Histology Flashcards
Tissu nucléaire = pos/neg? Acide/basique? , ❤aime colorant basique/acidique? et acidophilie ou basophilie?
Negatif, acide, aime colorant basique, donc basophilie
Tissu non-nucléaire = pos/neg? Acide/basique? , aime colorant basique/acidique? et acidophile ou basophilie
Positif, basique, aime colorant acide , donc acidophile
Colorant positif = basique , est un colorant…..
Colorant cationique
Colorant negatif = acide , est un colorant…..
Colorant anionique
Colorant + mordant =
Laque
- Coloration non nucléaires, du principalement au protéine : ont un groupement terminal….
- Cette charge dépend du pH
1.Protéine peut être soit + (aminé NH2+) ou - (carboxyle COO-) ou les deux (amphotère)
- pH 6 = Neutre pour les protéines
pH plus 6 = protéine - = aime colorant cationique
pH moins 6 = protéine + = aime colorant basique
Comment ralentir suroxydation (HE)
L’ajout HCl
- Hématoxyline oxydé =
2. Suroxydé =
- Hématéine
2. Oxyhématéine
*RT
Avantage et désavantage d’un paraffine avec point fusion bas
Point de fusion bas
- avantage: plus facile a faire des rubans
- désavantage: mauvais support pout des tissus dur et sections minces plus difficile à obtenir
*RT
Avantage et désavantage d’un paraffine avec point fusion élevé
Point de fusion élevé
- avantage: meilleur support pour tissu dur et plus facile à obtenir des sections minces
- désavantage: plus difficile a faire des rubans
Durcissement de la paraffine, Pour une cristallisation uniforme on doit…
Attendre que la plaque réfrigérante soit bien froid ~4oC
Comment oriente une pièce avec l’encre de chine?
Tu veux voir la partie avec l’encre et sans l’encre en même temps
Erreur plus fréquente lors enrobage
Orientation du spécimen
Tissu trop froid cause lors enrobage cause
Formation d’un halo autour la pièce, le tissu ce détache de la paraffine pendant la coupe
Refroidissement trop vite du bloc cause.. lors enrobage
Bloc à surface concave
Refroidissement trop lent cause.. lors enrobage
Cristallisation irrégulière
Tissu d’apparence molle, morceau sent comme le xylène
- cause
- précention
- retrait/correction
Cause: trop épais ou le tissu est compresser par le cassette
Prévention: coupe plus mince, assure bien fixé, fair sur le circulateur fonctionne bien
Retrait/correction:
- coupe plus mince et remettre cassete à traiter ( xylène, tetrahydrofurane, xylene, paraffine/imprégnation et renrober)
- Fixation incomplète: fondre parraffine, circulateur, demarre nettoyage, passer manuellement 95 et 70%, mettre formol et recirculer
enrobage ,Contamination:
Cause
Prévention
Cause: transfert de fragments de tissu d’un autre spécimen
Prévention: nettoyer pinces et ouvrir une seule cassette à la fois
enrobage Morceaux de tissu manquants:
Cause
Prévention
Cause: manque attention ou erreur à la salle de coupe
Prévention: noter # de fragments sur cassette, vérifier sur le couvercle de la cassette avant la jeter
Et attention de l’utilisation lens paper ou tea bag
Pourquoi congeler?
STAT, le patient est dans la salle d’opération
*RT
Comment on maintien le tout? cryostat
- Décongeler le cryostat
- Nettoyer
- Lubrifie les partie mécaniques
- Si le mécanisme devient raide= traiter avec alcool 100%, assécher puis lubrifier
*RT maybe Troubleshoot 1. Section adhère à la plaque 2. Section frottent la plaque 3. Section avec égratignures 4. Section ne glisse pas entre plaque et couteau
- Plaque trop chaud
- plaque trop avancé par rapport au couteau
- Plaque endommagé
- Plaque trop éloignée
circulation
Étapes (3)
- Dèshydratation (alcool)
- Éclaircissement (xylène)
- Imprégnation (paraffine)
Bains déshydration
Éthanol : 70%, 95%, 100%, 100%, 100%
Tissu fragile ex cerveau ou embryon : 30% et non 70%
*RT
Quoi on peut ajouter dans le dernier bain d’alcool pour verifié si il y a de l’eau?
Sulfate de cuivre anhydre, bleu=présence d’eau
*RT
Agents déshydratant qui est un solvant universel
Tétrahydrofurane (THF), très utile lorsqu’on reprend déshydratation et éclairssement
Présence de précipités dans la chambre et les tubulures du circulateur
-cause
RT *-prévention
RT *-retrait/correction
Cause: formol-zinc ou tamponné
Prévention: débute déshydratation 60% et pH moins de 7
Retrait/correction: rinçant chambre et tubulures avec acide acétique 5%
ciruclation, Déshydratant excessive
- apparence
- cause
- prévention
Apparence: microchatter
Cause: trop longtemps en déshydratation
Prévention: diminuer le temps en déshydratation
Circulation inadéquate
- Apparence
- Cause
- Prévention
- Apparence: pauvre coloration
- Cause: l’eau dans le tissu lors éclaircissement ou présence d’agent éclaircissement (dilué), trop chaud et problème mécanique
- prévention: assurer l’alcool 100% est pur, chaleur seulement pour paraffine…
circulation, Dessiccation (assèchement)
- cause
- prévention
Cause : tissu laissé dans l’air libre
Correction: enlever plus de paraffine possible et placer le tissu dans la solution réhydratante
microtome, Angle de dégagement trop grand cause…(6)
Grattage du bloc Pas de ruban Coupe s'enroule Coupe se déchire Chattering Ondulation
microtome, Angle de dégagement trop petit cause… (4)
- Coupe comprimées
- Coupes plissées
- Coupe décollent du rasoir et adhèrent au bloc
- Coupe d’épaisseur inégale(mince à épais)
microtome, Ruban de section est incurvé, 4 causes et correction
Cause
- Bords du bloc ne sont pas parallèles
- Bord du bloc et pas parallèle au couteau
- Surplus paraffine sur côté du bloc
- Couteau émoussé
Correction
- Aligner le bloc
- S’assurer le bloc est parallèle du couteau
- Enlever surplus paraffine
- Déplacer/remplacer couteau
microtome, La surface du bloc n’est pas sectionnée également
1 cause et correction
Cause
1. Le porte-bloc/bloc pas parallèle au couteau
Correction
1. Assurer la surface du bloc est parallèle avec le couteau
microtome, Troues dans la section
4 causes et correction
Cause
- Attaque de bloc trop aggressive
- Déshydratation excessive
- Air dans le tissu lors l’imprégnation
- Imprégnation incomplète du tissu ou mauvais circulation
Correction
- Rabotage plus douce, et trempé bloc dans l’eau glacée
- Tremper le bloc dans l’eau glacé
- Reimprégner
- Reimprégner ou recirculer
microtome, Aucun formation de ruban
5 cause et correction
Cause
- Couteau émoussé
- Paraffine trop dure
- Angle de dégagement trop grand
- Température trop bas
- Débris sur le couteau
Correction
- Déplacer/remplacer couteau
- Remplacer avec la paraffine avec point fusion plus bas
- ajuster l’angle de dégagement (diminue)
- Ajuster la température
- Nettoyer la lane avec un peu de xylène
microtome,
Sections adhèrent au bloc
4 cause et correction
Cause
- Couteau émoussé
- Angle de dégagement trop faible
- Température trop élever
- Paraffine trop molle
Correction 1. Déplacer/changer couteau 2 augmente angle dégagement 3. Ajuster la température de la pièce 4. Utiliser une paraffine plus dure
microtome,
Présence d’ondulation (washboarding)
4 cause et correction
Cause
- Couteau ou bloc pas serré
- Pièces du microtome trop usées
- manche du microtome sortie a son maximum
- Angle de dégagement trop grand
Correction
- Serrec le bloc ou lame du couteau
- changer les pièces
- Rentrer la manche
- Réduire l’angle de dégagement
microtome, Chatter ou microvibration
5 causes et corrections
Cause
- Tissu trop déshydraté
- manque d’hunidité dans le tissu
- Couteau émoussé
- Angle de dégagement trop grand
- Coupe trop rapide
Correction
- Vérifier la cédule de l’appareil à circulation
- Mettre le bloc dans l’eau glacé
- Changer le couteau
- Réduire l’angle de dégagement
- Réduire la vitesse de coupe
microtome, Sections alternent entre épaisse et minces
2 cause et correction
Cause
- Angle de dégagement trop petit
- Défaut dans le mécanisme du microtome
Correction
- Augmente l’angle dégagement
- Vérifie le fonctionnement du mécanisme
microtome, Sections comprimées
6 cause et correction
Cause
- Couteau émoussé
- Couteau avec débris de paraffine
- Paraffine derrière couteau
- Angle de dégagement trop faible
- Température ambiante trop élevée
- Coupe trop rapide
Correction
- Déplacer ou changer le couteau
- Nettoyer le couteau
- Nettoyer le tout
- Augmenter l’angle de dégagement
- Diminuer la température
- Plus lentement
microtome, Présence de stries
2 cause et correction
Cause
- Couteau encoché à un endroit
- Particules dures dans le tissu ou dans le paraffine
Correction
- Déplacer ou changer le couteau
- Décalcifier pour enlevé calcium
microtome, Sections s’envolent et se collent aux objects
1 cause et correction
Cause
1. Électricité statique
Correction
1. Humidifier l’air
microtome, Sections s’enroulent
3 causes et correction
Cause
- Couteau émoussé
- Angle de dégagement trop grand
- Épaisseur des sections trop grande pour le.type de paraffine
Correction
- Déplacer/changer le couteau
- Réduire l’angle de dégagement
- Réduire l’épaisseur des sections
Température
- plaque chauffante
- cerveau (tissu délicate)
- imminohisto
- bain
- 60oC
- 37oC
- 40oC
- 5 à 10 sous le point fusion du paraffine
etalement, Temps d’exposition avec l’eau cause..
Gonflement du tissu, apparence terre desséchée
etalement, Température de l’eau trop élever cause… et trop bas cause…
Trop haut : terre desséchée
Trop basse: aplanissement incomplet
Volume de fixateur requis
20x plus que la pièce
Ce que sa veut dire fixation par couche?
Le tissu = trop épais donc le milieu nest pas fixer
Nomme les 5 pigments artéfacts, aussi le retrait et prévention
- pigment formol(brun)
- retrait : solution alcoolique et acide pictique
- prévention : fomol tamponné - Pigment mercure(brun-noir)
- retrait: iode alcoolique et thiosulfate de sodium
- prévention : éviter le mercure - Pigment chrome (rouille,brun,noir)
- retrait : alcool acide
- prévention: eau courante - Pigment picrique(jaune)
- retrait : thiosulfate de sodium ou carbonate de lithium ( blanchissement)
- prévention: évite l’acide picrique - Pigment carbone(noir)
Retrait/prévention= rien (deja la)
Quoi colore les noyaux?
Hématéine de harris
Quoi fait la différentiation des noyaux?
Alcool-acide
Quoi cause le bleuissement des noyaux?
Carbonate de lithium
Quoi couleur les éléments non nucléique
Éosine
HE :Manque de détail nucléaires
- Apparence
- Cause
- Prévention
- Noyau semble brouillés ou boueuse
- Fixation incomplet
- Fixer les tissus complètemen
HE :Noyau trop pale
- Cause
- Prévention
- Correction
- Hématoxyline trop faible
- Plus longtemps dans l’hématéine
- recolorer
HE :Noyau trop foncé
- Cause
- Prévention
- Section top épais ou trop longtemps dans hématoxyline
2. assure bonne épaisseur, et moins temps dans hématoxyline
HE :Noyau de couleur rouge-brun
- Cause
- Prévention
- Hématoxyline pas bon ou skipper étape bleuissement
2. Vérifier l’oxydation de l’hématoxyline et assure un bon bleuissement
HE :Cytoplasme pale
- cause
- Prévention
- pH plus que 5, section trop mince ou trop rester dans l’alcool
- Acidifier éosine
HE :Précipité bleu-noir
- Cause
- Prévention
- Couche métallique dans hématoxyline ramasser sur la lame
2. Filtrer
HE :Eau ou coupe aspect brumeux/laiteux
- Cause
- Prévention
- Présence xylène dans l’eau et la coupe
2. Bonne rotation des bains d’alcool
Grocott
- Mise en évidence
- Résultat attendus
1. Mycose 2. - Contour mycose = noir -intérieur mycose = gris - fond = vert
Bleu de prusse
- Mise en évidence
- Résultat attendus
- Notes
1. Fer ferrique Fe3+ / hémosidérine 2. -fer = bleu -autre rose 3. Utilise pas matériel métallique, et solution ferrocyanure préparé immédiatment avant l'emploi
Bleu de turnbull
- Mise en évidence
- Résultat attendus
- Fer ferreux Fe2+
2.
-fer = bleu
-autre = rose
Masson-fontana
- Mise en évidence
- Résultat attendus
- Notes
1. Mélanine (granulation argentaffine) 2. -mélanine = noir Autre = rose 3. Pigment formol = faux positif
Fouchet
- Mise en évidence
- Résultat attendus
- Bilirubine
2.
- Bilirubine = vert
-fond jaune
Von kossa
- Mise en évidence
- Résultat attendus
- Calcium
2.
- calcium = noir
- fond = rouge
Rhodamine
- Mise en évidence
- Résultat attendus
- Cuivre
2.
-cuivre = rouge
- autre = bleu
Bleu de toluidine
- Mise en évidence
- Résultat attendus
- Mastocyte
- mastocyte = violet foncé
- fond = bleu
- mastocyte = violet foncé
Huile rouge O
- Mise en évidence
- Résultat attendus
- Lipide neutre
2. Rouge
Noir soudan B
- Mise en évidence
- Résultat attendus
- Lipide neutre mais plus spécifique pour les phospholipides
- Noir
APS
- Mise en évidence
- Résultat attendus
- Aldéhyde (polysaccharides neutres et membrane basale)
2.
-glycogène et membrane basale =magenta
- autre = bleu
APS-D
- Mise en évidence
- Résultat attendus
1. Glycogène 2. -membrane basale = magenta -glycogène = incolore -autre = bleu
APS
- Type de reaction
- Oxydation par..
- Réaction de …
- Enzyme
- Pas adhésif à base …
- Histochimique
- Acide périodique
- Schiff
- Diastase (troube dans la salive)
- Amidon
Bleu alcian pH 2.5
- Mise en évidence
- Résultat attendus
- Mucopolysaccharide acides et glycoprotéine sulfaté et carboxylé
2.
-mucines acide = turquoise
-autres = rose
Bleu alcian pH 1.0
- Mise en évidence
- Résultat attendus
- Mucopolysaccharide acide et glycoprotéine sulfaté SEULEMENT
2.
- mucines acide sulfaté = turquoise
- autre = rose
Rouge congo
1. Mise en évidence
- Amyloïde
Gordon et sweet
- Mise en évidence
- Résultat attendus
- Réaction
- Étape imprégnation
1. Fibres réticulines 2. - réticuline = noir - autre = rose 3. Argyrophile
Étapes 1. Oxydation 2. Sensibilisation Seulement pour argyrophile 3.imprégnation 4. Réducteur 5. Virage 6. Réducteur 7. Contrecolorant
Cette colorant utilise un méthode d’imprégrénation à l’argent est courante pour la mise en évdense des champignons
Grocott
Quel colorant : le fer ferreux libéré du tissu réagit avec le réactif pour produire un précipité bleu
bleu de turnbull
Quel colorant : les fibres de collagène sont différenciées du muscle lisse avec e type de coloration
trichrome de masson
Quel colorant : les lipides colorés par cette méthode sont de couleur rouge
huile rouge O
Quel colorant : il est possible de colorer en bleu les mucopolysaccharides acides carboxylés et sulfatés dans une mêm section de tissu en utilisant cette méthode
bleu acian pH 2.5
Quel colorant : cette méthode est utilisée pour mettre en évidence les fibres élastiques dans un tissu comme l’aorte
hemateine de verhoeff
Quel colorant : cette méthode est utilisée principalement pour mettre en évidence les pigments de cuivre
rhodamine
quel couleur le colorant donne: suite à la coloration à l’hématéine de Harris et éosine les noyauxdevraient apparaitre
bleu
quel couleur le colorant donne: sur une coupecolorée au trichrome de masson, ls fibres musculaires devraient apparaitre
rouge/magenta
quel couleur le colorant donne: de quelle couleur la méthode du trichrome de masson devrait en théorie colorer les noyaux?
noir
quel couleur le colorant donne: suite à une méthode d’imprégnation à l’argent, les fibres de rticuline dervraient apparaitre
noir
quel couleur le colorant donne: suite à une réaction au APS et diastase, le glycogène devrait aparaitre
incolore