Elisa - Avidina/Biotina

Question 1

Quais hormônios são pesquisados pelo sistema avidina/biotina?

Answer 1

TSH

Insulina

Question 2

Qual o princípio do teste?

Answer 2

Após a mistura do anticorpo anti-insulina biotinilado, o anticorpo marcado com a peroxidase e um soro contendo o antígeno nativo (Insulina), a reação resulta entre o antígeno nativo e os anticorpos, para formar um complexo sanduíche solúvel (biotina-avidina; antígeno-anticorpo).

Question 3

Qual o método do teste?

Answer 3

Enzimaimunoensaio

Imunoenzimático

Question 4

Etapas da reação

Answer 4

Placa sensibilizada com avidina.

Amostra + reagente do kit (ac anti hormônio marca com a biotina → primeiro conjugado).

Avidina fixo na placa → AC com biotina se liga a avidina → hormônio do paciente se liga ao Ac c/ biotina → Ac anti hormônio marcado com enzima se liga ao hormônio do paciente.

No conjugado tem, tanto o Ac anti hormônio marcado com biotina, quanto o Ac anti hormônio marcado com a enzima.

Question 5

Qual a necessidade de métodos mais sensíveis nesses hormônios?

Answer 5

TSH e insulina são hormônios de concentração baixa, por isso precisamos de métodos com maior sensibilidade.

Question 6

Quais as etapas dos teste? (8)

Answer 6

1. Pipetar o conjugado que se liga a avidina da placa;
   
   2. Colocar a amostra com o hormônio procurado;
   3. No mesmo conjugado tem outro ac marcado com a enzima que se liga ao 1° conjugado;
   4. Incubar por 1 hora no equipamento;
   5. Lavar com tampão fosfato (PPS);
   6. Colocar cromógeno (substrato A é o TMB/substrato B é o peróxido);
   7. Enzima peroxidase do 2° conjugado (ligado ao hormonio) oxida o peróxido que vira H2O e reduz o TMB que se torna uma substancia azul;
   8. Solução stop (ácido clorídrico): deixa o Ph mais ácido e desnatura a proteína (todo o complexo), porém, o TMB é sensível ao Ph, deixando a cor amarela.

Question 7

Interferentes? - TSH

Answer 7

Consumo de biotina pelo paciente pode diminuir a dosagem dos hormônios.
Hemólise, lipemia intensa. Uso de hormônios tireoidianos e amiodarona.

Question 8

Interferentes? - Insulina

Answer 8

O soro hemolisado diminui os valores da insulina sérica. A presença de anticorpos anti-insulina em diabéticos insulina-dependentes, ou que já fizeram uso de insulina, pode alterar os valores encontrados.

Question 9

Qual o significado clinico do teste? - TSH

Answer 9

Utilizada no diagnóstico de hipotireoidismo e hipertireoidismo primário, e na diferenciação com o hipotireoidismo secundário e terciário (hipotalâmico-hipofisário).

Question 10

Qual o significado clinico do teste? - Insulina

Answer 10

Exame utilizado para avaliar a produção de insulina, diagnosticar insulinoma, e determinar a causa da hipoglicemia.
Feito junto com o exame de glicemia para avaliação da célula pancreática a partir dos Índices HOMA, e Índice BETA.

Question 11

Qual a interpretação do teste?

Answer 11

A intensidade da cor amarela é proporcional a concentração do hormônio.