Brainscape's Knowledge GenomeTM

Browse over 1 million classes created by top students, professors, publishers, and experts.


See full index

Histologie > Histologické metody > Flashcards

Histologické metody Flashcards

1
Q

Co je to ECM?

Ze kterých složek se skládá?

A

Extracelulární matrix (tekutina)

bohatá na Na(+) ionty, proteiny a ostatní organické látky

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
2
Q

Popiš jednotlivé postupy přípravy tkáně pro studium.

Jakým způsobem se získává tkáň pro mikrokopování?

A

Fixace, odvodnění, projasnění, prosycení, zalévání

krájení mikrotomem na jednotlivé řezy

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
3
Q

Popiš proces fixace

A

Malé kousky vzorku se rozpustí v organickém rozpouštědle, které denaturuje a sterilizuje proteinovou složku vzorku

mezi nejběžnější rozpouštědla patří formaldehyd a glutaraldehyd

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
4
Q

Popiš proces odvodnění

A

Stabilizovaný vzorek je rozpouštěn v roztocích se vzrůstající koncentrací alkoholu (až je nakonec rozpuštěn v čistém ethanolu, ve kterém se stane neprůhledným)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
5
Q

Popiš proces projasnění

A

Do roztoku ethanolu je přidáno organické rozpouštědlo, tkáň je v roztoku znovu viditelná

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
6
Q

Popiš proces prosycení

A

Roztok organického rozpouštědla a ethanolu je smíchán s parafínem nebo pryskyřicí

za teploty 52-60°C dojde k prostoupení parafínu vzorkem (ztuhne)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
7
Q

Popiš proces zalévání

a jeho následnému přikrojení

A

Parafínem obalený roztok se vloží do roztoku parafínu a nechá se ztuhnout

přebytečný ztuhlý parafín je odkrojen za vzniku parafínového bločku

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
8
Q

Jaký je klinický význam biopsie?

Jaké zařízení se na stabilizaci vzorku používá?

A

odhalení patogenních tkání na základě histologických vyšetření (vhodné např. při operacích nebo jako prevence)

zmrazení (kapalný dusík), krájení (kryostat) či obalení inertním kovem

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
9
Q

Jaké 2 základní skupiny barviv rozlišujeme?

Uveď zástupce u každé skupiny.

Vysvětli značku HE v souvislosti s těmito skupinami.

A
  1. Bazofilní – reagují se záporně nabitými částicemi (fosfátové zbytky, záporně nabité proteiny)
  2. Acidofilní (eosinofilní) – reagují s kladně nabitými částicemi (NH3(+) skupiny AMK (mitochondrie)

bazofilní – hematoxylin, acidofilní (eosinofilní) – eosin

HE – Hematoxylin-eosin zbarvení (hematoxylin barví fialově, eosin ružově až červeně)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
10
Q

Jaký je princip PAS reakce?

Jakým zbarvením je cílová tkáň vybarvena?

A

Periodic Acid Shift – detekce hexos v sacharidech

purpurová až červenofialová

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
11
Q

Jakým způsobem lze detekovat lipidy ve vzorku?

Při jakém zpracování se naopak lipidy ztrácejí?

A

Zmrazenou tkáň nařezat na kryostatu a obarvit příslušným lipofilním barvivem, např. sudanovou černí.

Za vyšších teplot, působením organických rozpouštědel

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
12
Q

Jaké jsou 3 základní složky světelného mikroskopu?

Na které složce závisí zvětšení obrazu?

A
  1. Kondenzor
  2. Objektiv
  3. Okulár

Na objektivu

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
13
Q

Co znamená zkratka CCD?

A

Charge-coupled-device

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
14
Q

Jaká je maximální rozlišovací schopnost světelného mikroskopu?

Lze světelným mikroskopem pozorovat jednotlivé mitochondrie?

A

přibližně 0,2 mikrometru

Ne, nejde. Mitochondrie jsou na to moc malé.

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
15
Q

Jaký je princip fluorescenční mikroskopie?
K čemu se využivá?

Co znamená zkratka DAPI?

Jaká barviva se pro fluorescenční mikroskopii používají?

A

Vzorek je ozářen zářením o krátké vlnové délce, které excituje elektron a vyvolá fluorescenci. Vyzařované světlo je pohlcováno mikroskopem a zobrazováno na černém pozadí (skrze speciální filtr).
Využití nachází zejména při identifikaci jaderných struktur – chromozomů, genů a molekul DNA.

4,4,-diaminido-2-fenolindol

akridinová modř (DNA, RNA), DAPI (DNA)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
16
Q

Jak se od sebe liší konvenční světelná mikroskopie a mikroskopie s fázovým kontrastem?

Jak se od nich liší diferenciální interferenční kontrast (DIC)?

A

Histologické preparáty jsou průsvitné a mají stejnou optickou hustotu. Proto jsou neobarvené preparáty v konvenční světelné mikroskopii málo zřetelné. Mikroskop s fázovým kontrastem dokáže měřit různou energii světla (způsobenou odlišným lomem při průchodu vzorkem) a v důsledku toho lépe vykreslit snímek (tmavší a světlejší oblasti přímo úměrně intenzitě světla).

DIC je 3D verze mikroskopie s fázovým kontrastem

17
Q

Na jakém principu závisí konfokální mikroskopie?

K čemu se tato metoda hodí?

A

Kalibrovaný vzorek odráží světlo skrze čočku na zrcadlo, které světlo nasměruje na detektor. Ten je však ohraničen clonou, která propustí pouze úzký pruh záření – zvyšuje kvalitu obrazu.

K generaci 3D vzorků.

18
Q

Jaké jsou základní druhy elektronové mikroskopie?

V jakém parametru se liší?

Jaká je maximální rozlišovací schopnost elektronové mikroskopie?

A
  1. TEM (transmisní elektronová mikroskopie)
  2. SEM (skenovací elektronová mikroskopie)

Zatímco TEM vytváří 2D obraz, SEM vytváří 3D obraz

Okolo 3 nm.

19
Q

Jaký je princip TEM a SEM?

V čem mají výhodu oproti světelné mikroskopii?

A
  1. TEM: Elektrony urychlené elektromagnetickým polem jsou pouštěny na vzorek. Některé elektrony skrze vzorek projdou a jiné se pohltí. Nepohlcené elektrony doputují na CCD a vytvoří 2D obraz.
  2. SEM: Elektrony urychlené elektromagnetickým polem jsou pouštěny na vzorek (jejich průtok je regulován skenerem podobně jako v konfokálním mikroskopu). Odražené elektrony jsou absorbovány detektorem a vytvoří 3D obraz.

Mají řádově vyšší rozlišovací schopnost.

20
Q

Jaký je princip polarizační mikroskopie?

Které látky jsou viditelné v polarizačním mikroskopu?

A

Polarizované světlo prostupuje vzorkem, který světlo stáčí, a tak vytváří obraz.

Pouze opticky aktivní látky.

21
Q

Jaký je princip autoradiografie?

Které markery se zpravidla používají?

A

Radioaktivní látka emituje záření, které redukuje AgBr na Ag, které se ukládá v místech záření. Ložiska stříbra se pak vyskytnou na TEM nebo světelném mikroskopu.

Radioizotopy vodíku, uhlíku a dusíku.

22
Q

Jakým způsobem lze pozorovat tkáňové kultury?

Co to je primární buněčná kultura?

Kde nacházejí buněčné kultury uplatnění? Co to jsou HeLa buňky?

A

Pomocí světelné mikroskopie s fázovým kontrastem.

Jedna vrstva buněk na živném médiu po vložení do misky.

V patologii, virologii či genetice. První vypěstované buňky z rakoviny děložního krčku Henrietty Lacksové v roce 1951.

23
Q

K čemu slouží enzymová histochemie?

Jak je třeba vzorek pro tuto metodu připravit?

Jaký je mechanismus histochemické reakce?

A

K lokalizaci buněčných struktur pomocí specifické enzymové aktivity.

Enzymy snadno denaturují, proto je nejvhodnější zmražení a slabá fixace.

  1. vzorek je ponořen do vhodného roztoku ze substrátem.
  2. enzym reaguje se substrátem za vzniku produktu.
  3. v případě bezbarvého produktu je do roztoku přidáno barvivo.
  4. lokalizaci produktu lze pozorovat světelnou mikroskopií.
24
Q

Jakými způsoby lze vizualizovat specifické molekuly v tkáni?

Který způsob související s proteiny lze také aplikovat?

Uveď, s jakými molekulami reagují následující látky: faloidin, protein A, lektin

A
  1. autoradiograficky
  2. skrze fluorochromy
  3. enzymaticky (nejčastěji peroxidáza)
  4. těžkými kovy (Au, Pb apod.)

Imunohistochemie a hybridizační techniky skrze cDNA

  1. faloidin – reaguje s aktinem
  2. protein A – váže se na Fc protilátky (lokalizace buněčných struktur)
  3. lektin – váže se na sacharidy (prezence glykoproteinů a sacharidů)
25
Q

Jaký je rozdíl mezi přímou a nepřímou imunohistochemickou metodou?

Do jaké rodiny proteinů patří protilátky?

Jaký je rozdíl mezi polyklonálními a monoklonálními protilátkami?

A
  1. Přímá metoda spočívá v tom, že do roztoku z označenou protilátkou se ponoří vzorek s antigenem. Označená protilátka se naváže na antigen a lokalizuje ho. Místa jsou viditelná ve světelném mikroskopu.
  2. Nepřímá metoda spočívá v tom, že do roztoku s neoznačenou protilátkou se ponoří vzorek s antigenem. Neoznačená protilátka se naváže na antigen. Poté se přidá roztok s protilátkou proti protilátce (která je označená), ta se ve větší míře naváže na protilátku a zesílí jeho lokalizaci. Je také viditelná ve světelném mikroskopu.

Do rodiny imunoglobulinů (globulární proteiny).

polyklonální protilátky – každá protilátka se váže na specifickou část proteinu
monoklonální protilátky – protilátky mají nižší specifitu (váží se na více míst proteinu)

26
Q

Co znamená pojem in situ hybridizace?

Jak je třeba vzorek k této metodě připravit?

K čemu je tato metoda dobrá? Jak by mohla tato metoda být použita pro diagnostiku HPV?

A

DNA podobná cDNA se s ní spojí (udělá dvoušroubovici) a nechá se proliferovat. Značená cDNA se pak lokalizuje.

DNA je třeba nejprve rozplést (denaturovat) a poté spárovat s cDNA.

K nalezení specifické sekvcene DNA (geny), lokalizaci genu.
Při diagnostice HPV je do buňky vložena cDNA pro HPV. Při prezenci HPV se cDNA spáruje a na mikroskopu jsou vidět charakteristicky zbarvená jádra.

27
Q

Co je tzv. artefakt?

V jakém rozlišení se zobrazí pod světelným mikroskopem tenké střevo?

Které faktory mohou artefakt vytvořit?

A

Jedná se o porušený histologický snímek vlivem narušení zkoumané tkáně.

Ve 2D, pouze pomocí TEM a konfokální mikroskopie lze udělat 3D snímek.

  1. smrštění buněk vlivem fixačních činidel (alkohol, formaldehyd, glutaraldehyd apod.)
  2. teplo
  3. ztráta buněčné hmoty (vlivem fixačních činidel)
  4. přehyby řezů
  5. sraženiny barviva

Histologie (21 decks)

Brainscape helps you reach your goals faster, through stronger study habits.
© 2024 Bold Learning Solutions. Terms and Conditions