FERM -- Chapter 3: Isolatie, Bewaring, Verbetering Flashcards
Wat betekent GRAS?
Generally Recognized (/Regarded) As Safe Dit is een label dat belangrijk is voor de toepassingen van fermentatie in de voedingsindustrie Voor GMO's en pathogenen kunnen nog andere maatregelen nodig zijn.
Wat is isolatie?
in de context van deze cursus
Verkrijgen van pure/gemengdee culturen, om dan te beoordelen welke culturen het gewenste product produceren (in het geval van fermentatie) of de gewenste reactie doen plaatsvinden (in het geval van bioconversie).
Waar moeten we op letten bij het kiezen van een cultuur?
Het moet economisch haalbaar zijn:
Compromis tussen
- productiviteit
- economische beperkingen
Wat zijn de criteria voor de keuze van een organisme?
- Gebruik lage-kost en gemakkelijk verkrijgbare koolstofbronnen (moet hierop kunnen leven dus)
- Genetisch stabiel of vatbaar voor genetische manipulatie
- Productiviteit en gemak om het product eruit te halen
- Makkelijk om cellen te breken indien het product intracellulair is
- Zo weinig mogelijk ongewenste bijproducten
- veilig, niet-pathogeen, niet-toxisch
- Andere eigenschappen (extreme omstandigheden nodig/bestendig, warmte nodig – koelingskosten)
Waar kunnen we micro-organismen halen?
- Isolatie uit natuurlijke milieus: bv uit bodem
- Kopen uit cultuurverzamelingen (“kweekcollecties”)
(- supermarkt: bv. yoghurt die on purpose of niet, melkzuurbacterien bevatten)
Wat is het principe van de isolatieprocedure?
De bevordering van de groei van de meest gewenste micro-organismen
- > substraten en omstandigheden zo selecteren dat bepaalde microben waarin we niet geinteresseerd zijn uitgesloten worden. En om de groei van de gewenste micro-organismen te bevorderen.
- > de procedure(s) ontwerpen om gewenste micro-organismen te selecteren
Wat is het principe van selectieve verrijking?
Het aantal aan gewenste soort(en) micro-organismen verhogen ten opzichte van de andere micro-organismen.
Dit kan gedaan worden door het eerste te verhogen of het tweede te verlagen (of een combinatie).
Dit kan bv. gebeuren door een bepaald substraat te gebruiken of bepaalde inhibitoren toe te voegen
Leg principe uit van screening en teken dit.
Op een medium wordt een targetcel of onoplosbare proteine geplaatst (zichtbaar). Dan brengt men micro organismen aan hierop. Indien er bij een kolonie geen proteinen meer te zijn zijn, dan weten we dat deze een enzym produceert voor dat proteine. Indien er geen verandering is dan produceert het niet die enzymen (analoog antibiotica)
Leg het principe uit van screening van AAB
Acetic Acid Bacteria
Indien men op een GYC medium (glucose, yeast, CaCO3) microorganismen plaatst, zal er rond de microorganismen die azijnzuur produceren ook een cirkel te zien zijn zoals bij de andere screening methodes omdat de CaCO3 oplost in de azijnzuur.
Wat zijn de voor- en nadelen van kweekcollecties?
+ bespaart tijd en geld in vergelijking met isolatie
+ Soms exact de gewilde eigenschappen
- concurrentiebedrijven kunnen ook aan deze micro-organismen geraken
Wat is preservatie?
Behoud/bewaring Bewaren van culturen op zo'n manier dat - genetische verandering niet plaats zal vinden - ze beschermd van contaminatie zijn - ze in levensvatbare conditie blijven
Welke methodes van bewaring zijn er?
- Bewaren op lagere temperatuur
- Gedroogd bewaren
Wat zijn agar slants? (schuine agar)
Buisjes waarin men schuin agar heeft laten stollen waarop men staal kan aanbrengen. Deze worden dan gekoeld bewaard (koelkast of vriezer).
Men moet elke 6 maanden een subcultuur maken: een deel van het 6 maanden oud staal wordt overgabracht op een nieuw schuin medium en opnieuw bewaard in de koeling.
Men kan ook nog een steriele mineraalolie in het buisje toevoegen die gebruikt wordt om uitdroging en/of contaminatie te voorkomen.
Wat houdt bewaring in vloeibare stikstof in?
In vloeibare stikstof is het -150 tot -196 graden. Bij deze temperaturen gaan metabolische activiteiten heel traag/niet gebeuren.
Wordt gebruikt voor:
schimmels, bacteriofagen, virussen, algen, gisten, dierlijke
en plantencellen en weefselcultuur
(Indien freeze-drying geen optie is) – ivm kosten van N2 (l) is freeze drying vaak de betere methode
Wat is de procedure voor vloeibare stikstof bewaring (cryopreservation)?
- Laat medium groeien tot eind-exp-fase (of begin stationaire)
- cultuur toevoegen aan een klein buisje (ampul)
- Hierin voegt men glycerol (antivries toe)
- Dan kan men het buisje dichtsmelten
- Bewaren in vloeibare stikstof
Het kan ook in speciale vriezers (-80 graden) bewaard worden (iets hogere T dan vloeibare stikstof maar veel lager dan een gewone vriezer)
