-> löses med kompensation
använder standardiserade kulor (compbeads)
vilka antigen är de vanligaste vid flödescytometri av blod?
CD3: T-celler CD19: B-celler CD4: T-hjälparceller CD8: cytotoxiska T-celler CD56: NK-celler
fenotypning: CD25: IL-2
vad innebär gating?
dra en box (gate) runt en cellpopulation av intresse i en dotplot
därefter kan populationen analyseras t.ex. granularitet, receptorer, gener
vad finns det för andra applikationer av flödescytometri?
sortering av olika celltyper beroende på egenskaper
