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Bioquimica > Espectrofotometria > Flashcards

Espectrofotometria Flashcards

1
Q

¿Que es la espectofometria?

A

Medida que se basa en la capacidad que tienen las moléculas de absorber o emitir selectivamente ondas electromagnéticas de una longitud de onda específica.

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2
Q

¿Que es la absorbancia?

A

Medida de la cantidad de luz que es absorbida por la sustancia

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3
Q

¿Que es la trasmitancia?

A

Medida de la cantidad de luz que atraviesa la sustancia

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4
Q

¿En que espectro de longitud de onda se realiza la mayoria de espectrometrias?

A

200-800 nm

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5
Q

¿Cuales son las longitudes de onda de la radiacion UV?

A

200-400

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6
Q

¿Cuales son las longitudes de onda de la luz visible?

A

400-700 nm

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7
Q

¿Que es un cromoforo?

A

Son moleculas capaces de absorber la luz debido a que son conjugadas

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8
Q

¿Cual es la relación entre la energia de la luz y la absorbancia?

A

La energía de la luz UV y visible es capaz
de excitar electrones π y electrones no
enlazantes desde su estado basal a un
nivel energético mayor y en consecuencia la molécula que contiene estos electrones absorbe luz a la longitud de onda correspondiente.

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9
Q

¿Las proteinas son cromoforos?

A

No, pero se utiliza un reactivo, que le entrega color y permite la obtención de la muestra

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10
Q

¿A mayor cantidad de enlaces conjugados, es mayor o menor la capacidad de absorcion?

A

Mayor

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10
Q

¿Ejemplo de un reactivo cromoforo?

A

Azul de comassie

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11
Q

¿Que establece la ley de lambert-beer?

A

Establece que la absorbancia es directamente proporcional al numero de moleculas (aka la concentración) de la solución

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12
Q

¿Por que es mejor trabajar con la absorbancia que con la transmitancia?

A

Porque la absorbancia tiene una relación lineal con la concentracion

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13
Q

¿Cuales son los componentes de un espectrofotometro?

A
  • Fuente de luz
  • Selector de longitud de onda
  • Cubeta
  • Detector
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14
Q

¿La longitud de onda de trabajo es dependiente o independiente de la concentración de la sustancia?

A

Independiente

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15
Q

¿Cuales son los pasos para construir una curva de calibración?

A
  1. Preparación de diluciones seriadas de una solución stock del compuesto a analizar
  2. Medir en el espectrofotomero la absorbancia de cada tubo
  3. Construir la grafica
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16
Q

¿Cual es la ventaja del ensayo con absorción UV?

A

Pequeño volumen de muestra, rápido
y económico.

17
Q

¿Cual es la desventaja del ensayo con UV?

A

Incompatible con detergentes, posee alta variabilidad

18
Q

¿Cual es la ventaja del ensayo con Acido Bicinconinico?

A

Compatible con detergentes y
desnaturalizantes, baja variabilidad

19
Q

¿Cual es la desventaja del ensayo con Acido Bicinconinico?

A

Compatibilidad con agentes reductores baja o nula.

20
Q

¿Cual es la ventaja del ensayo con el metodo de Bradford?

A

Compatible con agentes reductores, rápido

21
Q

¿Cual es la desventaja del ensayo con el metodo de Bradford?

A

Incompatible con detergentes

22
Q

¿Cual es la ventaja del ensayo con Lowry?

A

Alta sensibilidad y precisión

23
Q

¿Cual es la desventaja del ensayo con Lowry?

A

Incompatible con detergentes y agentes
reductores, es un procedimiento largo

24
Q

¿Para que se utilizan los agentes reductores?

A

Estabilizar las proteinas en la solución

25
Q

¿Para que se utiliza detergente en una espectofotrometria?

A

Solubilizar proteínas de membrana

26
Q

¿Que materiales de cubeta funcionan para el espectro de luz visible?

A
  • Vidrio borosilicato
  • Plastico
27
Q

¿Que materiales de cubeta funcionan para el espectro ultavioleta?

A
  • Cuarzo
28
Q

¿Cual es la formula de absortividad?

A

A = absortividad molar x concentración de la sustancia x ancho de la cubeta

29
Q

¿De que depende la absortividad molar?

A

La longitud de onda de la luz, del disolvente y del pH.

30
Q

¿A que nos referimos cuando hablamos de coeficiente de extinción molar al hablar de concetración?

A

Cuando la concentración se expresa en moles por litro

31
Q

¿A que nos referimos cuando hablamos de coeficiente de extinción especifico al hablar de concentración?

A

Cuando la concentración se expresa en gramos por litro

32
Q

¿Cual es el limite de detección de la absorción UV?

A

0,1-100 ug/mL

33
Q

¿Cual es el limite de detección del acido bicinconinico?

A

20-2000 ug/mL

34
Q

¿Cual es el limite de detección de el azul de comassie?

A

20-2000 ug/mL

35
Q

¿Cual es el limite de detección del ensayo Lowry?

A

10-1000 ug/mL

36
Q

¿A que longitud de onda absorbe la absorción UV?

A

280 nm

37
Q

¿A que longitud de onda absorbe el acido bicinconinico?

A

562 nm

38
Q

¿A que longitud de onda absorbe el azul de comassie?

A

595 nm

39
Q

¿A que longitud de onda absorbe el ensayo de Lowry?

A

750 nm

40
Q

¿A que residuos de aminoacido se une principalmente el Azul de Comassie?

A
  • Arginina
  • Triptófano
  • Tirosina
  • Histidina
  • Fenilalanina

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